Пурсиши интерфейси байнисоҳаи канали протонии Hv1 бо зондҳои аллостерӣ пайвастшуда

Ташаккур ба шумо барои боздид аз Nature.com. Версияи браузере, ки шумо истифода мебаред, дастгирии маҳдуди CSS дорад. Барои таҷрибаи беҳтарин, мо тавсия медиҳем, ки браузери навшударо истифода баред (ё ҳолати мутобиқатро дар Internet Explorer хомӯш кунед). Дар ҳамин ҳол, барои таъмини дастгирии давомдор, мо сайтро бе сабкҳо ва JavaScript намоиш медиҳем. Канали протони бо шиддат басташудаи Hv1 як маҷмааи димерӣ мебошад, ки аз ду домени ҳассоси шиддат (VSDs) иборат аст, ки ҳар кадоми онҳо роҳи гузариши протони дарвозадорро дар бар мегирад. Димеризатсия аз ҷониби домени печонидашудаи ситоплазми назорат карда мешавад. Гузариш аз ҳолати пӯшида ба ҳолати кушода дар ҳарду VSD маълум аст, ки ба таври муштарак рух медиҳанд; аммо, дар бораи механизмҳои асосӣ кам маълум аст. Интерфейси байнисоҳавӣ дар равандҳои аллостерӣ нақши калидӣ мебозад; аммо ин гуна интерфейсҳо дар каналҳои кушодаи Hv1 муайян карда нашудаанд. Дар ин ҷо мо нишон медиҳем, ки ҳосилаҳои 2-гуанидинотиазол ду Hv1 VSD-ро ба таври муштарак маҳкам мекунанд ва яке аз ин пайвастагиҳоро ҳамчун зонд барои пайвастани аллостерӣ байни зербахшҳои кушода истифода мебаранд. Мо дарёфтем, ки охири порчаи якуми трансмембрании VSD интерфейси байнисохторкуниро ташкил медиҳад, ки барои пайвастшавӣ байни сайтҳои ҳатмӣ миёнаравӣ мекунад, дар ҳоле ки домени печонидашуда дар ин раванд мустақиман иштирок намекунад. Мо инчунин далели қавӣ пайдо кардем, ки филтри протон-селективии канал ҳамкории бастани блокаторро назорат мекунад. . Каналҳои протонии бо шиддат басташуда дар организмҳои гуногун, аз фитопланктон то инсонҳо нақши муҳим мебозанд1. Дар аксари ҳуҷайраҳо ин каналҳо дар ҷараёни протон аз мембранаи протон миёнаравӣ мекунанд ва фаъолияти NADPH оксидазаро танзим мекунанд. Hv1 аст, ки маҳсули гени HVCN12,3.Hv1 (ва дигараш VSOP) дар паҳншавии ҳуҷайраҳои B4, истеҳсоли намудҳои реактивии оксиген аз ҷониби системаи иммунии модарзодӣ5,6,7,8, ҳуҷайраҳои нутфа нақш мебозад. ҳаракати9 ва танзими рН-и моеъи сатҳи роҳи нафас10. Ин канал аст, ки дар якчанд OverExpressed дар намудҳои саратон ба монанди malignancies B-ҳуҷайраҳои ва саратони сина ва колоректал 12,13. Фаъолияти аз ҳад зиёд Hv1 барои баланд бардоштани потенсиали метастатикии ҳуҷайраҳои саратон ёфт 11, 12 .Дар мағзи сар, Hv1 ифода карда мешавад. аз ҷониби microglia ва фаъолияти он нишон дода шудааст, ки осеби мағзи сарро дар моделҳои сактаи ишемикӣ шадидтар мекунад. Протеини Hv1 дорои домени ҳассоси шиддат (VSD) мебошад, ки аз чор сегменти трансмембранӣ бо номи S1 то S414 иборат аст. VSD ба доменҳои мувофиқи каналҳои ба шиддат басташудаи Na+, K+ ва Ca2+ ва фосфатазаҳои ба шиддат ҳассос, ба мисли CiVSP аз Ciona gutis15.Дар ин сафедаҳои дигар, C-терминуси S4 ба модули эффектор, домени сӯрохӣ ё фермент пайваст карда мешавад. Дар Hv1, S4 ба домени печонидашуда (CCD), ки дар тарафи ситоплазми мембрана ҷойгир аст, пайваст карда мешавад. .Канал як маҷмааи димерӣ аст, ки аз ду VSD иборат аст, ки ҳар кадоми онҳо як роҳи гузариши протонҳои дарвозабон доранд16,17,18. Ин ду зербахши Hv1 ба таври муштарак кушода шуданд19,20,21,22 ва аз он шаҳодат медиҳад, ки пайвастагии аллостерӣ ва мутақобилаи байнишоҳидҳо бозӣ мекунанд. Интерфейси байни зербахшҳо дар дохили домени печонидашуда хуб муайян карда шудааст, зеро сохторҳои кристаллии ду домени ҷудошуда дастрасанд22,23.Аз тарафи дигар, интерфейси байни VSDҳо дар дохили мембрана нест. хуб фаҳмида мешавад. Сохтори булӯрии протеини химерии Hv1-CiVSP дар бораи ин интерфейс маълумот намедиҳад, зеро ташкили тримерикии маҷмааи канали кристаллшуда метавонад дар натиҷаи иваз кардани ХВ1 CCD-и модарӣ бо зипер лейцини хамиртуруши GCN424 натиҷа диҳад. Тадқиқоти охирини созмони зербахши канали Hv1 ба хулосае омад, ки ду спирали S4 ба CCD бе вайроншавии шадиди сохтори дуюмдараҷа мегузаранд, ки дар натиҷа чархҳои дарозе, ки аз мембрана оғоз мешаванд ва ба ситоплазма ворид мешаванд. ин тадқиқот пешниҳод мекунад, ки Hv1 VSD-ҳо дар баробари сегменти S4 бо ҳам тамос мегиранд. Аммо, таҳқиқоти дигар интерфейсҳои алтернативии байни VSD-ҳоро пешниҳод кардаанд. Ин интерфейсҳо сегментҳои S1 17, 21, 26 ва ақсои берунии сегменти S2 21-ро дар бар мегиранд. Сабаби эҳтимолии ихтилофи ихтилоф. Натиҷаҳои ин таҳқиқотҳо ин аст, ки пайвастагии аллостерикӣ байни VSDҳо дар робита бо раванди дарвоза, ки аз ҳолати пӯшида ва кушода вобаста аст ва интерфейси байни VSDҳо метавонанд дар тағирёбии ҳолати гуногуни конформатсия фарқ кунанд. Дар ин ҷо мо дарёфтем, ки 2-гуанидинотиазол каналҳои Hv1-ро бо роҳи синергетикӣ ба ду VSD-и кушода монеъ мекунад ва яке аз пайвастагиҳо, 2-гуанидинобензотиазол (ГБТА) -ро барои санҷидани таъсири мутақобилаи байни зерқисмҳо дар ҳолати кушод истифода бурд. интерфейс.Мо дарёфтем, ки каҷи ҳатмии GBTA-ро бо модели миқдорӣ хуб тавсиф кардан мумкин аст, ки дар он пайвастшавии ингибитор ба як зербахш боиси афзоиши наздикии ҳатмии зербахши ҳамшафат мегардад. Мо инчунин дарёфтем, ки боқимондаҳои D112, филтрҳои интихобӣ барои канали 27, 28 ва қисми сайти ҳатмӣ ҳосили гуанидин 29 назорати GBTA ҳатмӣ cooperativity.Мо нишон медиҳем, ки ҳатмии кооператив дар dimer Hv1 нигоҳ дошта мешавад, ки дар он CCD аз сегменти S4 ҷудо мешавад, ки ишора мекунад, ки интерфейси intersubunit дар CCD тавр бевосита нест, Баръакси ин, мо мефаҳмем, ки порчаи S1 қисми интерфейси байни зерқисмҳо мебошад ва ҷойгиркунии VSD-ҳои ҳамшафатро бо охири берун аз спирали S4 аз маркази димер дуртар пешниҳод мекунад. порчаи S1 дар ҳолати кушода бошад. Ингибиторҳои хурди молекулавии Hv1 ҳамчун доруҳои зидди саратон ва агентҳои нейропротекторӣ муфиданд. Аммо, то имрӯз, чанд пайвастагиҳо тавонистанд каналро боздоранд30,31,32,33. Дар байни онҳо 2-гуанидинобензимидазол (2GBI, пайвастаги [1] дар расм 1a) ва ҳосилаҳои он муайян карда шуданд, ки гузариши VSD29,32 протонҳоро тавассути канал манъ мекунанд. Пайвастшавии чунин пайвастагиҳо дар ду зербахши кушода мустақилона ба амал меоянд. ки қаблан нишон дода шуда буд, ки Hv1-ро тақрибан ба мисли 2GBI ҳангоми санҷиш дар консентратсияи 200 мкм (Расми 1б) бозмедорад. матн).Мо хатҳои вокуниши консентратсияи чор ҳосилаҳои тиазолро муайян кардем (ГБТА ва пайвастагиҳо [3], [6] ва [11], расми 1c) ва дарёфтем, ки онҳо нисбат ба коэффисиентҳои 2GBI.The Hill (h) нишебтаранд. ҳосилаҳои тиазол аз 1,109 ± 0,040 то 1,306 ± 0,033 буд (расми 2). 1c ва Расми иловагии 1). Баръакси ин, коэффисиенти Hill барои 2GBI 0,975 ± 0,024 29 буд, расми 2а ва расми иловагӣ. 1). Коэффисиенти Hill болотар аз 1 ҳамкории ҳатмиро нишон медиҳад. Зеро ҳар як зербахши Hv1 ингибитори худро дорад. макони ҳатмӣ,29,32 мо ба хулосае омадем, ки пайвастани ҳосилаи тиазол ба як зербахш метавонад пайвастагии молекулаи ингибитори дуюмро ба зершӯъбаи ҳамсоя тақвият диҳад. ГБТА пайвастагии озмоишӣ бо коэффисиенти баландтарини Hill буд. Бинобар ин, мо ин пайвастагиро интихоб кардем, то омӯзиши минбаъдаи механизми синергияи ҳатмӣ ва истифода 2GBI ҳамчун назорати манфии истинод. (a) Пайвастҳои санҷишӣ: [1] Истинод ингибитори Hv1 2-гуанидино-бензимидазол (2GBI).[2] 2-гуанидино-бензотиазол (ГБТА), [3] (5-трифторметил-1,3-бензотиазол-2-ил) гуанидин, [4] нафто[1,2-д][1, 3] Тиазол-2-ил -гуанидин, [5](4-метил-1,3-тиазол-2-ил)гуанидин, [6](5-бромо-4-метил-1,3-тиазол- 2-ил)гуанидин, [7] фамотидин, [8] 2-гуанидино-5-метил-1,3-тиазол-4-кислотаи карбоксил эфири этил, [9] 2-гуанидино-4-метил этил-1,3-тиазол-5-карбоксилат, [10] ](2-гуанидино-4-метил-1,3-тиазол-5-ил)этил ацетат, [11]1-[4-(4-Хлорофенил)-1,3-тиазол-2-ил]гуанидин, [ 12]1-[4-(3,4-диметоксифенил)-1,3-тиазол-2-ил]гуанидин.(б) Моҳияти фаъолияти Hv1 инсон аз ҷониби гуанидинотиазолҳои зикршуда ва пайвастагии истинод 2GBI (барҳои кабуд-сабз) Ҷараёни протони .Hv1 дар лавҳаҳои дарун берун аз ооцитҳои Xenopus дар посух ба деполяризатсия аз потенсиали нигоҳдории -80 мВ то +120 мВ чен карда шуданд. Ҳар як ингибитор ба ванна дар консентратсияи 200 μM.pHi = pHo = 6.0 илова карда шуд. .Маълумотҳо миёна±SEM (n≥4) мебошанд.(c) Ингибсияи консентратсияи Hv1-и инсон аз ҷониби пайвастагиҳо [2], [3], [6] ва [11]. Ҳар як нуқта монеаи миёнаи ± SD 3-ро нишон медиҳад. то 15 андозагирӣ. Хат як мувофиқати Hill мебошад, ки барои ба даст овардани арзишҳои намоёни Kd дар Ҷадвали иловагии 1 оварда шудааст. Коэффисиентҳои Ҳил аз мувофиқатҳое, ки дар расми иловагӣ 1 оварда шудаанд, муайян карда шудаанд: h(1) = 0,975 ± 0,024 h(2) = 1,306 ± 0,033, h (3) = 1,25 ± 0,07, h (6) = 1,109 ± 0,040, h (11) = 1,179 ± 0,036 (ниг. Усулҳо). (a,b) Пайвастагиҳои 2GBI ва GBTA Hv1-и димерӣ ва мономериро ба тариқи вобаста ба консентрат бозмедорад. Ҳар як нуқта монеаи миёнаи ± SD аз 3 то 8 ченкуниро нишон медиҳад ва каҷ мувофиқи Hill аст. Коэффисиентҳои Hill (h) дар нишон дода шудаанд. гистограммаҳои воридшуда аз мувофиқатҳое, ки дар расмҳои иловагӣ 3 ва 4 оварда шудаанд, муайян карда шуданд. Ҷавоби консентратсияи GBTA дар (a) ҳамон тавре аст, ки дар расми 1c нишон дода шудааст. Барои арзишҳои намоёни Kd ба Ҷадвали иловагии 1 нигаред. пайвасти кооперативии GBTA ба dimeric Hv1. Хатти сиёҳи сахт мувофиқатро ба маълумоти таҷрибавӣ аз рӯи муодилаи (6), ки модели ҳатмии дар (d) нишон додашударо тавсиф мекунад. -хатҳои мувозинати диссоциатсияи ҳодисаҳои ҳатмии якум ва дуюм мутаносибан (Зари 1: OO + B ⇄ BO*, Kd1 = 290 ± 70 μM; Sub2: BO* + B ⇄ B*O*, Kd2 = 29,3 ± 2,5 μM ).(г) Диаграммаи схематикии механизми пешниҳодшудаи блоки Hv1. Дар ҳолати GBTA пайвастшавӣ ба як зербахши кушод наздикии зербахши кушодаи ҳамсояро зиёд мекунад (Kd2 Каналҳои Hv1 метавонанд бо иваз кардани доменҳои ситоплазми N- ва C-терминалии онҳо бо қисмҳои мувофиқи фосфатазаи ба шиддат ҳассос Ciona Intestinalis CiVSP (Hv1NCCiVSP) 18,34. Мо вобастагии консентратсияи монеъшавии мономерии Hv1 ГБТА ва GBTA ва онҳоро бо ҷилавгирӣ аз канали димерӣ (намуди ваҳшӣ) муқоиса кардем (расми 2а, б). Мо дарёфтем, ки фарқияти кооперативии ҳатмӣ байни ин ду пайвастагӣ дар мономерии Hv1 бартараф карда шуд, ки тавзеҳоти он, ки пайвастшавии GBTA ба як зершӯъба зиёд мешавад наздикии зершӯъбаи дигар ба ингибитор. Мо фикр кардем, ки пайвастшавии GBTA ба як зербахши Hv1 метавонад боиси азнавташкилдиҳии макони ҳатмӣ (индукси fit35) гардад, ки боиси азнавташкилдиҳии макони ҳатмии холии зербахши ҳамсоя мегардад, ки боиси зиёд шудани пайвастшавӣ мегардад. наздикӣ. Барои ба таври миқдорӣ тавсиф кардани пайвасти кооперативии ГБТА ба канал, мо моделеро истифода бурдем, ки дар он ҳар як зербахш метавонад молекулаи ингибитори аввалро пас аз реаксияи бимолекулярӣ бо константаи диссоциатсия Kd1 пайваст кунад (расми 2c, Sub 1, OO+ B ⇆ BO*). Пайвастшавӣ боиси он мегардад, ки канал ҳолатеро қабул кунад, ки дар он зербахшҳои холии боқимонда ба ингибитор пас аз реаксияи беназири бимолекулярӣ бо константаи диссоциатсияи Kd2 пайваст мешаванд, ки дар он Kd2 0.05) дарёфтем, ки бо вуҷуди нақши он дар нигоҳ доштани ду зервоҳид якҷоя муҳим аст, аммо CCD ба пайвастани аллостерикии байнисоҳавӣ байни сайтҳои ҳатмии GBTA бевосита миёнаравӣ намекунад. (а) Диаграммаи схематикии димерҳои Hv1 бо мутатсияи триглицин дар охири ботинии S4 барои вайрон кардани пайвастагии байнисоҳавӣ, ки тавассути домени печонидашудаи ситоплазми (тирҳои кабуд) миёнаравӣ шудааст. (б) Намоиши схематикии димерҳои Hv1 ва димерҳои лигатсионӣ бо мутатсияҳои нишондодашуда, ки барои санҷиши порчаҳои S1, ки дар пайвастшавӣ байни зерқисмҳо иштирок мекунанд (тирҳои кабуд) тарҳрезӣ шудаанд.(c–h) 2GBI (кабуд) ва GBTA (сурхи торик) конструксияҳои зикршударо ба таври вобаста ба консентрат бозмедорад. Ҳар як нуқта монеаи миёнаро ифода мекунад. ± SD аз 3 то 10 андозагирӣ. Каҷ як мувофиқи Hill буд, ки барои ба даст овардани арзишҳои намоёни Kd истифода мешуд (ниг. Ҷадвали иловагӣ 1). Коэффитсиентҳои теппа дар гистограммаҳои интерполясияшуда тавре муайян карда шудаанд, ки дар бахши Усулҳо тавсиф карда шудаанд (ниг. Ба расмҳои иловагӣ 3 ва 4). Hv1 WT ҳамчун хатҳои рахна нишон дода шудаанд. Ситорачаҳо фарқиятҳои аз ҷиҳати оморӣ муҳимро байни порчаҳои мутант ва ВТ нишон медиҳанд (p 0.05, расми 5d, i ) ). Аз тарафи дигар, мутатсия D123A коэффисиенти Hill-и GBTA-ро ба таври назаррас коҳиш дод (p 0,05/14). Азбаски безараргардонии заряд дар мавқеъи 123 дар ҳарду зербахш боиси тағйири шадиди кооперативии ҳатмии GBTA гардид, дар ҳоле ки баргардонидани заряд дар ҳарду зербахш танҳо таъсири каме дошт, мо таҳлилро васеъ кардем, то танҳо як зербахшро бо канали инверсияи заряд дар бар гирад. димерҳои ба Hv1 алоқаманд бо ивазкунии D123R дар зербахши C-терминал тавлид карданд (расми 5б) ва ҷилавгирӣ аз консентратсияи вокунишро аз ҷониби GBTA ва 2GBI чен карданд. Мо дарёфтем, ки коэффисиенти Hill-и GBTA ба каналҳои WT-D123R ба таври назаррас баландтар аст. навъи ваҳшӣ Hv1 (p 0.05). Мо инчунин дарёфтем, ки дар сурати набудани βME, коэффисиенти Hill-и GBTA ба dimer D112E I127C Hv1 ҳатман нисбат ба он хеле баландтар буд, ки дар ҳузури агентҳои коҳишдиҳанда чен карда шудааст (расми 6e ва расми иловагӣ 4), ки ин маънои онро дорад, ки мутацияи D112E афзоиши кооперативии ҳатмии GBTA-ро, ки дар натиҷаи пайванди байниҳамии систеин 127 ба вуҷуд омадааст, бекор накард. Коэффисиенти Hill аз 2GBI пайвастшавӣ ба dimers D112E, I127C Hv1 низ аз мутацияи D112E ба таври назаррас таъсир нарасонд (Расми 1).6d ва иловагӣ. Расми 3). Якҷоя гирифта, ин бозёфтҳо нишон медиҳанд, ки пайвастагии GBTA тавассути таъсири мутақобилаи ақсои берунии порчаҳои S1 дар зерқисмҳои ҳамшафати Hv1 тавассути таъсири мутақобилаи электростатикӣ ё тавассути ташаккули пайвандҳои ковалентӣ байни систеинҳои ивазшаванда пайвастагии аллостерикӣ дар байни сайтҳо афзоиш меёбад ва боиси ҳамкории ҳатмӣ мегардад. Гарчанде ки таъсири мутақобилаи электростатикии ҷолиб ба кооператив метавонад бо мутацияи D112E бекор карда шавад, таъсири пайвандҳои ковалентӣ наметавонад. Ҳангоми таҳқиқи фазои кимиёвии дастрас барои пайвастани ҳосилаҳои гуанидин ба каналҳои Hv1, мо дарёфтем, ки 2-гуанидинотиазолҳо ба монанди GBTA нисбат ба 2-гуанидинобензимидазолҳо вобастагии консентратсияи баландтар доранд (расми 1c). ва каналҳои мономерӣ (расми 2а,б) ва ба канали димерӣ, ки дар он як зербахш қаблан ба ингибитор пайваст карда шудааст (расми 4) моро ба хулосае овард, ки ҷилавгирӣ аз Hv1 аз ҷониби GBTA Амалиёт як раванди синергетикӣ аст ва маконҳои ҳатмии пайвастагиҳо дар ду зербахш аллостерикӣ алоқаманданд. Кашфи он, ки GBTA ба канали кушод мепайвандад, тавре ки қаблан барои пайвастагии алоқаманди 2GBI32 нишон дода шуда буд, нишон медиҳад, ки пайвастагии аллостериро метавон махсусан дар ҳолати кушод арзёбӣ кард. Модели ҳатмии кооперативии мо. Қодир буд, ки аз ҷониби GTTB1 аз ҷониби GBT-2C монеа шавад (Расми 2C) ва ба GBTA-и аз 2GBI ва GBTA-ро аз Рӯйборкунии канори канори канори канори канал, ки таъбири раванди ҳатмиро дастгирӣ мекунад, шарҳ диҳед. Коэффитсиенти максималии теппае, ки дар протеини аллеритоӣ бо ду сайтҳои ҳатмӣ (ба монанди HV1) ба даст оварда мешавад энергияи ройгони энергияи ройгони синфӣ, фарқи байни энергияи ройгони сайтҳои пасттарин ва баландтарин (нигаред дар ҳолати HV1 аз оксиген ба гемоглин хеле машҳур ва хуб омӯхтани гемоглобини муштарак мебошад kcal / Mol, вобаста ба шароити энергетикии таҷрибавӣ, кооперативи GBTTISTIONS AS OS OS OS OS EM1 ба гемоглобин, вақте ки шумораи гуногуни зергурӯҳҳои дуюмӣ дар он ду система ба ҳисоб меравад, ба таври назаррас фарқ надорад. Дар модели ҳамсояи мо, ҳатмии молу мулкии GTTA ба як зерзодии undunit incundity дар он натиҷаҳои муқаддимаи муҳити муқоисае, ки дар натиҷаи чорабинии ҳатмӣ (мувофиқ) оварда мерасонад, боиси он мегардад Тағирот дар робита бо зергурӯҳҳо Пештар нишон дода шуда буд, ки як қисми роҳҳои реҷаи протексионии протези протонсии протопонияи протези протези протопонияи протези протопонияи протезӣ ва амал ҳамчун филтри интихобӣ. Натиҷаҳои мо нишон медиҳанд, ки Филтрҳои экспертиза дар ду сайтҳои кушодаи ҷойгиршавӣ.Figure 7A ҷойгиршавии тахминии майдони ҳатмии GBTA ва ҷойгиршавии пасандозҳои GTTA-ро нишон медиҳанд Дар сохтори кристаллии HV1-GrivSp Chimera.Suglede Sevence барои ҳамлаҳои ерамерикӣ бо иштироки истихроҷи S1 бо тирҳои сиёҳ нишон дода шудаанд. a) Санематикии VS1 VSD VSD-и Crystal аз HV1-и иварск Chimera, қисматҳои хидматрасонӣ силиндрӣ нишон медиҳанд. Ҷойгоҳҳои пешгӯиштаи GBTA-и сарҳадии GTTA-ро ҳамчун харчангҳои хокистарранг нишон медиҳанд. Дар ду конфигуратсияи мухталиф, тавре ки аз паҳлӯи берунии мембрана намоиш дода шудааст Ҷудошавии канори берунии ду s4-ро (тирҳои Dashed), ки дар тарафи рост нишон дода шудааст, танзимоти D123 ва I127 аз зербандҳои наздик баён мекунад. (в) ташхиси схематикии VSD Дар конфигуратсияи DISHER дар сохтори 4G80 Crystal Actions.position P140 дар CRINGEP ба мавқеи D123 дар HV1 мувофиқат мекунад. Натиҷаҳои мо нишон медиҳанд, ки ҳамкориҳои электронии электростативӣ байни резиденюр 123 (123D ё 123D ё 123R / 123R) бо сатҳи "муқаррарӣ ё 123р ё 123р , афзоиши ҳамкорӣ (расми 5G) .Ин интизор меравад, ки баровардани ҳамкориҳои нохуш бо афзоиши кооперативии 123A / 123A ба мушоҳида расид (расми 5E). Шояд имконпазир бошад. Шарҳ ин аст, ки таъсири ноороми ҷойгиркунии пасандозҳои гидрофикӣ дар муҳити гидрофилӣ, ки дар натиҷа паст шудани кооперативии ҳатмӣ мебошад, метавонад ба наздикӣ хабар диҳад, ки дастрасии маблағгузорӣ Мавқеи D171 аз ш.Па Гутис CI-HV1 (мувофиқаи Д.223 дар HV1) бо дастгирии мафҳум, ки D123 дар муҳити саршумори гидрофиликӣ ҷойгир аст. Губудияти каналҳои ХВ1 тавассути гузаришҳои сершумори 119,20,20,20,20,29,41,41,41,41,41,41,41,41,41,41,41.QIU ва AL-HV1 ба амал омадааст, сенсории шиддатҳо тағир меёбад, ки канал фаъол аст, аммо ба ҳар ҳол зич бастааст Пас аз он, ки аз гузариш ба гузаронидани шиддати superitess мусоидат мекунад, санҷиши мутобиқии шиддати сенсорҳои шиддатнок мегардад ва муайян карда шуд, ки гузариши дуюмро аз ҷониби мутатсия дар мавқеи D171, ки ба таври муфид поинтар карда шуд. Пардохти сигнали флюорессия бо мавҷудияти ҳамкориҳои электронии зеризаминӣ дар якҷоягӣ бо ҳамоҳангсозии аксуламали тағйирёбанда мувофиқ аст. Ин тафсир ба дарёфти мо мувофиқ аст ва пайвасти аллеритетикӣ байни сайтҳои ҳатмии GTTA. Фузивара Е.И. интерфейси Длемент ба мембранаи coleophlany Coarder ба мембранаи чархдор (расми 7б, панели чап), ки дар муқоиса бо таҳлили таҳлили калони клуби пайвандҳо асос ёфтааст Таҳлили VSD ва функсионалии минтақа Пайвастшавӣ ба S4 Hellix ва CCD-и ID-ро, ки каналиҳои назаррасро барои кушодани кушодани канализатсия талаб мекунанд, ба амал меоянд ва Classlenge Countleine дар шароити он ҷо канализатсия аст. Аз ин рӯ, интерфейси S4-S4, конфигуратсияи зергурурии Давлатро инъикос менамояд Давлатҳои пӯшида, идея бо бозёфтҳои Mony ва дигарон мувофиқат мекунанд. S1 ҳангоми gating 39 ҳаракат мекунад. Дар ин ҷо, мо нишон медиҳем, ки дар ҳолати кушод, ба канораҳои берунии S1 Ҳасдҳои мустақими электролк дар байни зергурҳо наздиканд Ғайр аз якдигар бо ҳам муошират кардан Бо бозёфтҳои мо (расми 7б, панели рост) .Мо ин танзимотро барои канал дар ҳолати кушод тавсия медиҳем. Гарчанде ки фермерии шаҳрвандӣ ҳамчун мономер фаъолият мекунад, сохтори кристаллии VSD-и ҷудогона дар ин ҳолат сабт шудааст. Барои HV1 (расми 7C) ва Вакилони шаҳрвандӣ нишон медиҳанд, ки VSDs ин сафедаҳо тамоюли intralinsic доранд, ки интерфейс, ки дар он ҷойҳои истихроҷи S1 амал мекунанд, доранд. Нақши муҳими HV1 дар фаъолсозии ҳашарот ин канали ҳадафи ҷолибро барои назорати нерӯгоҳи маводи мухаддир нишон медиҳад. Моҳияти касбҳо дар беморони синни 12 ё рангинҳо дар бораи маликаҳои ҳуҷайраҳои ҳуҷайраҳо 11 Кушодани HV1-и кушод, ки боиси зиёд шудани ҳатмии indinfy, метавонад боиси рушди доруҳои тавоно ва техникӣ ба каналҳои DV1 оварда расонад. Бо истифода аз усулҳои стандартии CCR-и DCR-и DC1 амалӣ карда шуд C-Servernus аз як undunit бо n-терминитҳои дуввум тавассути