Te uiuinga o te atanga irarotoroto o te hongere irahiko Hv1 tuwhera me te tirotiro honohono kua honoa.

Mauruuru koe mo te toro ki Nature.com.He iti te tautoko a te putanga tirotiro e whakamahia ana e koe mo CSS. Mo te wheako pai, ka tūtohu kia whakamahia e koe he kaitirotiro kua whakahoutia (whakawetohia ranei te aratau hototahi ki Internet Explorer).I tenei wa, ki te whakarite tautoko tonu, ka whakaatuhia e matou te papanga kaore he momo me te JavaScript. Ko te Hv1 ngaohiko-gated proton channel he matatini dimeric e rua nga rohe ngaohiko-sensing (VSDs), kei roto i ia waahanga he huarahi whakauru irahiko kuaha. ko te ahua tuwhera i roto i nga VSD e rua e mohiotia ana ka puta tahi; heoi, he iti noa te mohio mo nga tikanga o raro. Ko nga atanga Intersubunit te whai waahi nui ki nga tukanga allosteric; heoi, kare ano i kitea nga hononga pera i roto i nga hongere Hv1 tuwhera. I konei ka whakaatuhia e matou ko te 2-guanidinothiazole derivatives e aukati ana i nga Hv1 VSDs e rua i roto i te mahi tahi me te whakamahi i tetahi o enei puhui hei tirotiro mo te hononga allosteric i waenga i nga waahanga tuwhera. I kitea e matou ko te extracellular. Ko te mutunga o te kongakonga whakawhiti tuatahi o VSD ka hanga he atanga intersubunit e takawaenga ana i te hononga i waenga i nga waahi here, engari ko te rohe porowhita-poipoi kaore i te uru tika ki tenei mahi. I kitea ano e matou he taunakitanga kaha e whakahaere ana te tātari proton-tīpakohia o te hongere i te mahi tahi-aukati. . He nui nga mahi a nga hongere iraoho ngaohiko i roto i nga momo rauropi, mai i te phytoplankton ki te tangata. Ko te Hv1, ko te hua o te ira HVCN12,3.Hv1 (aka VSOP) kua whakaatuhia he whai waahi ki te tipu o te pūtau B4, te whakaputa momo hāora tauhohenga e te punaha mate mate5,6,7,8, pūtau parāoa. motiness9 me te whakaritenga pH o te rere o te mata o te rangi10. Ko tenei hongere kei roto i te maha o nga momo Overexpressed i roto i nga momo mate pukupuku penei i nga mate pukupuku B-cell4,11 me nga mate pukupuku o te uma me te tae12,13.I kitea te mahi nui o te Hv1 ki te whakanui ake i te kaha metastatic o nga pukupuku pukupuku 11, 12 .I roto i te roro, ka whakaatuhia te Hv1 na te microglia, a kua whakaatuhia tana mahi ki te whakanui ake i te kino o te roro i roto i nga tauira o te whiu ischemic. Kei roto i te pūmua Hv1 he rohe ngaohiko-whakaaro (VSD), kei roto e wha nga waahanga transmembrane e kiia ana ko S1 ki te S414. Ko te VSD he rite ki nga rohe e pa ana ki nga awaawa Na +, K + me Ca2 + me nga phosphatases ngaohiko-tairongo, penei i te CiVSP mai Ciona gutis15.I roto i enei atu pūmua, ka piri te C-terminus o S4 ki tetahi kōwae effector, te rohe pore, enzyme ranei.I roto i te Hv1, ka hono a S4 ki te rohe porowhita (CCD) kei runga i te taha cytoplasmic o te membrane. .Ko te hongere he matatini dimeric kei roto e rua nga VSD, kei roto i ia waahanga he huarahi whakauru iraoho kuahaa16,17,18.I kitea enei waahanga iti e rua o te Hv1 e tuwhera tahi ana19,20,21,22, e kii ana ka purei te hononga allosteric me nga taunekeneke-a-roto. he mahi nui i roto i te tukanga