විවෘත Hv1 ප්‍රෝටෝන නාලිකාවේ අන්තර් සබ්යුනිට් අතුරුමුහුණත ප්‍රශ්න කිරීම සහ විවර්ණ ලෙස සම්බන්ධිත පරීක්ෂණයක්

Nature.com වෙත පිවිසීම ගැන ඔබට ස්තුතියි.ඔබ භාවිතා කරන බ්‍රවුසර අනුවාදය CSS සඳහා සීමිත සහයක් ඇත.හොඳම අත්දැකීම සඳහා, අපි ඔබට යාවත්කාලීන බ්‍රවුසරයක් (හෝ Internet Explorer හි ගැළපුම් ප්‍රකාරය අක්‍රිය කරන්න) භාවිතා කරන ලෙස නිර්දේශ කරමු. ඒ අතරතුර, සහතික කිරීමට අඛණ්ඩ සහාය, අපි මෝස්තර සහ JavaScript නොමැතිව වෙබ් අඩවිය පෙන්වමු. Hv1 වෝල්ටීයතාව සහිත ප්‍රෝටෝන නාලිකාව යනු වෝල්ටීයතා සංවේදන වසම් දෙකකින් (VSDs) සමන්විත වන ඩිමරික් සංකීර්ණයකි, ඒ සෑම එකක්ම ද්වාරගත ප්‍රෝටෝන පාරගම්ය මාර්ගයක් අඩංගු වේ. ඩයිමරීකරණය සයිටොප්ලාස්මික් දඟර-දඟර වසම මගින් පාලනය වේ. සංවෘත තත්වයේ සිට සංක්‍රමණය වේ. VSD දෙකෙහිම විවෘත තත්ත්වය සහයෝගීව සිදු වන බව දන්නා කරුණකි; කෙසේ වෙතත්, යටින් පවතින යාන්ත්‍රණ ගැන දන්නේ අල්ප වශයෙනි. අන්තර් සබුනිට් අතුරුමුහුණත් ඇලෝස්ටෙරික් ක්‍රියාවලීන්හි ප්‍රධාන භූමිකාවක් ඉටු කරයි; කෙසේ වෙතත්, විවෘත Hv1 නාලිකා තුළ එවැනි අතුරුමුහුණත් හඳුනාගෙන නොමැත. මෙහිදී අපි 2-guanidinothiazole ව්‍යුත්පන්නයන් Hv1 VSD දෙකක් සමුපකාර ආකාරයෙන් අවහිර කරන බව පෙන්නුම් කරන අතර විවෘත උප ඒකක අතර ඇලෝස්ටෙරික් සම්බන්ධ කිරීම සඳහා මෙම සංයෝගවලින් එකක් පරීක්ෂණයක් ලෙස භාවිතා කරමු. VSD හි පළමු ට්‍රාන්ස්මෙම්බ්‍රේන් ඛණ්ඩයේ අවසානය බන්ධන අඩවි අතර සම්බන්ධ කිරීම සඳහා මැදිහත් වන අන්තර් අනුබද්ධ අතුරු මුහුණතක් සාදයි, නමුත් දඟර-දඟර වසම මෙම ක්‍රියාවලියට සෘජුවම සම්බන්ධ නොවේ. නාලිකාවේ ප්‍රෝටෝන-තෝරාගත් පෙරහන අවහිර කරන්නන්-බන්ධන සහයෝගීතාව පාලනය කරන බවට ප්‍රබල සාක්ෂි ද අපට හමු විය. . Voltage-gated proton channels phytoplankton සිට humans දක්වා විවිධ ජීවීන් තුළ වැදගත් භූමිකාවන් ඉටු කරයි යනු Hv1 වන අතර එය HVCN1 ජානයේ නිෂ්පාදනයක් වන 2,3.Hv1 (එනම් VSOP) B සෛල ප්‍රගුණනය සඳහා කාර්යභාරයක් ඉටු කරන බව පෙන්වා දී ඇත චලනය 9 සහ වාතයේ මතුපිට තරලයේ pH නියාමනය 10. මෙම නාලිකාව B-සෛල පිළිකා 4,11 සහ පියයුරු සහ මහා බඩවැලේ පිළිකා12,13 වැනි අධික ලෙස පීඩනයට ලක් වූ පිළිකා වර්ග කිහිපයකට සම්බන්ධ වේ. අධික Hv1 ක්‍රියාකාරකම් පිළිකා සෛල 11, 12 හි පාරස්ථිතික විභවය වැඩි කරන බව සොයා ගන්නා ලදී .මොළයේ Hv1 ප්‍රකාශ වේ. මයික්රොග්ලියා විසින්, සහ එහි ක්රියාකාරිත්වය ඉස්කිමික් ආඝාතයේ ආකෘතීන් තුළ මොළයේ හානි උග්ර කිරීමට පෙන්නුම් කර ඇත. Hv1 ප්‍රෝටීනයේ වෝල්ටීයතා සංවේදී වසමක් (VSD) අඩංගු වන අතර එය S1 සිට S414 ලෙස හැඳින්වෙන ට්‍රාන්ස්මෙම්බ්‍රේන් කොටස් හතරකින් සමන්විත වේ. VSD වෝල්ටීයතාව සහිත Na+, K+ සහ Ca2+ නාලිකාවල අනුරූප වසම්වලට සහ CiVSP වැනි වෝල්ටීයතා සංවේදී පොස්පේටස්වලට සමාන වේ. Ciona gutis15.මෙම අනෙකුත් ප්‍රෝටීන වල, S4 හි C-පර්යන්තය ප්‍රයෝගික මොඩියුලයකට, සිදුරු වසම හෝ එන්සයිමයට අනුයුක්ත කර ඇත. Hv1 හි, S4 පටලයේ සයිටොප්ලාස්මික් පැත්තේ පිහිටා ඇති දඟර-දඟර වසම (CCD) සමඟ සම්බන්ධ වේ. .නාලිකාව VSD දෙකකින් සමන්විත ඩිමරික් සංකීර්ණයක් වන අතර, ඒ සෑම එකක්ම ද්වාරගත ප්‍රෝටෝන පාරගම්ය මාර්ගයක් 16,17,18 අඩංගු වේ. මෙම Hv1 උප ඒකක දෙක සහයෝගීව 19,20,21,22 විවෘත වන බව සොයා ගන්නා ලද අතර, එමඟින් ඇලෝස්ටෙරික් කප්ලිං සහ අන්තර්-උප ඒකක අන්තර්ක්‍රියා වාදනය වන බව යෝජනා කරයි. ගේටින් ක්‍රියාවලියේ වැදගත් භූමිකාවකි. දඟර සහිත දඟර වසම තුළ ඇති උප ඒකක අතර අතුරු මුහුණත මනාව අර්ථ දක්වා ඇත්තේ හුදකලා වසම් දෙකේ ස්ඵටික ව්‍යුහයන් 22,23 ලබා ගත හැකි බැවිනි. අනෙක් අතට, පටලය තුළ VSD අතර අතුරු මුහුණත නොවේ. හොඳින් වටහාගෙන ඇත. Hv1-CiVSP චිමරික් ප්‍රෝටීනයේ ස්ඵටික ව්‍යුහය මෙම අතුරුමුහුණත පිළිබඳ තොරතුරු සපයන්නේ නැත, මන්ද ස්ඵටිකීකරණය කරන ලද නාලිකා සංකීර්ණයේ ත්‍රෛමතික සංවිධානය දේශීය Hv1 CCD යීස්ට් ලියුසීන් සිපර් GCN424 මගින් ප්‍රතිස්ථාපනය කිරීමේ ප්‍රතිඵලයක් විය හැක. Hv1 නාලිකාවේ උප ඒකක සංවිධානය පිළිබඳ මෑත අධ්‍යයනයකින් නිගමනය වූයේ S4 හෙලිස් දෙකක් ද්විතියික ව්‍යුහයේ දැඩි බාධාවකින් තොරව CCD වෙත සංක්‍රමණය වන බවත්, එහි ප්‍රතිඵලයක් ලෙස පටලයෙන් ආරම්භ වී සයිටොප්ලාස්මයට ප්‍රක්ෂේපණය වන දිගු හෙලිස් ඇති වන බවත්ය. මෙම අධ්‍යයනය යෝජනා කරන්නේ Hv1 VSDs S4 කොටස ඔස්සේ එකිනෙක සම්බන්ධ විය යුතු බවයි.කෙසේ වෙතත්, අනෙකුත් අධ්‍යයනයන් VSDs අතර විකල්ප අතුරුමුහුණත් යෝජනා කර ඇත.මෙම අතුරුමුහුණත් වලට S1 කොටස් 17, 21, 26 සහ S2 කොටසේ පිටත අන්තයන් 21 ඇතුළත් වේ. මෙම අධ්‍යයනයන්හි ප්‍රතිඵල නම්, සංවෘත සහ විවෘත තත්ත්‍වයන් මත රඳා පවතින ගේටින් ක්‍රියාවලියට අදාළව VSD අතර ඇලෝස්ටෙරික් සම්බන්ධ කිරීම පරීක්‍ෂා කරන ලද අතර, VSD අතර අතුරු මුහුණත අනුකූලතාවයේ විවිධ ප්‍රාන්ත වෙනස්වීම් වලදී වෙනස් විය හැක. මෙහිදී, අපි 2-guanidinothiazole විවෘත VSD දෙකට සහජීවනයෙන් බන්ධනය කිරීමෙන් Hv1 නාලිකා වලක්වන බව සොයා ගත් අතර, විවෘත තත්වයේ ඇති උප ඒකක අතර අන්තර්ක්‍රියා විමර්ශනය කිරීමට 2-guanidinobenzothiazole (GBTA) සංයෝගවලින් එකක් භාවිතා කරන ලදී. අතුරුමුහුණත. GBTA බන්ධන වක්‍රය ප්‍රමාණාත්මක ආකෘතියක් මඟින් හොඳින් විස්තර කළ හැකි බව අපට පෙනී ගියේය. එහි ප්‍රතිඵලයක් ලෙස එක් අනු ඒකකයකට inhibitor බන්ධනය කිරීමෙන් යාබද අනු ඒකකයේ බන්ධන සම්බන්ධතාව වැඩි වේ. අපද්‍රව්‍ය D112, තේරීම් පෙරහන් නාලිකාව 27, 28 සහ ග්වානයිඩින් ව්‍යුත්පන්න බන්ධන අඩවියේ 29 කොටස GBTA බන්ධන සහයෝගීතාව පාලනය කරයි. CCD S4 කොටසෙන් CCD වෙන් වන Hv1 dimer තුළ සමුපකාර බන්ධන පවත්වා ගෙන යන බව අපි පෙන්වා දෙමු, CCD හි intersubunit අතුරුමුහුණත කෙලින්ම නොපවතින බව යෝජනා කරයි. GBTA-බන්ධන අඩවි අතර ඇලෝස්ටෙරික් සම්බන්ධ කිරීම මධ්‍යස්ථ කරන්න. ඊට ප්‍රතිවිරුද්ධව, S1 ඛණ්ඩය උප ඒකක අතර අතුරු මුහුණතේ කොටසක් බව අපට පෙනී යන අතර ඉඩ ලබා දීම සඳහා S4 හෙලික්ස් හි බාහිර සෛලීය අන්තය සහිත යාබද VSD වල සැකැස්මක් යෝජනා කරයි. S1 කොටස විවෘත තත්වයේ තිබිය යුතුය. Hv1 හි කුඩා අණු නිෂේධක පිළිකා නාශක ඖෂධ සහ ස්නායු ආරක්‍ෂක කාරක ලෙස ප්‍රයෝජනවත් වේ.කෙසේ වෙතත්, අද වන විට, නාලිකාව 30,31,32,33 නිෂේධනය කිරීමට සංයෝග කිහිපයක් සමත් වී ඇත. 1a) සහ එහි ව්‍යුත්පන්නයන් නාලිකාව හරහා ප්‍රෝටෝන වල VSD29,32 විනිවිද යාම අවහිර කරන බව සොයා ගන්නා ලදී.එවැනි සංයෝග විවෘත උප ඒකක දෙකෙහි ස්වාධීනව සිදුවේ යැයි සැලකේ.2-guanidinobenzothiazole (GBTA, සංයෝගය [2] Figure 1a) මීට පෙර 200 μM සාන්ද්‍රණයකදී පරීක්‍ෂා කළ විට Hv1 2GBI තරම්ම ඵලදායී ලෙස නිෂේධනය කරන බව පෙන්වා දී ඇත (රූපය 1b). අපි අනෙකුත් thiazole ව්‍යුත්පන්නයන් පරීක්‍ෂා කළ අතර ඒවායින් සමහරක් GBTA ට වඩා සමාන හෝ වැඩි ප්‍රබලතාවකින් නාලිකාව වළක්වන බව සොයා ගත්හ (රූපය 1 සහ අතිරේක text).අපි thiazole ව්‍යුත්පන්න හතරක (GBTA සහ සංයෝග [3], [6] සහ [11], Fig. 1c) සාන්ද්‍රණ ප්‍රතිචාර වක්‍ර නිර්ණය කළ අතර ඒවා 2GBI වලට වඩා ප්‍රපාතයෙන් වැඩි බව සොයා ගත්තෙමු.ද හිල් සංගුණක (h) තියාසෝල් ව්‍යුත්පන්නයන් 1.109 ± 0.040 සිට 1.306 ± 0.033 දක්වා පරාසයක පවතී (රූපය 1c සහ පරිපූරක Fig. 1).ඊට ප්‍රතිවිරුද්ධව, 2GBI සඳහා හිල් සංගුණකය 0.975 ± 0.024 29, රූපය 2a සහ පරිපූරක Fig. 1).ඉහත කඳුකර සංගුණකය 1 ට ඉහලින් බන්ධන සහයෝගීතාවය පෙන්නුම් කරයි.එක් එක් Hv1 subhibitor හි බන්ධන සහයෝගිතාව ඇති නිසා බන්ධන අඩවිය, 29,32 අපි තර්ක කළේ තියාසෝල් ව්‍යුත්පන්නයක් එක් උප ඒකකයකට බන්ධනය කිරීමෙන් දෙවන නිෂේධක අණුවක් යාබද අනු ඒකකයට බන්ධනය කිරීම වැඩි දියුණු කළ හැකි බවයි. GBTA යනු ඉහළම හිල් සංගුණකය සහිත පරීක්ෂණ සංයෝගයයි. එබැවින් අපි මෙම සංයