የክፍት Hv1 ፕሮቶን ቻናል የኢንተር-ሱቡኒት በይነ መጠይቅ ከተለዋዋጭ ጥምርታ ጋር

Nature.comን ስለጎበኙ እናመሰግናለን፡ እየተጠቀሙበት ያለው የአሳሽ ስሪት ለCSS የተገደበ ድጋፍ አለው። ለምርጥ ተሞክሮ የተሻሻለ አሳሽ (ወይም የተኳሃኝነት ሁነታን በInternet Explorer ውስጥ እንዲያጠፉት) እንመክርዎታለን። እስከዚያው ድረስ ለማረጋገጥ። ቀጣይነት ያለው ድጋፍ, ጣቢያውን ያለ ቅጦች እና ጃቫስክሪፕት እናሳያለን. የ Hv1 የቮልቴጅ-ጋድ የፕሮቶን ቻናል ሁለት የቮልቴጅ ዳሳሽ ጎራዎች (VSDs) ያካተተ ዲሜሪክ ውስብስብ ነው, እያንዳንዱም የፕሮቶን መተላለፊያ መንገድን ያካትታል.ዲሜሪዜሽን በሳይቶፕላስሚክ ኮይል-ኮይል ዶሜይን ይቆጣጠራል.ከዝግ ሁኔታ ወደ ሽግግር የሚደረግ ሽግግር. በሁለቱም VSD ውስጥ ያለው ክፍት ሁኔታ በትብብር እንደሚከሰት ይታወቃል; ሆኖም ግን, ስለ መሰረታዊ ዘዴዎች ብዙም የሚታወቅ ነገር የለም.የኢንተርሱቡኒት መገናኛዎች በአሎስቴሪክ ሂደቶች ውስጥ ቁልፍ ሚና ይጫወታሉ; ይሁን እንጂ እንደዚህ ያሉ መገናኛዎች በክፍት Hv1 ቻናሎች ውስጥ አልተለዩም. እዚህ ላይ 2-guanidinothiazole ተዋጽኦዎች ሁለት Hv1 VSD ዎች በትብብር መንገድ እንደሚያግዱ እና ከነዚህ ውህዶች ውስጥ አንዱን በክፍት ንዑስ ክፍሎች መካከል ያለውን የአሎስቴሪክ ትስስር እንደ መፈተሻ እንጠቀማለን. የቪኤስዲ የመጀመሪያው ትራንስሜምብራን ቁርጭምጭሚት መጨረሻ በማያያዣ ጣቢያዎች መካከል ያለውን ትስስር የሚያስተናግድ የበይነገጽ በይነገጽ ይፈጥራል፣ነገር ግን የተጠቀለለ-የሽብል ጎራ በዚህ ሂደት ውስጥ በቀጥታ የተሳተፈ አይደለም።በተጨማሪም የሰርጡ ፕሮቶን-መራጭ ማጣሪያ አገዳ-አስገዳጅ ትብብርን እንደሚቆጣጠር ጠንካራ ማስረጃ አግኝተናል። . የቮልቴጅ-ጋድ የፕሮቶን ቻናሎች ከፋይቶፕላንክተን እስከ ሰው ድረስ በተለያዩ ፍጥረታት ውስጥ ጠቃሚ ሚና ይጫወታሉ። Hv1 ነው፣ እሱም የ HVCN1 gene2፣3.Hv1 (aka VSOP) በ B ሴል ስርጭት ውስጥ ሚና እንደሚጫወት ታይቷል፣ በተፈጥሮ በሽታ የመከላከል ስርዓት ምላሽ የሚሰሩ የኦክስጂን ዝርያዎችን በማፍራት 5,6,7,8, ስፐርም ሴል እንቅስቃሴ9 እና የአየር መተላለፊያ ወለል ፈሳሽ ፒኤች ደንብ10. ይህ ቻናል እንደ B-cell malignancies4,11 እና የጡት እና የኮሎሬክታል ካንሰሮች 12,13 በመሳሰሉት የካንሰር አይነቶች ላይ ከመጠን በላይ የተጋለጠ ነው.ከመጠን በላይ የሆነ የኤች.ቪ. በማይክሮግሊያ እና እንቅስቃሴው በ ischemic stroke ሞዴሎች ላይ የአንጎል ጉዳትን እንደሚያባብስ ታይቷል። የ Hv1 ፕሮቲን የቮልቴጅ ዳሳሽ ጎራ (VSD) ይዟል፣ እሱም S1 እስከ S414 የሚባሉ አራት የትራንስሜምብራን ክፍሎችን ያቀፈ ነው። ቪኤስዲ ከቮልቴጅ-ጋድ ና+፣ ኬ+ እና ካ2+ ቻናሎች እና የቮልቴጅ-sensitive phosphatases፣ ለምሳሌ CiVSP ከ ተጓዳኝ ጎራዎች ጋር ይመሳሰላል። Ciona gutis15. በነዚህ ሌሎች ፕሮቲኖች ውስጥ የ S4 C-terminus ከኦፕሬተር ሞጁል ጋር ተያይዟል, ቀዳዳው ጎራ ወይም ኤንዛይም. በ Hv1, S4 በሳይቶፕላዝም ጎን ላይ ከሚገኘው ከኮይል-ኮይል ጎራ (CCD) ጋር ተያይዟል. ቻናሉ ሁለት ቪኤስዲዎችን ያቀፈ ዲሜሪክ ኮምፕሌክስ ነው፣ እያንዳንዱም የፕሮቶን መተላለፊያ መንገድ16፣17፣18 የያዘ ነው። በመግቢያው ሂደት ውስጥ ትልቅ ሚና ይጫወታል።በተጠቀለለው የጥቅልል ጎራ ውስጥ ባሉ ንዑስ ክፍሎች መካከል ያለው በይነገጽ በጥሩ ሁኔታ የተገለጸ ነው ምክንያቱም የሁለቱ ገለልተኛ ጎራዎች ክሪስታል አወቃቀሮች ይገኛሉ22,23. በሌላ በኩል በቪኤስዲዎች መካከል ያለው ግንኙነት በገለባው ውስጥ አይደለም በደንብ ተረድቷል.የ Hv1-CiVSP chimeric ፕሮቲን ክሪስታል መዋቅር ስለዚህ በይነገጽ መረጃ አይሰጥም, ምክንያቱም ክሪስታላይዝድ ሰርጥ ውስብስብ trimeric ድርጅት ተወላጅ Hv1 CCD በ እርሾ leucine ዚፐር GCN424 መተካት ምክንያት ሊሆን ይችላል. የ Hv1 ቻናል ንዑስ ድርጅት በቅርቡ የተደረገ ጥናት ሁለት S4 ሄሊሶች ወደ ሲሲዲ ሲሸጋገሩ የሁለተኛ ደረጃ መዋቅር ከፍተኛ መስተጓጎል ሳይፈጠር ወደ ሲሲዲ ሲሸጋገሩ ከገለባው ጀምሮ ወደ ሳይቶፕላዝም የሚገቡ ረዣዥም ሄሊኮች እንዲፈጠሩ አድርጓል። ይህ ጥናት Hv1 VSDs በ S4 ክፍል ውስጥ እርስ በርስ እንዲገናኙ ሐሳብ አቅርቧል. ነገር ግን ሌሎች ጥናቶች በቪኤስዲዎች መካከል አማራጭ መገናኛዎችን አቅርበዋል.