kuti.Ko te atanga i waenga i nga waahanga iti i roto i te rohe porowhita porowhita he pai te tautuhi na te mea kei te waatea nga hanganga karaihe o nga waahi motuhake e rua22,23. I tetahi atu taha, ko te atanga i waenga i nga VSD i roto i te membrane kaore i te Ko te hanganga karaihe o te Hv1-CiVSP chimeric pūmua e kore e whakarato i nga korero mo tenei atanga, na te mea ko te whakahaerenga trimeric o te hongere whakahiato ka puta mai i te whakakapinga o te Hv1 CCD taketake e te rewena leucine zipper GCN424. Ko tetahi rangahau tata mo te whakahaere o nga waahanga o te hongere Hv1 i whakatauhia e rua nga helice S4 e whakawhiti ana ki te CCD kaore he raruraru nui o te hanganga tuarua, ka puta mai he waahi roa ka timata mai i te membrane me te kaupapa ki roto i te cytoplasm. Ko tenei rangahau e kii ana kia whakapiri nga Hv1 VSDs tetahi ki tetahi i te taha o te wahanga S4.Heoi, kua whakaarohia e etahi atu rangahau etahi hononga rereke i waenga i nga VSD.Kei roto i enei hononga nga waahanga S1 17, 21, 26 me nga pito o waho o te wahanga S2 21.He take pea mo te tautohetohe Ko nga hua o enei rangahau ko te hononga allosteric i waenga i nga VSD i tirotirohia e pa ana ki te tukanga kuti, e whakawhirinaki ana ki te kati me te tuwhera, a ka rereke te atanga i waenga i nga VSD i nga rereke rereke o te ahua o te ahua. I konei, i kitea e matou ko te 2-guanidinothiazole te aukati i nga hongere Hv1 ma te hono honohono ki nga VSD tuwhera e rua, ka whakamahia tetahi o nga pūhui, 2-guanidinobenzothiazole (GBTA), ki te tirotiro i te taunekeneke i waenga i nga waahanga iti i te whenua tuwhera. atanga.I kitea e matou ka taea te whakaatu pai te kurupae here GBTA e te tauira ine i roto i te herenga o te aukati ki tetahi waahanga iti ka hua te pikinga o te hononga here o te waahanga iti e tata ana. I kitea ano e matou nga toenga D112, whiriwhiringa whiriwhiringa mo te hongere 27, 28 me te wahi o te pae herenga pärönaki guanidine 29 te whakahaere i te mahi tahi here GBTA. E whakaatu ana matou kei te mau tonu te herenga mahi i roto i te dimer Hv1, kei te wehe te CCD i te waahanga S4, e kii ana ko te atanga intersubunit i roto i te CCD kaore e tika. takawaenga hononga allosteric i waenganui i nga pae here GBTA.He rereke, ka kitea ko te wahanga S1 he wahanga o te atanga i waenga i nga waahanga iti me te whakatakoto i te whakaritenga o nga VSD e tata ana me te pito taapiri o te S4 helix kei tawhiti atu i te pokapū o te dimer hei tuku ko te wahanga S1 kia noho tuwhera. He mea whai hua te aukati ngota ngota iti o te Hv1 hei raau mate pukupuku me te neuroprotective agents.Heoi, tae noa ki tenei ra, he torutoru nga puhui kua kaha ki te aukati i te awa30,31,32,33. I roto ia ratou, 2-guanidinobenzimidazole (2GBI, pūhui [1] i te Fig .1a) me ona pärönaki i kitea ki te aukati i te VSD29,32 te urunga o nga protons i roto i te hongere. Ko te herenga o aua puhui e whakaarotia ana ka puta takitahi i roto i nga waahanga iti e rua.2-guanidinobenzothiazole (GBTA, pūhui [2] i te Whakaahua 1a) i whakaatuhia i mua ki te aukati i te Hv1 tata rite ki te 2GBI i te wa i whakamatauria i te kukū o te 200 μM (Whakaahua 1b). I tirotirohia e matou etahi atu pärönaki thiazole ka kitea ko etahi o ratou i aukati i te hongere he rite, nui ake ranei te kaha atu i te GBTA (Fig. 1 me te Tāpiri. kuputuhi) .I whakatauhia e matou nga pihi whakautu kukū o te whaa thiazole derivatives (GBTA and compounds [3], [6] and [11], Fig. 1c) a ka kitea he teitei ake i era o te 2GBI.The Hill coefficients (h) o te pärönaki thiazole mai i te 1.109 ± 0.040 ki te 1.306 ± 0.033 (Fig. 1c me te Whakaaturanga Tāpiri. te pae here,29,32 i whakaaro matou ko te herenga o te pärönaki thiazole ki tetahi waahanga iti ka taea te whakaniko i te herenga o te ngota ngota aukati tuarua ki te waahi tata. ako ano te tikanga o te whakakotahitanga me te whakamahi i te 2GBI hei tohu mana kino. (a) Pūhui whakamātautau: [1] Tohutoro Hv1 inhibitor 2-guanidino-benzimidazole (2GBI).[2] 2-guanidino-benzothiazole (GBTA), [3] (5-trifluoromethyl-1,3-benzothiazol-2-yl)guanidine, [4] naphtho[1,2-d][1, 3] Thiazol-2-yl -guanidine, [5](4-methyl-1,3-thiazol-2-yl)guanidine, [6](5-bromo-4-methyl-1,3-thiazol- 2-yl)guanidine, [7] famotidine, [8] 2-guanidino-5-methyl-1,3-thiazole-4-carboxylic acid ethyl ester, [9] 2-guanidino-4-methyl Ethyl-1,3-thiazole-5-carboxylate, [10 ](2-guanidino-4-methyl-1,3-thiazol-5-yl)ethyl acetate, [11]1-[4-(4 -Chlorophenyl)-1,3-thiazol-2-yl]guanidine, [ 12]1-[4-(3,4-dimethoxyphenyl)-1,3-thiazol-2-yl]guanidine .(b) Te aukati i te mahi Hv1 tangata e nga guanidinothiazoles kua tohua me te huinga tohutoro 2GBI (pao puru-matomato) .I inehia nga au iraoho Hv1 i roto i nga papa o roto-waho o Xenopus oocytes hei whakautu ki te whakahekenga mai i te kaha pupuri o -80 mV ki te +120 mV. I whakauruhia ia aukati ki te pati i te kukū o te 200 μM.pHi = pHo = 6.0 .Ko nga raraunga ko te tikanga ± SEM (n≥4).(c) Ko te aukati i te kukū o te Hv1 tangata e nga pūhui [2], [3], [6] me [11].Ko ia tohu te tohu o te aukati toharite ± SD o 3 ki te 15 inenga. Ko te raina he Hill pai i whakamahia ki te tiki i nga uara Kd e kitea ana i te Ripanga Tāpiri 1. I whakatauhia nga whakareatanga o te puke mai i nga urunga i korerotia i te Whakaaturanga Tāpiri 1: h(1) = 0.975 ± 0.024 h(2) = 1.306 ± 0.033, h(3) = 1.25 ± 0.07, h(6) = 1.109 ± 0.040, h (11) = 1.179 ± 0.036 (tirohia nga Tikanga). (a,b) Ko nga huinga 2GBI me te GBTA i whakakorehia te Hv1 dimeric me te monomeric i roto i te tikanga kukū-whakaaro. Ko ia tohu te tohu o te aukati ± SD o te 3 ki te 8 inenga me te pihi he Hill fit. i whakatauhia nga histograms whakauru mai i nga urunga e whakaatuhia ana i te Tāpiritanga Figs 3 me te 4. Ko te whakautu kukū o te GBTA e whakaatuhia ana i te (a) he rite ki tera i te Whakaahua 1c.Tirohia te Ripanga Tāpiri 1 mo nga uara Kd kitea.(c) Te whakatauira o te te herenga tahi o te GBTA ki te dimeric Hv1. Ko te raina pango totoka e tohu ana i te pai ki nga raraunga whakamatautau ma te whārite (6), e whakaahua ana i te tauira here e whakaatuhia ana i te (d). -nga pihi taurite whakawehenga o nga takahanga here tuatahi me te tuarua, ia (Sub 1: OO + B ⇄ BO*, Kd1 = 290 ± 70 μM; Sub 2: BO* + B ⇄ B*O*, Kd2 = 29.3 ± 2.5 μM ).(d) Ko te hoahoa hoahoa o te kaupapa e whakaarohia ana o te poraka Hv1. Mo te GBTA, ko te here ki tetahi waahanga tuwhera ka whakanui ake te hononga o te waahanga tuwhera tata (Kd2 0.05) te hekenga o te Hill coefficient o GBTA herea ki nga awa GGG i whakaritea ki te momo mohoao (Fig. 5c), e kii ana ahakoa tana mahi ki te pupuri i te He mea nui nga waahanga iti e rua, engari kaore a CCD e takawaenga tika i nga hononga honohono i waenga i nga waahi here GBTA. (a) Hoahoa hoahoa o te dimer Hv1 me te huringa triglycine i te pito o roto o te S4 i hangaia hei whakararu i te hononga-a-waa-roto i takawaenga e te cytoplasmic coiled-coil domain (pere kikorangi). kua tohuhia nga whakarereketanga, i hangaia hei whakamatautau i nga wahanga S1 e uru ana ki te hono i waenga i nga waahanga iti (pere kikorangi).(c–h) 2GBI (cyan) me te GBTA (whero pouri) ka aukati i nga hanga kua tohuhia i runga i te ahua o te kukū. ± SD o 3 ki te 10 inenga. Ko te anau he Hill pai i whakamahia ki te tiki i nga uara Kd (tirohia te Ripanga Tāpiri 1). Ko nga whakareatanga o nga puke i roto i nga histograms interpolated i whakatauhia i whakaahuatia i te waahanga Tikanga (tirohia nga Pikitia Tāpiri 3 me te 4). Ko te Hv1 WT e whakaatuhia ana hei rarangi taia. Ko nga wheturangi e whakaatu ana i nga rereketanga nui i waenga i te mutant me te WT (p 0.05, Fig. 5d,i). ). I tetahi atu taha, ko te whakarereketanga D123A i tino whakaitihia te whakarea Hill o GBTA (p 0.05/14). I te mea ko te whakakore i te utu i te tuunga 123 i runga i nga waahanga e rua ka puta he huringa kaha i roto i te mahi tahi here GBTA, i te mea he iti noa te paanga o te hurihanga o te utu i runga i nga waahanga e rua, i whakaroahia e matou te tātaritanga ki te whakauru kotahi noa iho me te hongere hurihuri o te utu. i hangaia nga dimer hono-Hv1 me te whakakapi D123R i roto i te waahanga C-terminal (Fig. 5b) me te ine i te aukati-whakautu a te GBTA me te 2GBI. I kitea e matou ko te whakarea Hill o te GBTA e herea ana ki nga awa WT-D123R i tino teitei ake i tera. o te momo mohoao Hv1 (p 0.05). I kitea ano e matou i te kore o te βME, ko te pikinga o te Hill o te GBTA e herea ana ki te D112E I127C Hv1 dimer i tino nui ake i tera i whanganga i te aroaro o nga kaihoko whakaheke (Fig. 6e me te Tāpiri 4), e kii ana ko te D112E mutation kihai i whakakore i te pikinga o te mahi tahi here GBTA i puta mai i te hononga whakawhiti o te cysteine ​​​​127. Ko te whakarea Hill o te 2GBI e herea ana ki te D112E, I127C Hv1 dimers kaore ano i tino pa ki te whakarereketanga D112E (Whakaahua 1).6d me te taapiri. Whakaahua 3). Ko enei kitenga e kii ana ka whakareihia te herenga GBTA e te taunekeneke i waenga i nga pito o waho o nga kongakonga S1 i roto i nga waahanga Hv1 e patata ana ma nga tauwhitinga hiko ataahua, na roto ranei i te hanganga o nga here kovalent i waenga i nga cysteine ​​kua whakakapia Ko te hononga o te Allosteric i waenga i nga waahi ka piki ake ka hua ki te mahi tahi. Ahakoa ka taea te whakakore i te paanga o nga tauwhitinga hiko ataahua i runga i te mahi tahi ma te whakarereke D112E, kaore e taea e te paanga o nga here kovalent. I roto i ta maatau tirotirohanga mo te waahi matū e waatea ana mo te herea o te guanidine derivatives ki nga awa Hv1, i kitea e matou ko te 2-guanidinothiazoles penei i te GBTA he kaha ake te whakawhirinaki ki te 2-guanidinobenzimidazoles (Fig. 1c). me nga waahana monomeric (Fig. 2a, b) me te waahana dimeric i herea ai tetahi waahanga i mua ki te kaitautoko (Fig. 4) i arahina mai ki te whakatau ko te whakakore i te Hv1 e GBTA Ko te mahi he tukanga mahi tahi, a Ko te kitenga e herea ana te GBTA ki te hongere tuwhera, pera i te whakaatu i mua mo te 2GBI32 pūhui e pa ana, e tohu ana ka taea te aromatawai i te hononga allosteric i roto i te ahua tuwhera.Ko ta tatou tauira here mahi tahi. i taea e te whakariterite i te aukati o te HV1 na GBTA (Fig. 2c) me te whakamaarama i nga ahuatanga rereke o te 2GBI me te GBTA i muri i te whakatikatika membrane. Ko te nui o te pukepuke nui ka taea te whakatutuki i roto i te pūmua allostostostostolic me nga papaa e rua (penei i te hv1) he 2.11 i te 1,88 i HV1 I127C.The Ko te kaha kore utu, te rereketanga i waenga i te taapiri noa o nga waahi koreutu me te tino nui o te ahua o te HV1 Wild-Momo me te keehi o te HV1 I127C.Te herea Ko te Oxygen ki te hemoglobin ko te tauira tino rongonui me te pai o te komoglobin a te tangata (he tetramer tangata me te maha o nga waahanga taapiri mai i te 2.56 ki te 3.64 KCAL / MCAL / Mol, i runga i te whakamatautau whakamātautau38.Katahi atu, mo te taha o te GBTA e herea ana ki te mate o te O2. I roto i ta maatau tauira synergy, ko te taapiri o nga kohinga GBTA ki tetahi o nga waahanga o te taha o te taha o te taiao e rua kua puta mai i te huihuinga tuatahi. Ko nga huringa i roto i nga taunekeneke i waenga i nga waahanga o te subunits.in ki enei huringa, ka huri i nga waahanga taapiri, ko te S1 Asparte D112 I whakaatuhia i mua ko te waahanga o te huarahi Proton Proton HV1 me te mahi hei tātari27,28. Ko ta maatau hua e whakaatu ana ko te whiriwhiringa i roto i nga waahanga HV1 e rua kua honoa ki te whenua tuwhera. I runga i te hanganga karaihe o te HV1-Civgial Stimera.Suctions mo te hono allostostostoric e pa ana ki te taapiri o te S1 e whakaatuhia ana me nga pere pango. (a) Ko te matatini o te HV1 VSD.Bad i runga i te karaihe karaihe o te HV1-Chimera, ka whakaatuhia nga waahanga matua ki te cylindrical.I te mutunga o nga waahanga o te S4 (kaore i whakaatuhia). Ko nga waahi kua tohua mo te GBTA kua whakaatuhia ko Ovals nga Awals.Black pere e tohu ana i nga huarahi katoa i waenga i nga waahanga taapiri e rua. I roto i te rua o nga whirihoranga rereke e kitea ana mai i te taha taapiri o te membrane rererangi o te membrane. Te wehenga o nga pito o waho o nga heete o nga S4 e rua, ka whakaputa i te whakaritenga e whakaatuhia ana i runga i te taha matau. (C) I roto i te whirihoranga dift i kitea i te 4G80 Crystal Cosestal Shing.Pomostion P140 i roto i nga Civ1 e pa ana ki te HV1. Ko ta maatau hua e whakaatu ana ko te taunekeneke i waenga i te toenga 123 (123d / 123d ranei te 123R / 123R / 123R) , Ka piki te mahi (Fig. 5G) Ko te whakamaarama ko te paanga o te aukati i te toenga hydrophobic i roto i te toenga hydrophilic na te whakakore i nga toenga o te D123 e kii ana i te mutunga o te ranunga alvent Te tūnga D171 o Ciona Gutis Ci-HV1 (Ko te hono ki te HV1) ka piki haere te tangata HV1) i runga i te whakahohenga, kei te tautoko i te whakapae ko te D123 kei roto i te taiao hydrophilic i te whenua tuwhera. E mohiotia ana e te HV1 Cannels i roto i nga whakawhitinga maha ka kitea i runga i te riipene o te ci-hv1 e huri ana i te hongere e whakaoho ana , me te whakawhiti motuhake e pa ana ki te whakatuwhera i te huarahi e rua i te wahanga o te huringa ngaohiko. Ko te haangai o te tohu flurescent e rite ana ki te aroaro o nga taunekeneke hiko i waenga i nga toenga o te D171 o nga waahanga o te tau. me te takawaenga o te hononga allstostostostostostoric i waenga i nga papanga taapiri GBTA. Fujiwara et al25 i kii ko te hononga diler o te rohe o te cytoplasmic e rua nga uaua o te cyrsbeunit i runga i te Cysteine ​​Cryctal-Liming Tātaritanga Cysteine Ko te tātaritanga katoa o te rohe e hono ana i te S4 Helix me te CCD.I te ngaro o te transmembrane pH Na reira, ko te atanga S4-S4 e kitea ana e whakaatu ana i te whirihoranga tuuturu-a-rohe i kitea nga taunakitanga mo te whakauru o te S1 me te S2 i roto i nga hononga o te S1. Whenua Katia, he whakaaro rite ki nga kitenga o Mony et al. S1 neke 39 i te wa e pa ana. I konei, ka whakaatuhia e matou, i te whenua tuwhera, he tata te nuinga o nga taunekeneke a te S1-S4, he tawhiti rawa nga mahi a S4-S4 Haunga tetahi ki tetahi ki te whakawhitiwhiti korero. Ma o maatau kitenga (Fig. 7B, Paewhiri matau) Ahakoa ko te Cizv Enzyme e kiia ana he monomer, ko te hanganga karaihe o te VSD motuhake e mau ana i te S1 S1 i roto i tenei waa, ka rite te whirihoranga katoa Mo te HV1 (Fig. 7c) .Ko te toenga tata mai i te taha o te tau 149 (piki 7C i te HV1.Ko te rite ki te HV1. Na chovisp E kii ana a Civizers e kii ana nga VSDs o enei pūmua he hiahia taikaha hei hanga i tetahi atanga i te mutunga o nga taapiri S1 o S1. Ko te mea nui o te HV1 i te Whakahohe Pūmanawa Whakawhanake te mea e whakaatuhia ana te mate tarukino. Te oranga i roto i nga turoro me te uma o te pukupuku o te mate pukupuku 12 ranei e whakaarohia ana kia uru ki te B-Cell Malgerces. Whakatuwherahia te Subunit HV1, e arahi ana ki te piki haeretanga o te aukati i te whanaketanga o nga raau tino kaha e whaaia ana i nga awa HV1. Ko te mutagenesis o te papaanga a te HV1 i mahia te whakamahi i nga tikanga PCR paerewa.I te HV1SCCSP i hangaia e te HV1 i whakakapihia e te HV1 e toe ana 1-13 me te 240-576 Ko te C-Squunit e hono ana ki te N-SubTgsgsgsggsgsggsgsgsgsgsgs binder. T7 MmesASASA MMACSINE MMACSINE MMACHINE MMACHINE MMACSINE MMACSINE MMACSINE MMACSINE MMACSINE MMACSINE MMACSINE .1 Mai i te koiora koiora.Following RNA i puritia i roto i te reo ND96, 2 mm alcl, 1 mm mmcl, 1 mm te pyruvate, 100 mm pyruvate, 100 μg / mL 7.2 18 ° C . 2-Guanidino-Benzimidazole [1], 2-Guanidino-Benzothiazole [2], 4], 4], 4], 4], 4], 4], 4], 4], 4], 4], 4], 4], -Ko te-2-YL) Guanidine) [6], Ethyl 2-Guanidino-1,3-Thiazole-1,3], Ethyl 2-Guanidino-1,3-Thizole- 5-carboxylate [9] me (2-Guanidino-4,3-Thiazol-1,3-Thizol-5-YL) mai i Sigma-Aldrich.Famotidine [7] mai i te MP Biomedical.1- [4 - (4-Chlorophenyl) -1,3-Thiazol-2-YL] Guanidine [11] me 1- 4,4-dimethoxyphelnyl) -1,3- Thiazol-2-YL] Guanidine [12] Mai i te Matrix Sciencific.Thes Ko te mea tino pai te horoi i te DMSO i te DMo maroke ki te whakaputa i te otinga o te 100 mm i te waa e hiahiatia ana i te kohinga whakamutunga. neke atu i te 99% te pokekore. Ki te whakatārewatanga o te 2-amino-4- (trifloromethyl) benzenethiol hydrochloride (1.02 g, 4.5 mmol) i te 25 ml o te hydrochloric waikawa (380 mmol), me te ranunga heterogeneus i whakahoutia ki te whakaohooho kaha mo te 4 haora.Kua matara te ranunga o te rūma ki te 10n mo te wai makariri (3 × 50 ml), kua maroke i roto i te oumu (3 65 ° C) mo nga haora maha, ka whakahou ano i te Ethyl Acetate / Petroleum eter kia hoatu he totoka ma (500 mg, 48%); MP 221-222 ° C (Maama 225-226 ° C) 45; 1H NMR (500 MHz, DMSA-D6): δ [PPM] = 7.25 (tino Stur), 7.40 (D, 1 h, j = 8.73 (s, 1 h), 7.92 (D , 1 h, j = 8.1 hz) .13c nmr (200 mhz, dmso-d6): δ = 114.2 (D, J = 1.5, 124.6 (Q, J = 272 HZ), 126.1 (q, J = 272 HZ) = 31.6 HZ), 134.,2.,1.Hrms (ESI): M / Z) +: 261.0416 : 261.0419. Naphtho [1,2-d] Thiazol-2-amine (300 mmom), 1.5 mmol), i whakamutua kia 200 ° C i roto i te pati hinu i te cyeamide. 1.0 ML Scal.To te pūhui wera i whakauruhia te waikawa hydrochloric ka tiakina te ranunga hinu ki te 2 meneti, i te nuinga o te waa, ko te ranunga tauhohenga i te pāmahana o te rūma me te rauemi whakakao i pakaruhia ki nga waahanga iti ka horoia ki te wai hei whakarato i te totoka ngota kowhai kowhai. (38 mg, 10%) MP 246-250 ° C; 1H NMR (500 MHz, DMSA-D6, DMO): δ [Ppm] = δ , J = 8.6 Hz), 7.89 (D, 1 h, J = 8.6 Hz), 8.2 Hz), 8.2 (D, 1 h, 1. MHz, DMSO-D6): δ = 119.9, 123.7, 123.4, 126.5, 126.7, 148.7, 128.7, 112.1.7, 163. , kitea: 243.0704. I whangangahia nga kauhau i roto i nga papa o roto me nga waahanga o waho e whakaatu ana i nga hanganga rereke o te 200b i te axop10 soft.intralular ) A waikawa ethanesulnolconic (mes), 30 mm tetraetylammorium (5 mm te timleyne glycol-bis (2-aminothyl-bis (2-aminothyl) -n, n ', n'-tordacetic waikawa ph 6.0 me te inenga hydroxide.Ko nga inenga i mahia i te 22 ± 2 ° C.Ko te pipette kei te whakaeke i te 1 khz, i akohia i te 5 khz me te tātarihia me te Classfit10.2 ) me te timatanga8.1 (taketake). Ko nga rongoā kei roto i nga momo rereketanga o te HV1 Alifitor me etahi keehi i whakauruhia ki roto i te punaha ma te hono ki te punaha o te VC-6 i tukuna.) Ko te huringa o te Trantistor) waitohu.Rapid Whakamatau i mahia ma te pene pene-ngongo maha () me te tohu tuku kuputuhi maha. +120 MV Depolarzing Pulse.gv i mahia i mahia i mua i te korero i te -40 mv i muri i te -20 m2 i muri i te huringa o te gaventages mai i te -220 mv ki te +120 mv. I whakamahia kia tika mo te pirau o naianei 18 Na te Huringa Hill: kei hea te kukume o te unhibitor i ahau ko h ko te pukepuke coelet.Ko te tātai i te kaha o te puke, te whakariterite (2)