کليل Hv1 پروٽون چينل جي intersubunit انٽرفيس جي پڇا ڳاڇا هڪ allosterically جوڙيل تحقيق سان

Nature.com تي وڃڻ لاءِ توهان جي مهرباني. توهان جو برائوزر ورشن استعمال ڪري رهيا آهيو ان ۾ CSS لاءِ محدود سپورٽ آهي. بهترين تجربي لاءِ، اسان تجويز ڪريون ٿا ته توهان اپڊيٽ ٿيل برائوزر استعمال ڪريو (يا انٽرنيٽ ايڪسپلورر ۾ مطابقت واري موڊ کي بند ڪريو). ان دوران، پڪ ڪرڻ لاءِ جاري مدد، اسان سائيٽ کي بغير اسٽائل ۽ جاوا اسڪرپٽ ڏيکارينداسين. Hv1 وولٽيج-گيٽڊ پروٽون چينل هڪ dimeric ڪمپليڪس آهي جنهن ۾ ٻه وولٽيج-سينسنگ ڊومينز (VSDs) شامل آهن، جن مان هر هڪ گيٽڊ پروٽون پرميئشن پاٿ وي تي مشتمل آهي. Dimerization کي cytoplasmic coiled-coil ڊومين ذريعي ڪنٽرول ڪيو ويندو آهي. بند حالت کان منتقلي ٻنهي VSDs ۾ کليل رياست گڏيل طور تي ٿيندي آهي؛ تنهن هوندي به، هيٺئين ميڪانيزم جي باري ۾ ٿورڙي ڄاڻ آهي. Intersubunit انٽرفيسز allosteric عملن ۾ اهم ڪردار ادا ڪن ٿا. جڏهن ته، کليل Hv1 چينلن ۾ اهڙن انٽرفيس جي نشاندهي نه ڪئي وئي آهي. هتي اسان اهو ظاهر ڪريون ٿا ته 2-guanidinothiazole derivatives ٻن Hv1 VSDs کي ڪوآپريٽو طريقي سان بلاڪ ڪن ٿا ۽ انهن مرکبن مان هڪ کي کليل سبيونٽس جي وچ ۾ آلوسٽرڪ ملائڻ جي تحقيق جي طور تي استعمال ڪن ٿا. VSD جي پهرين transmembrane ٽڪڙي جي آخر ۾ هڪ intersubunit انٽرفيس ٺاهي ٿو جيڪو بائنڊنگ سائيٽن جي وچ ۾ جوڙيل وچولي ڪري ٿو، جڏهن ته ڪوئلڊ-ڪوئل ڊومين سڌو سنئون هن عمل ۾ شامل نه آهي. اسان کي اهو پڻ مضبوط ثبوت مليو آهي ته چينل جي پروٽون-منتخب فلٽر بلاڪر-بائنڊنگ تعاون کي ڪنٽرول ڪري ٿو. . وولٽيج-گيٽڊ پروٽون چينل مختلف جاندارن ۾ اهم ڪردار ادا ڪن ٿا، phytoplankton کان وٺي انسانن تائين 1. اڪثر سيلن ۾، اهي چينل پروٽين جي جھلي مان پروٽان جي خارج ٿيڻ جي وچولي ڪن ٿا ۽ NADPH oxidase جي سرگرمي کي منظم ڪن ٿا. انسانن ۾ واحد ڄاڻايل وولٽيج-گيٽڊ پروٽون چينل. Hv1 آهي، جيڪو HVCN1 جين 2,3 جي پيداوار آهي. Hv1 (اڪا VSOP) کي B سيل جي واڌ ۾ ڪردار ادا ڪندي ڏيکاريو ويو آهي، پيدائشي مدافعتي نظام 5,6,7,8، اسپرم سيل طرفان رد عمل واري آڪسيجن جي نسلن جي پيداوار. حرڪت9 ۽ پي ايڇ ريگيوليشن ايئر وي جي مٿاڇري جي سيال10. هي چينل ڪيترن ئي اوور ايڪسپريس ٿيل ڪينسر جي قسمن ۾ ملوث آهي جهڙوڪ بي-سيل malignancies4,11 ۽ سينو ۽ کولوريڪل ڪينسر 12,13. اضافي Hv1 سرگرمي ملي وئي جيڪا سرطان جي سيلز جي ميٽاسٽيٽڪ صلاحيت کي وڌائي ٿي 11، 12. دماغ ۾، Hv1 جو اظهار ڪيو ويو آهي. مائڪروگليا جي ذريعي، ۽ ان جي سرگرمي کي ڏيکاريو ويو آهي ته دماغ جي نقصان کي وڌائڻ لاء اسڪيمڪ اسٽروڪ جي ماڊل ۾. Hv1 پروٽين ۾ هڪ وولٹیج-سينسنگ ڊومين (VSD) شامل آهي، جنهن ۾ S1 