እነዚህ በይነገጾች S1 ክፍል 17, 21, 26 እና የ S2 ክፍል 21 ውጫዊ ጫፎች ያካትታሉ. የግጭቱ መንስኤ ሊሆን ይችላል. የእነዚህ ጥናቶች ውጤቶች በቪኤስዲዎች መካከል ያለው የአሎስቴሪክ ትስስር ከግቢው ሂደት ጋር በተያያዘ የተፈተሸ ሲሆን ይህም በተዘጋ እና ክፍት ግዛቶች ላይ የተመሰረተ ነው, እና በቪኤስዲዎች መካከል ያለው ግንኙነት በተለያዩ የግዛት ለውጦች ላይ ሊለያይ ይችላል. እዚህ፣ 2-guanidinothiazole Hv1 ቻናሎችን በሁለት ክፍት ቪኤስዲዎች በማገናኘት እንደሚገታ እና ከውህዶች አንዱን 2-guanidinobenzothiazole (GBTA) ተጠቅሞ በክፍት ሁኔታ ውስጥ ባሉ ንዑስ ክፍሎች መካከል ያለውን መስተጋብር ለመፈተሽ ደርሰንበታል። interface.እኛ የ GBTA ማሰሪያ ኩርባ በጥሩ ሁኔታ ሊገለጽ የሚችለው በቁጥር ሞዴል ሲሆን ይህም መከላከያን ከአንድ ንኡስ ክፍል ጋር ማያያዝ በአቅራቢያው ያለውን ንዑስ ክፍል ትስስር እንዲጨምር ያደርጋል። ቻናል 27, 28 እና የጓኒዲን ተዋጽኦ ማሰሪያ ጣቢያ አካል 29 ቁጥጥር GBTA አስገዳጅ ትብብር.እኛ የትብብር ማሰሪያ Hv1 dimer ውስጥ ጠብቆ መሆኑን ያሳያል, CCD ከ S4 ክፍል ይለያል, በ CCD ውስጥ intersubunit በይነገጽ በቀጥታ አይደለም መሆኑን ይጠቁማል. በGBTA ማሰሪያ ጣቢያዎች መካከል የአሎስቴሪክ ትስስርን ያማልዳል።በተቃራኒው የ S1 ቁራጭ በንዑስ ክፍሎች መካከል ያለው በይነገጽ አካል ሆኖ እናገኘዋለን እና ከዲመር መሃል ርቆ የሚገኘውን የኤስ 4 ሄሊክስ ውጫዊ ክፍል ያለው የቪኤስዲዎች ዝግጅት አቅርበናል። የ S1 ቁራጭ በክፍት ሁኔታ ውስጥ መሆን አለበት። የ Hv1 አነስተኛ ሞለኪውል መከላከያዎች እንደ ፀረ-ነቀርሳ መድሃኒቶች እና የነርቭ መከላከያ ወኪሎች ጠቃሚ ናቸው.ነገር ግን እስከዛሬ ድረስ, ጥቂት ውህዶች ቻናሉን 30,31,32,33 መከልከል ችለዋል.ከነሱ መካከል, 2-guanidinobenzimidazole (2GBI, compound [1]) በምስል ውስጥ. 1 ሀ) እና ተዋጽኦዎቹ በሰርጡ በኩል የ VSD29,32 የፕሮቶኖችን ስርጭት ለመግታት ተገኝተዋል።እንደነዚህ ያሉ ውህዶች ማሰር በሁለቱ ክፍት ንዑስ ክፍሎች ውስጥ በተናጥል እንደሚፈጠር ይታሰባል። ከዚህ ቀደም Hv1 ን በ200 μM ሲመረመር ከ 2GBI ያህል ውጤታማ በሆነ መንገድ እንደሚገታ ታይቷል (ምስል 1 ለ)።ሌሎች የቲያዞል ተዋጽኦዎችን መርምረናል እና አንዳንዶቹ ከ GBTA (ምስል 1 እና ተጨማሪ) ጋር ተመሳሳይ ወይም የላቀ ቻናሉን እንደከለከሉት ደርሰንበታል። ጽሑፍ)። የአራት የቲያዞል ተዋጽኦዎች (GBTA እና ውህዶች [3]፣ [6] እና [11]፣ ስእል 1 ሐ) የማጎሪያ ምላሽ ኩርባዎችን ወስነን ከ2GBI የበለጠ ቁልቁል ሆነው አግኝተናል።The Hill coefficients (h) የቲያዞል ተዋጽኦዎች ከ 1.109 ± 0.040 እስከ 1.306 ± 0.033 (ምስል. 1 ሐ እና ተጨማሪ ምስል 1) በተቃራኒው የሂል ኮፊሸንት ለ 2GBI 0.975 ± 0.024 29, ምስል 2a እና ተጨማሪ ምስል. ማሰሪያ ቦታ፣29,32 የቲያዞል ተዋጽኦን ከአንድ ንዑስ ክፍል ጋር ማገናኘት የሁለተኛውን መከላከያ ሞለኪውል በአቅራቢያው ካለው ንዑስ ክፍል ጋር ያለውን ትስስር እንደሚያሳድግ ገምተናል።GBTA ከፍተኛው የሂል ኮፊሸንት ያለው የሙከራ ውህድ ነው።ስለዚህ ይህን ውህድ ወደ መረጥነው። የማገናኘት ዘዴን የበለጠ ማጥናት እና 2GBI እንደ ማመሳከሪያ አሉታዊ ቁጥጥር ተጠቅሟል። (ሀ) የሙከራ ውህዶች፡ [1] ማጣቀሻ Hv1 inhibitor 2-guanidino-benzimidazole (2GBI)።