GGSGGSGSGSGSGSGSGNGENGNGENGNGENTINGENSTENTINGESTESTESTESTESTESTESTESTEDSEDSEDSEDSEDSEDSEDSEDSEDSEDSEDSESSEDSEDSESSEDSEDSEDSEDSESSEDSEDSEDSEDSEDSEDSEDSEDSEDSEDSEDSEDSEDSEDSEDSEDSEDSEDSEDSEDSEDSEDSEDSEDSEDSEDSEDSEDSEDSESSIONSED (NELLANGESS) ва синтезҳои ROYSTISION бо T7 MMESSAGE Kit Trackine Trackine (Amaction) .1-3 рӯз пеш аз андозагирии электрофизӣ Аз byoscity ecociity.foloctinginging RNA, ҳуҷайраҳо дар ММКД, ки дорои 96 мм NACL, 10 мм КАЛКАТ, 1 мм-Пирувон, 100 мкг / MLIMICINIT, PH 7.2 18 ° C нигоҳ дошта мешуданд . 2-Гуанидино-Бензишино [1], 2-Бенидино-2,3] гуанидин [2], (5-Бромолол -Сицол-2-YL) Гуанидин) [6] 5-карбоксатат [9] ва (2-гиэдино-4-метилино-4-метил-1,3] аз Сигма-алрандиддин буданд [7] Оё аз MP B Biomedicals.1- [4] буд - ((4-хлорофенил) -1,3-тязол-2-YL | Gananidine [11] ва 1- [4] ва 1- [4] Аз пайвастагиҳои илмии илмӣ аз сатҳи баландтарин дастрасанд. ҳадди аққал 99% покӣ. Ба боздоштани 2-amoin-4- (trifluororometh) бо шӯршавии қавӣ барои 4 соат инъикос ёфтааст 65 ° C) якчанд соат, ва сипас аз ацетати этилӣ / нафт таклиф карда шавад, то ки сахти сафед (500 мг, 48%) диҳад; MP 221-222 ° C (нури 225-226 ° C) 45; 1h nmr (500 мгз, DMSO-D8): 7.25 , 1 h, j = 8.1 HZ) = 272 HZ), 126.1 (Q = 272 HZ) 134.8.8 HZ) 134.8.8 HZ) 134.8.8 HZ) 134.8.8 HZ) 134.8.8 HZ) 134.8. : 261.0419. Napho [1,2-D] Thizol-2-Amine (300 мг, 1,5 мг), ки қаблан тасвир шудааст, то 200 ° C дар ванна равған дар тести хурд дар тести хурд дар тести хурд дар тести хурд ва Истифодабарандаи гарм ба қисмҳои хурди шикаста буд ва бо об шуста шуд 1h nmr (500 мгз, DMSO-D6, D2O): 7.5 HZ), 7.500 HZ), 7.66 (T, 1 H, J = 8.3 HZ), 7.77 (D, 1, 1 соат), 7.77 (D , J = 8.6 HZ), 7.89 (D, 1 H, J = 8.6 HZ), 8.0 HZ), 8.30 HZ), 8.35 г.35 (D, 1 H, j = 8.3 глиф) .13c nmr (150). MHz, DMSO-d6): δ = 119.9, 122.7, 123.4, 123.6, 126.5, 127.1, 128.7, 132.1, 140.7, 169.1.HRMS (ESI): m/z calculated value.For C12H11N4S (M + H)+: 243.0699 , ёфт шуд: 243.0704. Ҷараёнҳои протон дар часпакҳои дохилӣ ва берунии oocitys чен карда шуданд ) кислотаи этилсулфонологӣ (MS), 30 мм Tetraetlammon (чой) Мезилат, 5 мм хлориди 5 мм PH 6.0 Бо гидрокси гидроксид.ман дар 22 ± 2 ° C. Пилетҳо бояд дар 1 KEи 1,5-4 модае, ки дар 5 KELPPLITE мебошанд, ба CREXPALDED ва таҳлил карда шудаанд ва муаллифии 10.1 (Commentlab). Ҳадафҳои дорои назари гуногуни HV1 Бо истифода аз қаламчаи имтиҳони дераксия таҷрибаҳои беҳтарини transist.rapid гузаронида шуданд. Пас аз андозсупорандаи Пулс делолярденсияи Pulse.gv, ки қаблан тасвир шуда буд18.20.22.2.2.2.2.20.20.2.20 MV пас аз он ки қадамҳои алоҳида дар шиддати мухталиф аз шутурҳои гуногун пеш аз он, ки омузишҳои санҷишӣ пеш аз он навишта шуда буданд, сабт карда шуданд Барои таъқиби таназзули ҷорӣ 18.Мипсияи GV истифода бурда мешавад Бо муодилаи теппа: Дар куҷо [i] консентратсияи I ва H мебошад, ки I ва H аст