کان S414 سڏجن ٿا چئن ٽرانسميمبرن حصن تي مشتمل آهي. VSD وولٽيج-گيٽڊ Na+، K+ ۽ Ca2+ چينلز ۽ وولٽيج-حساس فاسفيٽس، جهڙوڪ سي وي ايس پي کان. Ciona gutis15. انهن ٻين پروٽينن ۾، S4 جو C-ٽرمينس هڪ انفڪٽر ماڊل، پور ڊومين يا اينزائم سان ڳنڍيل آهي. Hv1 ۾، S4 جھلي جي سائٽوپلاسمڪ پاسي تي واقع ڪوئلڊ ڪوئل ڊومين (CCD) سان ڳنڍيل آهي. چينل هڪ dimeric ڪمپليڪس آهي جنهن ۾ ٻه VSDs شامل آهن، جن ۾ هر هڪ گيٽڊ پروٽون پرميئشن پاٿ وي 16,17,18 تي مشتمل آهي. اهي ٻه Hv1 سبيونٽ 19,20,21,22 گڏيل طور تي کولڻ لاءِ مليا آهن، اهو تجويز ڪيو ويو آهي ته allosteric coupling ۽ inter-subunit interactions play گيٽنگ جي عمل ۾ هڪ اهم ڪردار آهي. ڪوئل ٿيل ڪوئل ڊومين جي اندر سب يونٽن جي وچ ۾ انٽرفيس چڱي طرح بيان ڪيو ويو آهي ڇاڪاڻ ته ٻن الڳ ٿيل ڊومينز جا ڪرسٽل ڍانچي موجود آهن 22,23. ٻئي طرف، جھلي جي اندر VSDs جي وچ ۾ انٽرفيس نه آهي. چڱي طرح سمجھيو ويو. Hv1-CiVSP chimeric پروٽين جي ڪرسٽل ڍانچي ھن انٽرفيس جي باري ۾ معلومات مهيا نه ڪري ٿي، ڇاڪاڻ ته crystallized چينل ڪمپليڪس جي trimeric جوڙجڪ خمير ليوسائن زپ GCN424 پاران اصلي Hv1 CCD جي متبادل جي نتيجي ۾ ٿي سگھي ٿي. Hv1 چينل جي subunit تنظيم جي هڪ تازي مطالعي مان اهو نتيجو ڪڍيو ويو آهي ته ٻه S4 هيليڪس سي سي ڊي ۾ ثانوي ڍانچي جي سخت خرابي جي بغير منتقلي ڪن ٿا، نتيجي ۾ ڊگھي هيليسز جيڪي جھلي کان شروع ٿينديون آهن ۽ سيٽوپلازم ۾ پروجيڪٽ. سيسٽين ڪراس لنڪنگ تجزيي جي بنياد تي، هن مطالعي جي تجويز پيش ڪئي وئي آهي ته Hv1 VSDs هڪ ٻئي سان S4 ڀاڱي سان رابطو ڪن ٿا. جڏهن ته، ٻين مطالعي ۾ VSDs جي وچ ۾ متبادل انٽرفيس تجويز ڪيا ويا آهن. انهن انٽرفيس ۾ شامل آهن S1 سيڪشن 17، 21، 26 ۽ S2 سيڪشن 21 جي ٻاهرئين پڇاڙيون. تڪرار جو هڪ ممڪن سبب انهن مطالعي جو نتيجو اهو آهي ته VSDs جي وچ ۾ آلوسٽرڪ جوڙيل گيٽنگ جي عمل جي سلسلي ۾ جانچيو ويو، جيڪو بند ۽ کليل رياستن تي منحصر آهي، ۽ VSDs جي وچ ۾ انٽرفيس مختلف رياستن جي تبديلين ۾ مختلف ٿي سگهي ٿي. هتي، اسان اهو محسوس ڪيو ته 2-guanidinothiazole Hv1 چينلز کي روڪي ٿو synergistically پابند ٻن کليل VSDs سان، ۽ استعمال ڪيو هڪ مرکب، 2-guanidinobenzothiazole (GBTA)، کليل رياست ۾ سبونٽس جي وچ ۾ رابطي جي تحقيق ڪرڻ لاء. انٽرفيس. اسان ڏٺو ته GBTA بائنڊنگ وکر هڪ مقداري نموني سان چڱيءَ طرح بيان ڪري سگهجي ٿو جنهن ۾ هڪ سبونٽ کي هڪ بند ڪرڻ واري کي پابند ڪرڻ جي نتيجي ۾ ڀرپاسي واري سب يونٽ جي پابند لاڳاپي ۾ اضافو ٿئي ٿو. اسان اهو پڻ ڏٺا آهن ته بقايا D112، چونڊيل فلٽر. چينل 27، 28 ۽ گانيڊين ڊيريويٽ بائنڊنگ سائيٽ جو حصو 29 ڪنٽرول GBTA بائنڊنگ ڪوآپريٽوٽي. اسان ڏيکاريون ٿا ته ڪوآپريٽو بائنڊنگ Hv1 dimer ۾ برقرار رکي ٿي، جتي CCD S4 ڀاڱي کان جدا ٿي وڃي ٿي، اهو مشورو ڏئي ٿو ته CCD ۾ intersubunit انٽرفيس سڌو نه آهي. GBTA-binding سائيٽن جي وچ ۾ allosteric coupling ثالثي ڪريو. ان جي ابتڙ، اسان کي معلوم ٿئي ٿو ته S1 ٽڪرا سب يونٽن جي وچ ۾ انٽرفيس جو حصو آهي ۽ ڊيمر جي مرڪز کان پري S4 هيلڪس جي extracellular آخر سان ڀرپاسي VSDs جي ترتيب جي تجويز پيش ڪري ٿو. S1 ٽڪرا کليل حالت ۾ هجڻ گهرجي. Hv1 جا ننڍڙا ماليڪيول انبائيٽرز ڪينسر ضد دوائن ۽ نيورو پروٽيڪٽو ايجنٽ طور ڪارآمد آهن. جڏهن ته، اڄ تائين، چند مرکبات چينل 30,31,32,33 کي روڪڻ جي قابل ٿي چڪا آهن. انهن مان، 2-guanidinobenzimidazole (2GBI، مرڪب [1] تصوير ۾. . اڳ ۾ ڏيکاريو ويو آهي ته Hv1 کي روڪيو ويو تقريبن 2GBI جيترو مؤثر طور تي جڏهن 200 μM (شڪل 1b) جي ڪنسنٽريشن تي آزمايو ويو. اسان ٻين thiazole نڪتلن کي جانچيو ۽ ڏٺائين ته انهن مان ڪجهه چينل کي GBTA جي ڀيٽ ۾ هڪجهڙائي يا وڌيڪ طاقت سان روڪيو آهي (تصوير 1 ۽ اضافي. متن).اسان چار thiazole derivatives (GBTA ۽ مرکبات [3]، [6] ۽ [11]، تصوير. 1c) جي ڪنسنٽريشن ردعمل وکر جو اندازو لڳايو ۽ ڏٺائون ته اهي 2GBI جي ڀيٽ ۾ وڌيڪ تيز هئا. The Hill coefficients (h) thiazole derivatives جي حد 1.109 ± 0.040 کان 1.306 ± 0.033 تائين (تصوير. 1c ۽ ضمني شڪل. 1). ان جي ابتڙ، 2GBI لاءِ هيل ڪوفيشيٽ 0.975 ± 0.024 29، تصوير 2a ۽ ضمني شڪل 1) هو. 1 کان مٿي هڪ هيل ڪوفيسيٽ پابند تعاون کي ظاهر ڪري ٿو. ڇاڪاڻ ته هر هڪ جي پنهنجي Hv1 جي ذيلي يا غير بِٽ آهي. بائنڊنگ سائيٽ، 29,32 اسان اهو دليل ڏنو ته هڪ سبيونٽ کي thiazole derivative جو پابند ڪرڻ سان هڪ ٻئي inhibitor molecule جي ڀرپاسي واري subunit کي پابند ڪري سگهجي ٿو. GBTA تمام اعليٰ هيل ڪوفيشيئنٽ سان ٽيسٽ مرڪب هو. ان ڪري، اسان هن مرڪب کي چونڊيو. بائنڊنگ مطابقت جي ميکانيزم جو وڌيڪ مطالعو ڪيو ۽ 2GBI کي ريفرنس منفي ڪنٽرول طور استعمال ڪيو. (a) ٽيسٽ مرڪب: [1] حوالو Hv1 inhibitor 2-guanidino-benzimidazole (2GBI).[2] 2-گيانيڊينو-بينزوٿيازول (GBTA)، [3] (5-trifluoromethyl-1,3-benzothiazol-2-yl) Guanidine، [4] naphtho[1,2-d][1, 3] Thiazol-2-yl -گوانيڊائن، [5](4-ميٿيل-1,3-ٿيازول-2-yl)گوانيڊائن، [6](5-برومو-4-ميٿيل-1,3-ٿيازول-2-yl)گوانيڊائن، [7] famotidine، [8] 2-guanidino-5-methyl-1,3-thiazole-4-carboxylic acid ethyl ester, [9] 2-guanidino-4-methyl Ethyl-1,3-thiazole-5-carboxylate، [10 ](2-guanidino-4-methyl-1,3-thiazol-5-yl)ethyl acetate, [11]1-[4-(4-Chlorophenyl)-1,3-thiazol-2-yl]guanidine، [ 12]1-[4-(3,4-dimethoxyphenyl)-1,3-thiazol-2-yl] guanidine. .Hv1 پروٽون وهڪرن جي ماپ ڪئي وئي Xenopus oocytes جي اندران-ٻاهران تختي ۾ -80 mV کان +120 mV جي امڪاني صلاحيت کان depolarization جي جواب ۾. 200 μM.pHi = pHo = 6.0 جي ڪنسنٽريشن تي هر انابيٽر کي غسل ۾ شامل ڪيو ويو. ڊيٽا جو مطلب آهي ± SEM (n≥4). (c) ڪنسنٽريشن تي منحصر انساني Hv1 جي مرڪبات جي ذريعي [2]، [3]، [6] ۽ [11]. هر نقطو 3 جي وچ واري رڪاوٽ ± SD جي نمائندگي ڪري ٿو. 15 ماپ تائين. لڪير هڪ هيل فٽ آهي جنهن کي ضمني جدول 1 ۾ رپورٽ ڪيل ظاهري Kd قدرن کي حاصل ڪرڻ لاءِ استعمال ڪيو ويو آهي. هيل ڪوئفينٽس ضمني شڪل 1 ۾ ڄاڻايل فٽ مان طئي ڪيا ويا: h(1) = 0.975 ± 0.024 h(2) = 1.306 ± 0.033، h(3) = 1.25 ± 0.07، h(6) = 1.109 ± 0.040، h (11) = 1.179 ± 0.036 (طريقي ڏسو). (a,b) مرڪب 2GBI ۽ GBTA ڊميرڪ ۽ مونوميرڪ Hv1 کي ڪنسنٽريشن-انحصار انداز ۾ روڪي ٿو. هر نقطو 3 کان 8 ماپن جي وچين رڪاوٽ ± SD جي نمائندگي ڪري ٿو ۽ وکر هڪ هيل فٽ آهي. انسيٽ هسٽوگرامس مقرر ڪيا ويا آھن فٽ مان ڄاڻايل آھن ضمني تصوير 3 ۽ 4 ۾. GBTA جو ڪنسنٽريشن ردعمل (a) ۾ ڏيکاريل آھي جھڙو ئي آھي تصوير ۾. GBTA جي dimeric Hv1 کي ڪوآپريٽو بائنڊنگ. سخت ڪارو لڪير تجرباتي ڊيٽا کي مساوات (6) جي مطابق ڏيکاري ٿي، جيڪا بيان ڪري ٿي بائنڊنگ ماڊل (d) ۾ ڏيکاريل آهي. ڊيش ٿيل لائينون ليبل ٿيل سب 1 ۽ سب 2 بيموليڪولر ايسوسيئيشن جي نمائندگي ڪن ٿيون. پهرين ۽ ٻئي بائنڊنگ واقعن جا الڳ الڳ توازن وکر، ترتيب سان (ذيلي 1: OO + B ⇄ BO*، Kd1 = 290 ± 70 μM؛ ذيلي 2: BO* + B ⇄ B*O*، Kd2 = 29.3 ± 2.5 μM ).(d) Hv1 بلاڪ جي تجويز ڪيل ميکانيزم جو اسڪيمي ڊاگرام. GBTA جي صورت ۾، هڪ کليل سبونٽ کي پابند ڪرڻ ڀرسان کليل سبونٽ (Kd2 0.05) گهٽتائي، جهنگلي قسم جي مقابلي ۾ GGG چينلز جي مقابلي ۾ (Fig. 5c)، اهو مشورو ڏئي ٿو ته ان جي ڪردار کي برقرار رکڻ جي باوجود. ٻه ذيلي يونٽ گڏ اهم آهن، پر سي سي ڊي سڌي طرح GBTA بائنڊنگ سائيٽن جي وچ ۾ intersubunit allosteric coupling ۾ ثالثي نه ڪندو آهي. (a) S4 جي اندروني پڇاڙيءَ تي ٽرگليسين ميوٽيشن سان Hv1 ڊائمر جو اسڪيميٽڪ ڊاءِگرام، سيٽوپلاسمڪ ڪوئلڊ-ڪوئل ڊومين (نيرو تير) جي وچ ۾ مداخلت ڪندڙ انٽرسوبونٽ ڪوپلنگ کي ٽوڙڻ لاءِ ٺهيل آهي. اشارو ٿيل ميوٽيشنز، S1 ٽڪرن کي جانچڻ لاءِ ٺهيل آهن جيڪي سبونٽس (نيرو تير) جي وچ ۾ ملائڻ ۾ شامل آهن. (c-h) 2GBI (سيان) ۽ GBTA (ڪارو ڳاڙهي) اشارو ٿيل تعميرن کي ڪنسنٽريشن-انحصار انداز ۾ روڪيندا آهن. هر نقطو مطلب جي رڪاوٽ جي نمائندگي ڪري ٿو. ± SD جي 3 کان 10 جي ماپ. وکر هڪ هيل فٽ هوندو هو جيڪو ظاهري Kd قدرن کي حاصل ڪرڻ لاءِ استعمال ڪيو ويندو هو (ڏسو ضمني جدول 1) .Interpolated هسٽوگرامس ۾ هيل ڪوئفينٽس طئي ڪيا ويا هئا جيئن بيان ڪيل طريقن جي سيڪشن ۾ (ڏسو ضمني شڪل 3 ۽ 4) لاءِ حوالو h اقدار Hv1 WT کي ڊش ٿيل لائينن طور ڏيکاريو ويو آھي. Asterisks ظاھر ڪن ٿا انگ اھم فرقن جي وچ ۾ ميوٽيٽ ۽ WT جي وچ ۾ (p 0.05، Fig 5d) جي مقابلي ۾ ڪنهن به رڪاوٽ جي هيل ڪوفيڪٽ کي خاص طور تي تبديل نه ڪيو. ). ٻئي طرف، ميوٽيشن D123A GBTA (p 0.05/14). ٻنهي سب يونٽن تي پوزيشن 123 تي چارج کي غير جانبدار ڪرڻ جي نتيجي ۾ GBTA بائنڊنگ تعاون ۾ مضبوط تبديلي آئي، جڏهن ته ٻنهي سب يونٽن تي چارج کي ريورس ڪرڻ سان صرف هڪ ننڍڙو اثر پيو، اسان تجزيي کي وڌايو ته صرف هڪ سب يونٽ کي چارج جي انوريشن چينل سان شامل ڪيو وڃي. C-ٽرمينل سبونٽ (Fig. 5b) ۾ D123R جي متبادل سان Hv1-منسلڪ ڊيمرز ٺاهيا ويا ۽ GBTA ۽ 2GBI پاران ڪنسنٽريشن-ردعمل جي نمائش کي ماپ ڪيو. اسان ڏٺو ته GBTA جو هيل ڪوفيشئٽ WT-D123R چينلن جي ڀيٽ ۾ گهڻو وڌيڪ هو. جهنگلي قسم جي Hv1 (p 0.05). اسان اهو پڻ ڏٺو آهي ته βME جي غير موجودگيءَ ۾، D112E I127C Hv1 dimer تي پابند GBTA جو هيل ڪوفيشيئنٽ ان کان گهڻو وڌيڪ هو جنهن جي ماپ گھٽائڻ واري ايجنٽ جي موجودگيءَ ۾ ماپي وئي (Fig. 6e ۽ Supplementary Fig. 4)، مطلب ته D112E ميوٽيشن. سيسٽين 127 جي ڪراس لنڪنگ جي نتيجي ۾ GBTA بائنڊنگ تعاون ۾ واڌ کي ختم نه ڪيو. D112E، I127C Hv1 dimers سان 2GBI بائنڊنگ جي هيل ڪوفيشيٽ پڻ D112E ميوٽيشن (شڪل 1) کان متاثر نه ٿيو (شڪل 1).6d ۽ اضافي. تصوير 3). گڏ ڪيل، انهن نتيجن جو مشورو ڏنو ويو آهي ته GBTA بائنڊنگ S1 ٽڪرن جي ٻاهرئين سرن جي وچ ۾ رابطي سان وڌايو ويو آهي ڀرسان Hv1 سبونٽس ۾ پرڪشش برقياتياتي رابطي جي ذريعي يا متبادل ٿيل سيسٽين جي وچ ۾ ڪوولنٽ بانڊ جي ٺهڻ ذريعي، سائيٽن جي وچ ۾ آلوسٽرڪ ڪوپلنگ وڌائي ٿو ۽ نتيجن کي پابند تعاون ۾. جڏهن ته cooperativity تي پرڪشش electrostatic رابطي جو اثر ميوٽيشن D112E جي ذريعي ختم ڪري سگهجي ٿو، covalent بانڊ جو اثر نٿو ٿي سگهي. guanidine derivatives کي Hv1 چينلز تي پابند ڪرڻ لاءِ موجود ڪيميائي خلا جي اسان جي ڳولا ۾، اسان ڏٺو ته 2-guanidinothiazoles جهڙوڪ GBTA ۾ 2-guanidinobenzimidazoles (Fig. 1c) جي ڀيٽ ۾ وڌيڪ ڪنسنٽريشن انحصار آهي. ۽ monomeric چينل (Fig. 2a,b) ۽ dimeric چينل ڏانهن جنهن ۾ هڪ سب يونٽ اڳ ۾ بند ٿيل هو انابيٽر (Fig. 4) اسان کي ان نتيجي تي پهچن ٿا ته GBTA پاران Hv1 جي روڪٿام عمل هڪ هم وقت سازي عمل آهي، ۽ ٻن ذيلي يونٽن ۾ مرڪب جي بائنڊنگ سائيٽن کي allosterically جوڙيو ويو آهي. اها دريافت جيڪا GBTA کليل چينل سان جڙيل آهي، جيئن اڳ ۾ لاڳاپيل مرڪب 2GBI32 لاءِ ڏيکاريل آهي، اهو مشورو ڏئي ٿو ته آلوسٽرڪ ڪپلنگ کي خاص طور تي کليل حالت ۾ اندازو لڳائي سگهجي ٿو. اسان جي ڪوآپريٽو بائنڊنگ ماڊل ماتا طا خناہ (ميل) طرفان HV1 جي بنياد تي پابندي جي پابندي جي حساب سان بيان ڪري ها ۽ 2 اڻ تي گرمي جي مختلف اثرن جي مختلف اثرن جو مختلف اثرن جي مختلف اثرن جو مختلف اثرن جي مختلف اثرن جو مختلف اثرن جي مختلف اثرن جو ذميواريون بيان ڪري ٿي. وڌ ۾ وڌ ٽڪري جيڪو هڪ خاص طور تي حاصل ڪري سگهجي ٿو جنهن کي ٻن پابندين سائيٽن سان هڪ alopticqualquicquicquicquicquicquicquicquical پروٽينس (جهڙوڪ HV1) کي 1.31.27c.ter.ter ۾ 1.88 ۾ شامل ڪيو ويو آهي. سنجيده مفت توانائي، گهٽ ۾ گهٽ ۽ تمام گهٽ لاڳاپي واري سائيٽن جي پابندين (طريقن جي برابر توانائي)، HV1 Welt-I127C جي صورت ۾ 1.3 ڪيڪال / مول. پابند Xxygen تائين هموگلوبن جي سڀني مشهور ۽ بهترين مطالعو ڪيو ويو آهي ڪيولل / ايم ايل، تجرباتي حالتن جي عالمي حالتن تي منحصر آهي. اسان جي همٿ ماڊل ۾، GBAT انولز کي هڪ ماتحت جو پابند آهي ته ڀرپاسي واري ضمني جي پابندين ۾ هڪ عمل جي بنياد تي وڌائي ٿو سبستن جي وچ ۾ تبديليون تبديل ڪيون ويون آهن، انهن تبديلين جي جواب سان تبديل ٿيندڙ، ڀرپور سبسٽيڪٽ جي رسائي تي رڪاوٽ، نتيجا واپس ٿيندڙ بائيزميٽ ڊي 1112 اڳ ۾ ڏيکاريل هو HV1 پروٽين جي پرنٽنگ رستي جو حصو ۽ چونڊ فلٽر 2،28.28.28. اسان جا نتيجا ظاهر ڪن ٿا ته ٻن HV1 سبسڪيٽ ۾ چونڊيندڙ فلٽرز هڪ کليل رياست ۾ جڙيل آهن، ڊي 11232، K125 ۽ I125 جي جڳهه تي HV1-Siv1-Sivtrup Chimra.sterra.sgggngns.sgggggns onsugggngns on lesgulsgngns enculstle endultress on اري جي اختتام ۾ شامل آھن. (a) HV1 VSD جو اسڪيم VSD تي HV1-Siv1-Siv1-Sivps Stulss جي ڪرنل جوڙجڪ تي، هيليشنل حصا سي 4 حصن جي اندروني پڇاڙي کي سي پي ڊي سان ضم ڪيو ويو آهي. پابند GBA جي اڳڪٿي ڪيل جڳهن تي ڏيکاريل آهي سرمائي ovals.balsccks alstacts جي نشاندهي ڪيل جڳهن جي جڳهن تي جڙيل آهي. ٻن مختلف مدون جي تعميري ۾ جھلي واري جهازن جي تعصب جي ترتيب سان ڏٺو وڃي ٿو ٻن S4 هيلسن جي ٻاهرن جي حد کان عليحدگي (ڊنل ڪيل تارن) کي سا contions ي پاسي ڏيکاريل آهي. 4g80 کرسٽل جي جوڙجڪ ۾ مليل کرسٽل جي جوڙجڪ ۾ مليو. اسان جا نتيجا ان جا نتيجا ان جا نتيجا 123 (123 ڊي / 123r / 123r) جي وچ ۾ ڌمڪيون برابري جو رابطو رابطو آهي (123 ڊي / 123r) ، تعاون وڌايو ويو آهي (تصوير 5g) وضاحت جيڪا هائيڊروفوبڪ ۾ هائيڊروفوبڪ ريڊس کي هائڊروفڪوڪ ريڊس رکڻ جي عدم استحڪام جي خاتمي جي خاتمي جي اثرن جي خاتمي جي اثر کي ختم ڪري سگهجي ٿو ڪئئنوا گٽيس سي اي-ايڇ وي 1 ۾ پوزيشن (D123 سان گڏ (D123 سان مطابقت، چالو حالت ۾ هڪ هائيڊروفيلڪ ماحول ۾ موجود آهي. HV1 چينلز جي گيٽنگن جي گيٽنگز آهي هڪ فرق جي رستي ۾ تسلسل جي رستي ۾ ڪارڪنن کي وولٹیج سينسر جي رستي تي وولٹیج سينسر جي مرضي مطابق آهي. فلورسنٽ سگنل جي دائري جي وضاحت مطابق آهي ۽ GBA بائننگ سائيٽن جي وچ ۾ فالامڪ وڪامندي آهي. فجيااا ۽ القائق تي پيش ڪيل سائيٽر پلاٽڪ ڪوئلسڪ آف COTTOPLEMICIONS جو DISTER INTERINEN (تصوير، کاٻي پينلٽ جو نمونو S4 H4 هيلڪس ۽ سي سي ڊي کي ڳن connecting ڻ واري علائقي جو پورو وي ايس ڊي ۽ فعال تجزيو. تنهن ڪري، معلوم ڪيو ويو S4-S4 انٽرفيس آف اسٽيٽ ٽئڪس ترتيب ڏيڻ جي تشڪيل کي ظاهر ڪري ٿو. ايترا اسسٽنٽ انٹرويٽس جي شموليت ۾ S17،21 ۽ S2 جي شموليت کي کولڻ جو ثبوت مليو آهي بند ٿيل رياستون، هڪ خيال موهن ۽ الف الف جي نتيجن سان مطابقت رکي ٿي. S1 گيٽنگ دوران 39 کي منتقل ڪري ٿو. هتي، اسين ڏيکاريون ٿا، کليل رياست ۾، S1 هيلڪس جو خاتمو ڪيل ايڪٽرواٽڪ جو خاتمو ڪيو ويو آهي. هڪ ٻئي کان علاوه، هڪ ٻئي سان گڏ رابطو ڪرڻ لاء، هڪ 20 ° گھڙيال وارين جهازن جي گردش جي گردش، ٻن ايس 4 هيلس جي علامتي طور تي هڪ S1-S1 جي ترتيب سان گڏ آهي اسان جي نتيجن سان (تصوير 7 بي، صحيح پينل). اسان چين چينل کي کليل حالت ۾ هن ترتيب جي تجويز ڪريون ٿا. حالانڪه جو هڪ معالج هڪ معزز طور ڪم ڪرڻ لاء، انهي جي ڌار ڪيل وي ايس ڊي جي کرسٽل ان جي کرسٽل ان جوڙجڪ آهي HV1 لاء (تصوير 7c) ۽ سويپ بدوز اهو مشورو ڏئي ٿو ته انهن پروٽينس جا VSDS جا VSDS جو هڪ انٽرفيس آهي جتي S1 انٽيليشنل اختلافات جو اختلاف آهي. اسپرم سيل جي چالو ڪرڻ جو لازمي ڪردار هن چينل کي مرد جي زرخيزي جي ڪنٽرول لاء هڪ پرڪشش منشيات جو هڪ پرڪشش منشيات جو نشانو بڻايو ويو آهي مريضن ۾ بقا 12 يا ڪولورٽيڪل ڪينسر 13 سان گڏ آهي ۽ بي اي سي سيلتڪ دوائن کي هلايو ويو آهي کليل HV1 سبوڪائيٽ کوليو، وڌندڙ پابندين کي وڌائي رهيو آهي، شايد وڌيڪ طاقتور منشيات جي ترقي جي ترقي ڪري سگهي ٿو Hv1 چينلز کي نشانو بڻائين. انساني Hv1 جي سائيٽ جي هدايت ڪيل مائي 1 معياري پي سي آر ٽيڪنڪ کي استعمال ڪندي ڪيو ويو آهي. HV1ncivis Sv18 ۽ 228-573 جو 1-96-573. سي جي ايم ايس ايس ايس جي ايس ايس ايس ايس جي ايس ايس جي ذريعي ٻئي ضمنيز جي سي ٽرمينس جي اين-ٽرمينس کي ڳن is يل آهي T7 MMESSAGE MMACHINETINCENCENCENCENICENICICICICICICICION (AMENSES) .1-3 ڏينهن اڳ Xenopos / μgoloss (Xuopus quysves) Xenopos Vecys (ناسڪو) ايڪوسيٽ بايوس کان، آر اين اي انجڻ کان، سيل انجڻ، 1.8 ايم ايم اين ايم ايل، 1 ملي ايم ڪيو ايم ايل، 5 ايم ايم ڪيو ايم سي ايل. . 2-a گائيڊينينو-بينزائيدوزازول [1 گيندووڊينو) (4-ميٿون) 1،3- -تيازول-2-YL- گينڊائن) [6]، ايٿيل 2-گينائيڊينو- 1-ميٿيل -13-Thahylole-4-guanyl-4-gythyl-1- 5-ڪاربوٽيلٽ [9] ۽ (2-گينائيڊينو- 1-ميٿيل -1-Thahyl-5-YLDElate [SPLE ACTRACETENE) .1- [4] - (4-ڪلورافينل) -1،3-thanizol-2-Yl] گينڊائن [1-3- [3-dimetoxyponel] هو پيريز سائنسيپ مان تجارتي طور تي جعلي جراثيم موجود آهن. گهٽ ۾ گهٽ 99 سيڪڙو پاڪائي. 2-امينو -4- (trinuoromehy) بينزينيٿولول هائڊروولولرولڪ هائيڊروچورڪ ايسڊ (380 ايم ايم)، 4.5 ايم ايم، 4.5 ايم ايم ايل 4 ڪلاڪن تائين سخت زور سان ريفلڪس ڪيو ويو. رد عمل جو معاوضو ڪمري جي حرارت تي 10N پوٽاشيم هائيڊروڊائيڊ سان ڀريل آهي (3 × 50 ايم ايل) سان ڀريل 65 ° ج) ڪيترن ئي ڪلاڪن تائين، ۽ پوء ايٿيل ايٽيڪٽ / پيٽروليما / پيٽروليم کي هڪ اڇي سازي (500 مگ) کي ڏيڻ لاء (500 م)؛ 48٪ MP 221-222 ° C (روشني 225-226 ° C) 45؛ 1H NMR (500 MHZ، DMSSO-D6): Δ [پي پي ايم]: 7.40 (ڊي، J، 1 ايڇ)، 7.92 (ڊي)، 7.92 (ڊي) ، 1 ايڇ، j = 8.1 hz) .13c NMR (200 MHZS-D6): Δ = YO، J، J، J، J = 3.5.7، j، j، j، j، j = 272 هز)، 126.1 (q، q = q = que) = 13.6 hz)، 151.1.16.4s (Esi) +: 261.0416،. 261.0416 : 261.0419. نعاحه [1،2-ڊيوول-2 وينچ-2 وينچ "1.00 مMول): سنجي 1.3moceriaderiadiided يا گرم مرڪزي مرڪب ۾ 1.0 ايم ايل ڪنڪريٽ ۾ شامل ڪيو ويو هائيڊروچ جي حمل ۾ 2 منٽن تائين ۽ ان جي اڪثر پاڻي جي حرارت تي جيڪو پاڻي جي حرارت تي ٿڌو ڪيو ويو نن pieces ن ٽڪرن سان ٽڪرايو ۽ پاڻي سان گڏ هڪ پيلو پيلو امورفس مضبوط مهيا ڪرڻ لاء. (38 مگ، 10٪) ايم پي 24-250 ° C؛ 1H NMR (500 MHSSS-D6، D2O): Δ [PPM]: 7.5 H، J، J، 1 HZ (D، 1 ايڇ) ، J = 8.6 HZ)، 7.89 (ڊي، J، J، 1 H، 1 H، J، J، 1.3 HZ) .13 hor (150 ايڇ) ايم ايز، ڊي ايم ايس ايس-ڊي 6): Δ = 11.7، 123.3، 123.16.71، 14.16.06.06.06.06.06.06.06.06.06.06.06.06.06.069 ، مليو: 243.0704. Pronchainst يا ٻاهرين 200b axpolifta کي استعمال ڪندي هڪ ايڪسپوٽوٽ 200bmolifta کي استعمال ڪيو ويو آهي هڪ ايڪسپيٽ 200bmolifta کي استعمال ڪيو ويو آهي ) ايٿينلفونڪ ايسڊ (MES)، 30 ايم ايم ٽيٽلٿلٿلينيم (چانهه) ميسيٽيلٽ، 5 ايم ايم اي اي ايم ڪيوليٽيل ايسڊس پي ايڇ 6.0 چانڊروڪسائيڊڊ سان گڏ 15 ± 2 ° C..5 ° C.5 ° CRE.CERS.CAS.CASTITENTENED 10 KUZ.CASTITENTER 10.2 تي سڪون ۽ تجزيو ڪيو ويو آهي ) ۽ اصل 8.1 (اصل). HV1 انشائريز جي مختلف مرڪزن تي مشتمل حل ۽ ڪجهه ڪيسن ۾ 10 ايم ايم بي ايم ايم اي جي وچ ۾ ا β سي -6 پررمپڊ وائيٽ والو جي ذريعي ڪشش ثقل جي ذريعي ڪشش ثقل ذريعي متعارف ڪرايا ويا هئا ٽرانسسٽر منطق) نشانيون +120 ايم وي ڊولپريزنگ پلس.20 ايم وي جي ماپ ڪئي وئي آهي جيئن اڳ ۾ بيان ڪيو ويو آهي -20 MV کان +2020 ايم وي کان +120 MV تائين هاڻوڪي رد 18 لاء صحيح استعمال ڪيو ويو GV گراف بولٽزمانس جي مساوات (ڪي ڊي) چينل ۽ انبريٽيڊ انحصار جي لحاظ کان طئي ٿيل (ڪي ڊي) ٽڪري مساوات سان: جتي [آئون] انوبيوٽر جو تسلسل آهي ۽ ايڇ ٽڪري جو مجموعو آهي.