[2] 2-guanidino-benzothiazole (GBTA), [3] (5-trifluoromethyl-1,3-benzothiazol-2-yl) guanidine, [4] naphtho [1,2-d][1, 3] Thiazol-2-yl -ጓኒዲን፣ [5](4-ሜቲኤል-1፣3-ቲያዞል-2-yl) ጓኒዲን፣ [6](5-bromo-4-ሜቲኤል-1፣3-ቲያዞል-2-yl) ጉዋኒዲን፣ [7] famotidine፣ [8] 2-guanidino-5-methyl-1,3-thiazole-4-carboxylic acid ethyl ester፣ [9] 2-guanidino-4-methyl Ethyl-1,3-thiazole-5-carboxylate፣ [10] ] (2-guanidino-4-methyl-1,3-thiazol-5-yl) ethyl acetate, [11] 1-[4- (4 -Chlorophenyl) -1,3-ቲያዞል-2-yl] ጉዋኒዲን, [ 12] 1- [4- (3,4-dimetoxyphenyl)-1,3-thiazol-2-yl] guanidine .(ለ) በተጠቆሙት guanidinothiazoles እና የማጣቀሻ ውህድ 2GBI (ሰማያዊ-አረንጓዴ አሞሌዎች) የሰው Hv1 እንቅስቃሴ መከልከል .Hv1 proton currents የሚለካው ከ -80 mV እስከ +120 mV የሚደርስ አቅምን ላለማጣት ምላሽ ለመስጠት በ Xenopus oocytes ንጣፎች ውስጥ ነው ። እያንዳንዱ መከላከያ በ 200 μM.pHi = pHo = 6.0 መረጃ አማካኝ ± ሴም (n≥4) ናቸው።(ሐ) በማጎሪያ ላይ የተመሰረተ የሰው Hv1ን በ ውህዶች መከልከል [2]፣ [3]፣ [6] እና [11]።እያንዳንዱ ነጥብ የ 3 አማካኝ መከልከልን ± SD ይወክላል። ወደ 15 መለኪያዎች. መስመሩ በማብራሪያ ሠንጠረዥ ውስጥ የተዘገቡትን ግልጽ የ Kd እሴቶችን ለማግኘት የሚያገለግል ኮረብታ ነው ። ሂል ኮፊሸንስ የሚወሰነው በማሟያ ምስል 1: h (1) = 0.975 ± 0.024 h(2) = 1.306 ± 0.033, h (3) = 1.25 ± 0.07, h (6) = 1.109 ± 0.040, h (11) = 1.179 ± 0.036 (ዘዴዎችን ይመልከቱ). (a,b) ውህዶች 2GBI እና GBTA ዳይሜሪክ እና ሞኖሜሪክ ኤች.ቪ.1 ን በማጎሪያ-ጥገኛ መንገድ ይከለክላሉ።እያንዳንዱ ነጥብ አማካኝ መከልከል ± ኤስዲ ከ3 እስከ 8 መለኪያዎችን ይወክላል እና ኩርባው የ Hill ተስማሚ ነው። የኢንሴት ሂስቶግራም የሚወሰነው በማሟያ ስእል 3 እና 4 ከተጠቀሱት ተስማሚዎች ነው. በ (ሀ) ላይ የሚታየው የ GBTA ትኩረት ምላሽ በስእል 1 ሐ. ግልጽ ለሆኑ የ Kd እሴቶች ተጨማሪ ሠንጠረዥ 1 ይመልከቱ.(ሐ) ሞዴሊንግ የ GBTA የትብብር ትስስር ከዲሜሪክ Hv1 ጋር።ጠንካራው ጥቁር መስመር ለሙከራ መረጃ መመጣጠን የሚወክለው በቀመር (6) ሲሆን ይህም በ (መ) ላይ የሚታየውን አስገዳጅ ሞዴል ይገልጻል። -የመጀመሪያዎቹ እና የሁለተኛው አስገዳጅ ክስተቶች የመለያየት ሚዛናዊ ኩርባዎች በቅደም ተከተል (ንዑስ 1፡ OO + B ⇄ BO*፣ Kd1 = 290 ± 70 μM፤ ንዑስ 2፡ BO* + B ⇄ B*O*፣ Kd2 = 29.3 ± 2.5 μM (መ) የ Hv1 ብሎክ የታቀደው ዘዴ የመርሃግብር ንድፍ. በ GBTA ውስጥ, ከአንድ ክፍት ንዑስ ክፍል ጋር ማያያዝ በአቅራቢያው ያለውን ክፍት ንዑስ ክፍል (Kd2 Hv1 ቻናሎችን N- እና C-terminal ሳይቶፕላዝም ጎራዎቻቸውን በተዛማጅ የCiona Intestinalis voltage-sensitive phosphatase CiVSP (Hv1NCCiVSP) 18,34 በመተካት ሞኖመሬይዝ ማድረግ ይቻላል። እነሱን ከዲሜሪክ ቻናል (የዱር-አይነት) መከልከል (ምስል 2 ሀ, ለ) ጋር በማነፃፀር በሁለቱ ውህዶች መካከል ያለው አስገዳጅ የትብብር ልዩነት በ monomeric Hv1 ውስጥ ተወግዶ ነበር ፣ ይህም GBTA ከአንድ ንዑስ ክፍል ጋር ማገናኘት ይጨምራል ። የሌላኛው ንኡስ ክፍል ለአደጋ ተጋላጭነት። GBTA ከአንድ የHv1 ንዑስ ክፍል ጋር ማገናኘት የማስያዣ ቦታውን እንደገና ማስተካከል (fit35 ን ያስከትላል) ይህም በአቅራቢያው ያለው ባዶ ቦታ እንደገና እንዲስተካከል ስለሚያደርግ የበለጠ ትስስር እንዲፈጠር ያደርጋል ብለን ገምተናል። ዝምድና. የGBTAን ከሰርጡ ጋር ያለውን የትብብር ትስስር በቁጥር ለመግለጽ፣ አንድም ንዑስ ክፍል የመጀመሪያውን አጋቾቹን ሞለኪውል የባዮለኩላር ምላሽን ከተከፋፈለ ቋሚ Kd1 (ምስል 2c፣ ንኡስ 1፣ OO+ B ⇆ BO*) ጋር የሚያገናኝበትን ሞዴል ተጠቀምን። ማሰሪያው ሰርጡ የተቀሩት ባዶ ክፍሎች ከአጋቾቹ ጋር የሚጣመሩበት ልዩ የሆነ የቢሞለኩላር ምላሽ ከተከፋፈለ ቋሚ Kd2 ጋር እንዲይዝ ያደርገዋል፣ Kd2 የሁለተኛው ተከላካይ ሞለኪውል ከታሰረ በኋላ ሁለቱም ንዑስ ክፍሎች የተከፋፈሉ ቋሚ Kd2 (ምስል 2d) አላቸው.የሰርጥ መከልከል የሚለካው በዲፖላራይዝድ ሁኔታዎች (+120 mV) ስር ነው.የሰርጥ ዝርያዎች አንድ ክፍት እና አንድ የተዘጋ ክፍል (ሽግግር CC ⇄ OC ⇄ ይመልከቱ) OO በስእል 2d) ከዚህ ቀደም ለ Hv1 አሁኑ በቸልተኝነት አስተዋፅዖ ሲያበረክቱ የተገኙት በእነዚህ ሁኔታዎች19,20 ስለዚህም በማያያዝ ሞዴል ውስጥ አልተካተቱም። በስእል 2 ሐ ውስጥ ያለው ጠንካራ ጥቁር መስመር የአምሳያው እኩልታ ለሙከራ ትኩረት ምላሽ ከርቭ ጋር የሚስማማ ሲሆን ይህም የ ~ 290 μM Kd1 እና የ ~ 29 μM Kd2 (ዘዴዎች ክፍል ፣ እኩልታ (6)) ይሰጣል። የ 2GBI ትስስር, Kd2 ≈ Kd1 = Kd (ምስል 2d) .በሞኖሜሪክ Hv1 ውስጥ አንድ ማያያዣ ጣቢያ እና አንድ Kdm (O ° + B ⇆ B °) አለ. በ GBTA, Kdm 54 አካባቢ ነው. μM, ከ Kd2 የበለጠ ከ Kd1 ጋር ይመሳሰላል (ምስል 2d). የመደመር ሁኔታ (OO) ፣ ምናልባትም በንዑስ ክፍሎች መካከል ያለውን በይነገጽ በማጥፋት ምክንያት። ቀደም ሲል ለ 2GBI32 እንደታየው GBTA ቻናሉ ክፍት በሆነበት ጊዜ ለመክፈት አስቸጋሪ ከማድረግ ይልቅ Hv1 ዥረቶችን እንደጨፈገፈ ተገንዝበናል (ተጨማሪ ምስል 2a,b,d)። ለ membrane repolarization ምላሽ, ነገር ግን ይህ ክስተት በ GBTA (ተጨማሪ ምስል 2 ሐ) ውስጥ አልታየም. በ 2GBI ፊት Hv1 ኢንአክቲቭ ሲኖር በእያንዳንዱ ንዑስ ክፍል ውስጥ ያሉት በሮች እገዳው ከተጣበቀበት ቦታ እስኪወጣ ድረስ ሊዘጋ አይችልም (የ "" የእግረኛ በር” ሜካኒካል)፣ እና 2GBI ከበሮቹ ከተጠጋው ቀርፋፋ ይነቀላል።አንድ Hv1 ንዑስ ክፍል ካልተዘጋ እና ከተዘጋ፣በአቅራቢያው ያለው ንዑስ ክፍል ተዘግቶ ሲቆይ፣የተቀሩትን 2GBI ሞለኪውሎች መፍታት ቀርፋፋ ይሆናል (አግድ ቀረጻ)።ረጅም ዕድሜ ያላቸው የሰርጥ ዝርያዎች። አንድ የታገደ ንዑስ ክፍል ብቻ ከመዘጋቱ በፊት ፕሮቶንን በጊዜያዊነት ያካሂዳል እና ቀስ በቀስ ለሚበሰብስ የጅራት ጅረት ትልቅ አስተዋፅዖ ያደርጋል። የ Hv1 ጅራት ሞገድ መበስበስ በ GBTA (ተጨማሪ ምስል 2 ሐ) ፊት ላይ ጉልህ በሆነ መልኩ እንዳልቀዘቀዘ የተገኘው ግኝት ለዚህ ማገጃ (ምስል 2d) ከተመሳሳይ ማያያዣ ዘዴ ጋር ይጣጣማል። አንድ ጊዜ የ GBTA ሞለኪውል ከ Hv1 ንዑስ ክፍል ያልታሰረ ነው። , የማገጃው ከአጎራባች ንዑስ ክፍል ጋር ያለው ግንኙነት በ 10 እጥፍ ይወርዳል, ይህም የማይታሰር ሂደትን ይደግፋል.ይህ ማለት ሁለተኛው የ GBTA ሞለኪውል በሰርጡ ውስጥ ከመያዙ በፊት የመፍለጥ እድሉ ከፍተኛ ነው. ረጅም ዕድሜ ያላቸው የሰርጥ ዝርያዎች አንድ ብቻ የማገጃ ንዑስ ክፍል ማምረት ጂቢቲኤ በሚኖርበት ጊዜ 2GBI ካለበት ይልቅ በብዛት እንደሚበዛ ይጠበቃል፣ይህም ፈጣን የጅራት መበስበስን ያስከትላል። GBTA ከሁለቱም የHv1 ንዑስ ክፍሎች ጋር በትብብር እንዲተሳሰር ፣የማሰሪያ ቦታዎቹ በተለዋዋጭነት የተጣመሩ መሆን አለባቸው።እያንዳንዱ ማሰሪያ ጣቢያ የሚከተሉትን ማድረግ የሚችል መሆን አለበት፡ 1) ከአጎራባች ንዑሳን ክፍሎች ጋር ከአጋቾቹ ጋር የሚገናኙትን የክስተት ሰንሰለት ማስነሳት እና 2) ማስታረቅ። ከዝቅተኛ-ግንኙነት ወደ ከፍተኛ-ግንኙነት ማሰሪያ መሸጋገር።በማሰሪያ ቦታው ውስጥ ያሉ የተወሰኑ ቀሪዎች ለትብብር ሂደቱ አስተዋጽዖ ካደረጉ፣ሚውቴሽን Hv1.Residues D112,F150 የ GBTA ን ማጎሪያ-ምላሽ ከርቭ ሂል ኮፊሸንት መቀየር አለበት ብለን አስበናል። , S181 እና R211 ከዚህ ቀደም የ2GBI29 አስገዳጅ አካባቢ አካል ሆነው ታይተዋል እናም በተመሳሳይ መልኩ በ GBTA ማሰሪያ ውስጥ እንደሚሳተፉ ገምተናል (ምስል 3A)። የ GBTA ተከላካይ ትኩረት ምላሽ ኩርባዎችን ለተለዋዋጭ ቻናሎች D112E ፣ F150A ፣ S181A ለካን። , እና R211S (ምስል 3) እና የ Hill Coefficientsን ከ Hv1 የዱር-አይነት ጋር በማነፃፀር 2GBI ን እንደ ማጣቀሻ ይጠቀሙ.Residue V109 በ S1 ክፍል ልክ እንደ D112 ተመሳሳይ ፊት ላይ እና በሴል ውስጥ አንድ ተጨማሪ ሄሊካል ማዞር አለው. V109 በ2GBI29 ትስስር ውስጥ አልተሳተፈም፣ የV109A ሚውታንትን እንደ መቆጣጠሪያ ተጠቀምንበት (ምስል 3 ለ) (ሀ) የተጠቆሙ የHv1 ቅሪቶች በጓኒዲን ተዋጽኦ ማሰሪያ ውስጥ የሚሳተፉ።የተቆራረጡ ሰማያዊ ኩርባዎች ከዚህ ቀደም የታቀዱትን የጎን ሰንሰለቶች ይከብባሉ 2GBI29 ከተለያዩ ክፍሎች ጋር መስተጋብር የሚፈጥሩ። ጥቁር ቀይ)።እያንዳንዱ ነጥብ ከ3 እስከ 12 መለኪያዎች ± SD V109 አማካኝ መከልከልን እንደ አሉታዊ ቁጥጥር ይወክላል።Curves are Hill fits ግልጽ የሆኑ የKd እሴቶችን ለማግኘት ይጠቅማሉ(ተጨማሪ ሠንጠረዥ 1ን ይመልከቱ)።የሂል ኮፊሸንስ (ሸ) በ ውስጥ ይታያል። የመግቢያ ሂስቶግራም የሚወሰነው በማሟያ ስእል 3 እና 4 ላይ ከተጠቀሱት ተስማሚዎች ነው. የ Hv1 WT የማጣቀሻ ሸ ዋጋዎች በተቆራረጡ መስመሮች ይታያሉ. ኮከቦች በ mutant እና WT ምንባቦች መካከል በስታቲስቲካዊ ጉልህ ልዩነቶች ያመለክታሉ (p 0.05) ቅናሽ አገኘን (ምስል 5c) ይህ በመጠበቅ ረገድ ሚናው ቢኖረውም ሁለት ንዑስ ክፍሎች አንድ ላይ አስፈላጊ ናቸው፣ ነገር ግን ሲሲዲ በቀጥታ በ GBTA ማሰሪያ ጣቢያዎች መካከል የተጠላለፉ allosteric መጋጠሚያዎችን አያገላግልም። (ሀ) የ Hv1 dimer ስዕላዊ መግለጫ በ S4 ውስጠኛው ጫፍ ላይ በሳይቶፕላስሚክ ጥቅልል-ጥቅል ጎራ (ሰማያዊ ቀስቶች) መካከለኛ የሆነ የኢንተር-ሱቡኒት ትስስርን ለመበጥበጥ የተነደፈ ትራይግሊሲን ሚውቴሽን ያለው። የተጠቆሙ ሚውቴሽን፣ በንዑስ ክፍሎች (ሰማያዊ ቀስቶች) መካከል በሚጣመሩ የS1 ቁርጥራጮችን ለመፈተሽ የተነደፉ።(c-h) 2GBI (ሳይያን) እና GBTA (ጥቁር ቀይ) የተጠቆሙትን ግንባታዎች በማጎሪያ-ጥገኛ መንገድ ይከለክላሉ።እያንዳንዱ ነጥብ አማካኝ መከልከልን ይወክላል። ± ኤስዲ ከ 3 እስከ 10 መለኪያዎች. ኩርባው ግልጽ የሆኑ የKd እሴቶችን ለማግኘት የሚያገለግል ኮረብታ ተስማሚ ነበር (ተጨማሪ ሠንጠረዥ 1 ይመልከቱ)። በተጠላለፉ ሂስቶግራሞች ውስጥ ያሉ ሂል ኮፊሸንስ በስልቶች ክፍል ውስጥ እንደተገለጸው ተወስኗል (ተጨማሪ ምስል 3 እና 4 ይመልከቱ)። የማጣቀሻ h እሴቶች ለ Hv1 WT እንደ ተቆራረጡ መስመሮች ይታያል። ኮከቦች በ mutant እና WT ምንባቦች መካከል በስታቲስቲካዊ ጉልህ ልዩነቶች ያመለክታሉ (p 0.05፣ ስእል 5d,i) የሁለቱም አጋቾቹን የሂል ኮፊሸን በከፍተኛ ሁኔታ እንዳልለወጠው ደርሰንበታል። ). በሌላ በኩል፣ ሚውቴሽን D123A የ GBTA ሂል ኮፊሸንት በከፍተኛ ሁኔታ ቀንሷል (p 0.05/14)። በሁለቱም ንዑስ ክፍሎች 123 ላይ ያለውን ክስ ገለልተኛ ማድረግ በ GBTA አስገዳጅ ትብብር ላይ ከፍተኛ ለውጥ ስላስገኘ፣ በሁለቱም ክፍሎች ላይ ያለውን ክፍያ መቀልበስ መጠነኛ ውጤት ያለው ቢሆንም፣ ከተገላቢጦሽ ቻናል ጋር አንድ ንኡስ ክፍል ብቻ እንዲካተት ትንታኔውን አራዘምን። የ Hv1-linked dimers በD123R ምትክ በሲ-ተርሚናል ንዑስ ክፍል (ምስል 5b) እና የትኩረት ምላሽ መከልከልን በ GBTA እና 2GBI ለካ። ከ WT-D123R ቻናሎች ጋር የጂቢቲኤ ትስስር ሂል ኮፊሸን ከዚህ የበለጠ ከፍ ያለ ሆኖ አግኝተናል። የዱር-አይነት Hv1 (p 0.05). እንዲሁም βME በሌለበት ጊዜ የጂቢቲኤ ትስስር ከ D112E I127C Hv1 dimer ጋር የሚያያዝ ሂል ኮፊሸን በመቀነሱ ወኪሎች (ምስል 6e እና ተጨማሪ ምስል 4) ከሚለካው እጅግ የላቀ መሆኑን ደርሰንበታል ይህም የ D112E ሚውቴሽን ያሳያል። በሳይስቴይን 127 መሻገር ምክንያት የ GBTA አስገዳጅ ትብብር መጨመርን አላስቀረም። ምስል 3). እነዚህ ግኝቶች ሲደመር የ GBTA ትስስር የሚጠናከረው በአጎራባች Hv1 ንኡስ ክፍል ውስጥ ባሉት የS1 ቁርጥራጮች ውጫዊ ጫፎች መካከል ባለው መስተጋብር በሚስብ ኤሌክትሮስታቲክ መስተጋብር ወይም በተተኩ ሳይስቴይንስ አልሎስቴሪክ ትስስር መካከል ያለው ትስስር በመፍጠር ነው ። ማራኪ ኤሌክትሮስታቲክ መስተጋብር በትብብር ላይ የሚያሳድረው ተጽዕኖ በ ሚውቴሽን D112E ሊወገድ ቢችልም፣ የኮቫለንት ቦንዶች ውጤት ግን አይችልም። የጉዋኒዲን ተዋጽኦዎችን ከHv1 ቻናሎች ጋር ለማገናኘት ያለውን ኬሚካላዊ ቦታ ባደረግነው ጥናት እንደ GBTA ያሉ 2-guanidinothiazoles ከ2-guanidinobenzimidazoles (ምስል 1c) የበለጠ steeper የማጎሪያ ጥገኝነት እንዳላቸው ደርሰውበታል። እና ሞኖሜሪክ ቻናሎች (ምስል 2a,b) እና አንድ ንዑስ ክፍል ከመከላከያ ጋር ቀድሞ የታሰረበት የዲሜሪክ ቻናል (ምስል 4) የ Hv1 በ GBTA መከልከል ድርጊቱ የተቀናጀ ሂደት ነው ብለን እንድንደመድም አድርጎናል. በሁለቱ ንኡስ ክፍሎች ውስጥ ያሉት ውህዶች ማሰሪያ ቦታዎች በአሎስቴሪያዊ ተጣምረው ነው GBTA ከክፍት ቻናል ጋር የሚያገናኘው ግኝት፣ ከዚህ ቀደም ለተዛማጅ ውህድ 2GBI32 እንደታየው፣ allosteric coupling በተለይ በክፍት ግዛት ውስጥ ሊገመገም እንደሚችል ይጠቁማል።የእኛ የትብብር ማሰሪያ ሞዴል የ HV1 በ GBTA (ምስል 2 ሴ.ፒ.) መካድ የማያስከትሉ ስርአት (ምስል 2 ሴ) መበስበስ ከተለቀቀ በኋላ የመርከብ ሂደታችንን የሚደግፍ የቻናል ጅራት ፍሰት መበስበስ 2 ጊቢ እና ጂቢታ የተለያዩ ውጤቶችን አብራራ. በሁለት ማሰሪያ ጣቢያዎች (እንደ ኤች.ቪ.1 ባሉ አካባቢዎች) ውስጥ ሊገኝ የሚችል ከፍተኛው ኮረብታ ክበበኛው ከ 1.88 I127. ውስጥ ከ 1.31 ጋር የሚነካ የ GV1 የዱር አይነት ከ 1.31 ጋር የሚለካ ነው. በ HV1 I127.aby Case ውስጥ በሚያስደንቅ ሁኔታ ላይ የሚደረግ ነፃ ነፃነት ያለው ነፃ ኃይል, በ HV1 የዱር አይነት እና 2.7 kcal / Mole ውስጥ ያለው ልዩነት 1.3 kcal / Moleeations Abdresss ወደ ሄሞግሎቢን የኦክስጂን (ኦክስሎግሎቢን) በትብብር ዋና እና በደንብ የተጠናከረ ምሳሌ ነው. ከአለም አቀፍ ኃይል አንፃር, ከኤች.ኤል. ጋር በመመርኮዝ የ GBTAA ንባብ ትብብር ከኦ.ቪ.1 ጋር የተቆራኘው የ GBOGLASER ትብብር ከ ODOGLOBIN ጋር በተያያዘ ከ ODOGLOBIN ጋር በተያያዘ ከ ODOGLOBIN ጋር በመተባበር ከ ODOGLLOBIN ጋር በተያያዘ ነው. በአቅራቢያው ሞባይል ውስጥ የ GBTA ሞለኪውሎች አስገዳጅ የአቅራቢያው የ SUNDIOINESISISEDERSESDERSEDER የመመለስ የመጀመሪያ ደረጃ አሰጣጥ ሁኔታን የሚያመጣበት የአከባቢው ክፍል (የተስተካከለ ሁኔታ) እንዲመራ የሚያደርግ ሂደት ነው. በተደነገጉ ግንኙነቶች መካከል ለውጦች. ለእነዚህ ለውጦች ምላሽ ሰጪዎች የአቅራሻ ጣቢያዎችን ይለውጣሉ, በዚህ ሂደት ውስጥ ጠንካራ የ GBTAANDAGED. ቀደም ሲል የታየው የ HV1 ፕሮቶተን የመንጃ መንገድ (ክፍል) አካል ሆኖ የተገኘ ሲሆን እንደ የምርጫ ማጣሪያ 2,28. የእኛ ውጤቶች እንደ የሚያሳዩት በሁለቱ የ HV1 ማደንዘዣዎች ውስጥ የመርጫ ማጣሪያ ጣቢያዎች ናቸው. የ HV1-ሲቪል ክሊም ቺሚራ በተሰነዘረባከሙ አቅጣጫዎች የ SELCHERACERAIS CANDERD SUTPLING ጋር የተዋሃደውን የ SELOSSTICED አቅጣጫዎች በጥቁር ቀስቶች ይታያሉ. (ሀ) የኤች.ሲ.ሲ.ሲ.ሲ.ሲ.ሲ.ፒ.ፒ. የተተነተኑ ጊባዎች የተተነበዩባቸው አካባቢዎች እንደ ግራጫ ኦቭልስ ውስጥ የተተነበዩበት መንገድ ነው. ከተመረጡት ጣቢያዎች መካከል የተካተቱ መደርደሪያዎች በተቀባዩ ቦታዎች መካከል የተካተቱ መደርደሪያዎች በተቀባው የስራዎች አከባቢዎች ተመርጠዋል. in two different dimer configurations as seen from the extracellular side of the membrane plane.On the left panel, the dimer interface is formed by the S4 helix.Rotation of the two VSDs 20 degrees clockwise around an axis perpendicular to the membrane plane, accompanied by የሁለቱ S4 ዎዎች (የተደነገጉ ፍላጻዎች) የማሳወቂያ ማጠናቀቂያዎች መለያዎች, ቀለል ያሉ ከሆነዎች ውስጥ በቀኝ በኩል የሚገኘውን ዝግጅት ያመርታል. በ 4G80 ክሪስታል መዋቅር ውስጥ በሚገኘው የአዋቂ ውቅር ውስጥ. CEVEP P140 በ HV1 ውስጥ ከ SEV23 ጋር ይዛመዳል. ውጤታችን 123 (123d / 123 / 123R / 123D) መካከል የተዋሃደ የኤሌክትሮስታቲክ መስተጋብር ከ "መደበኛ" ትስስር ከ "መደበኛ" የ GBATADER ትስስር ጋር ተያይዞ የሚመጣ ሲሆን የመሳሰለ መስተጋብር (123d / 123r) , ትብብር (ምስል 5G). ከአላስሊን ምትክ ጋር አፀያፊ የመገናኛ መስተጋብር ማስወገጃ እንዲሁ ወደ ከፍተኛ ጥራት ያለው መግባባት ያስከትላል ተብሎ ይጠበቃል. ማብራሪያ በሃይድሮፊሊካዊ አካባቢ መካከል የሃይድሮፊዚክ ቀሪዎችን የማስቀረት የመቋቋም ውጤት በማስወገድ ምክንያት, በዚህም ምክንያት, የከፍተኛ ተደራሽነት አጠቃላይ ተደራሽነት በቅርብ ጊዜ ዘግቧል. የሥራ መደቡ መጠሪያ D171 (ከ DV23 ጋር የሚዛመድ). የ HV1 ሰርጦች በበርካታ ሽግግሮች ውስጥ በበርካታ ሽግግር 1,40,41.QUAN በኩል የተካሄደ ነው. በተባበሩት መንግስታት ጎዳናዎች ውስጥ የሚከናወኑ ፕሮቶኖች እንዲከፈት የሚያስችል ፕሮቶኔቶችን የሚሰጥ ልዩ ሽግግር በ voltage ልቴጅ ውስጥ ያለው ለውጥ በ voltage ልቴጅ-ክሊፕስ ውስጥ ተቆጣጠረ. በአቅራቢያው በተቀባው የመመለሻ አስተባባሪዎች በተቀባበረው የወረቀት ማቀነባበሪያዎች መካከል ባለው የ P171 ፍሎራይቲክ የመስተዋወቂያ ማቀነባበሪያዎች በ D171 በተካሄደው የአቅራቢያው የመመለሻ ግንኙነቶች መካከል ያለው የ P173 ቅሬታ በበጀት ዓመቱ ከፈለግነው ከአቅራቢያው ጋር የሚጣጣም ነው እና በ GBTA አሰጣጥ ጣቢያዎች መካከል የአልሎስስተር አስጨናቂ ማጭበርበሮችን ቀይር. ፉጂዋራ እና ሁለት የሳይቶኒካዊ ዋልታ ኮራ (ምስል 7 ቢት, የቀኝ ፓነል) የመብረቅ ሞዴል ውስጥ የተዘበራረቀ ነው. የ S4 ዎልኒክስ እና የ CCD.IN ን የሚያገናኝ የክልሉ አጠቃላይ VSD እና ተግባራዊ ትንታኔ, HV1 ሰርጦች የሚከሰቱ ሲሆን ሥርዓተ-ተከላ ተከላካይ ሰርጥ በሁለተኛ ደረጃ በሚዘጋበት ሁኔታዎች ውስጥ ይገኛል. ስለዚህ, የተገኙት የ S4-S4 በይነገጽ የ Store-Stord Guopse ውቅር. Adens7,21,26 ንብረቶች በሚነፃፀሩ ግንኙነቶች ውስጥ የ S1 እና S2 ተካፋዮች ተገኝተዋል. የተዘጉ ግዛቶች, ከታማኝ et al ግኝቶች ጋር የሚጣጣም ሀሳብ. S1 3 3 ን በፀደቁ ወቅት. እዚህ, በተከፈተ ሁኔታ በተካተተሩበት ጊዜ በተካሄደ ሁኔታ ውስጥ የ SELOSTICESTICESTERESEDES ን ዋና ዋና ኤሌክትሮኒክስ ጫፎች እንዲደግፉ የተባሉ የኤሌክትሮስታቲክ ማቋረጫዎችን ለመደገፍ ቅርብ እንደሆኑ እናሳያለን. የሁለት S4 heed heeds heas ውጫዊ ማጠናቀቂያዎች የመለያየት አፕሊኬሽንስ ጋር በቀጥታ ስርአት. ግኝቶቻችንን (ምስል 7b, የቀኝ ፓነል). ይህንን ውቅር ክፍት በሆነ ሁኔታ ውስጥ እንዲኖር እንመክራለን. ምንም እንኳን የፊዜዌ ኢንዛይም እንደ ሞኖመር የሚሠራ ቢሆንም, የተናወተው vsd አወቃቀር በተንቀሳቃሽ ግዛት ውስጥ የተያዙ ናቸው. ለ HV1 (ምስል 7 ሴ). በአቅራቢያው ከሚገኘው የፊዜው አቅራቢያ ቅርብ የሆነ ቀሪ ሆኖ በ ውስጥ ካለው የ SEV23 ጋር የተዛመደ ነው. እና የሲቪል ዲዛይነኞች የሚጠቁሙት የእነዚህ ፕሮቲኖች Vsds የተብራራ የ S1 ፍፃሜዎች የሚያንፀባርቁበትን ቦታ የሚያንፀባርቁበት በይነገጽ የመመስረት ዝንባሌ አላቸው. የ HV1 የወንድ ሞባይል ማግኛ አስፈላጊ ሚና ለወንድ ለምትክልትነት ለመቆጣጠር የ HV1 ን ማካተት ለማጉዳት የሚያምር የአደንዛዥ ዕፅ target ላማ ያደርገዋል. ዕድሜያቸው 12 ወይም Colorectal ካንሰር ባለባቸው ህመምተኞች መካከል መኖር 13.; ለ B-Countal Lovility to inventress targets ላማ ማድረግ ወይም የጊዳኒያኖቶቶዞል መጫዎቻዎች በ ውስጥ የመገናኛ ማስተራሪያዎችን ማጎልበት እንደሚችሉ ይገነዘባሉ. ግኝት በ የ HV1 ንዑስ ማገጃዎችን ለመጨመር የመግዛት አፀያፊነት የሚመራ, የ HV1 ሰርጦችን ማነጣጠር የበለጠ ኃይለኛ መድኃኒቶች እድገት ያስከትላል. የቦታ-ተኮር የሰብአዊ መብት የተካሄደው የሰው ልጅ ኤች.ቪ.ሲ.ሲስ መደበኛ Pv11 እና 228 እና 228 እና 228-78 እ.ኤ.አ. the C-terminus of one subunit is linked to the N-terminus of the second subunit through the GGSGGSGGSGSGGSGG linker.The pGEMHE plasmids containing the various constructs were linearized with Nhe1 or Sph1 restriction enzymes (New England Biolabs) and RNA synthesis was performed with the T7 MMMESSSSSSES COMINEC (አብርሃም). ከኤሌክትሮዞስዮሎጂያዊ መለኪያዎች በፊት ከቁጥር ደቂቃዎች በፊት CRNA በ Xenopus Oocyates (50 NLY). ከ Ecocyte ባዮሎጂስት ውስጥ አር ኤንኤኤኤኤኤኤኤ ኤም ኤም ኤም ኤም ኤም ኤም ኤም ኤም ኤም ኤም ኤምኤምኤስ . 2-ጊዳዲኖ-ቤዚኖሚኖሚኖሌል [2], 2-ጊዳዲኖ-ቤዝቴሎሎሎ (ባለ 4 ሜትል-1,3-rome- 1 - ህትጽኤል - 1,3 - ሀኖስ -2 - አዎ) ጊያንዲን) [6], ኤንድሌ 2- mathy-1-ካርቦሃይድ -4- Motholy-4- mathylo-4- thatyl- 1- Shathy- 5-ካርቦሃብስ [9] እና (ባለ 2-ጊዳዲኖ -4- mythy-1-ታሊል - 5-7-7-7) ከ CAP Berdich.footidine (7) የመጡ ናቸው (4) - (4-ክሎሮፊን) -1,3-ፓዎል - 2,3-ታሊያ -2-6 - 1-2-4 - (3,4 - ariahoxylodell) -1,3- thazolodelode (12- thale- 2- yol) ጊናዲን [12] ነበር ከ Matrip ሳይንሳዊ. ቢያንስ 99% ንፅህና. ከ 2-አሚኖ -4- (Trifulio-4- (Truifulo-4- (Tryfnoushio-4- (እ.ኤ.አ. ለ 4 ሰዓታት ያህል የተደነገገው ለ 4 ሰዓታት ያህል በተቀዘቀዘ ነበር. 65 ° ሴ)) ለበርካታ ሰዓታት, እና ከዚያ ከአገሬም የአስተማሪ (500 ሚ.ግ., 500 ሚ.ግ., 48%). MP 221-222 ° ሴ (lash 225-226 ድግሪ ሴንቲ ግሬድ 1h NMR (500 ሜኤች, ዲኤምሶ -86): - 7.25 (በጣም ሰፊ s, 4 ኤች. , 1 ሰ - j = 8.1 HZ) .13c NMR (2004.2 (መ, j = 3.5 H6), 117.7 (ዲ, j = 3.5 hz), 121.7, 124.6 (q, j = 272 HZ), 126.1 (ጥ, j = 272 edz), 134.6, 155. 58.hress co / Z1. 15. ኤም. : 261.0419. ቀደም ሲል ቴህዞች (3,2 -2 -2-5 ሚሚ (300 ሚ.ግ. (300 ሚ.ግ. (300 ሚ.ግ. (300 ሚ.ግ. (300 ሚ.ግ. እ.ኤ.አ. በአነስተኛ ቁርጥራጮች ተሰብስቦ ግራጫ ቢጫ አምበርሶስ ጠንካራ ለማቅረብ ውሃ ታጥቧል. (38 ሚ.ግ. 10%) MP 246-250 ° ሴ 1: 500 ሜ.ዲ. , J = 8.6 HZ), 7.89 (D, 1 ሰ, j = 8.6 hs j. 82 ሰ. 8.2 ሰዎች), 8.35 (ዲ, 1 ሰ) .13 ሴ.ኤል (150) MHZ, DMSO-D6): δ = 119.4, 12, 43.4, 12,7, 12.6. 5, 4.5, 4.1.h10.7, 13.hifs , ተገኝቷል 243.0704. በ PCOON Dodids 1440A (ሞለኪውላዊ መሳሪያዎች (ሞለኪውላዊ መሳሪያዎች) ቁጥጥር የተደረገላቸው የተለያዩ ደንቦችን በመጠቀም የ Procoation Gockates ውስጥ የውስጥ እና ውጫዊ ቧንቧዎች ተመሳሳይ ቅንብሮች አላቸው-100 ሚሊሊን 2- (n-Morthlonlo) ) የኢታንስሉፎኒክ አሲድ (MES), 30 ሚ.ሜ. aretherylimonium (5 ሚሊኖቲቪል) - ፒኤች 6.0 ከሻይ ሃይድሮክሳይድ ጋር. ) እና አመጣጥ 8.1 (መነሻ). የተለያዩ የ HV1 መቆጣጠሪያዎች የያዙ መፍትሄዎች እና በአንዳንድ ሁኔታዎች በ PCLAMP ሶፍትዌር TTL (ትራንስፎርተር- የአስተያየት አመክንዮ) ምልክቶች የመፍትሔ ሃይብስ የመፈፀም ሙከራዎች የተከናወኑት ባለብዙ-ቱቦ ማቀነባበሪያ ሙከራዎች በ Patch Prupette.counten Encenter የመለኪያ ማቅረቢያ ጫፎች የተከናወኑት በፒ.ሲ.ኤል.ኤል.ኤል ኤምፖሜትሪክ መለኪያዎች የተከናወነ ነበር ከፈተናው ቀደመው በስተቀር ከ -20 MV20 ሚ.ቪ. ጋር በተገለፀው የ VOPESS8,20.TIVEDSESTERSESSESSESSESSESTEDS -10 MVESTERSESTERSESTERSESTED ከ -20 MVEPES ውስጥ ከተገለጹት የ VOPEST80 MVESTERS ከተገለፀው በስተቀር ለአሁኑ ህክምናው 18 ለማስተካከል ያገለግል ነበር. በኮረብታው ቀመር-የተካሄደውን ክምችት ነው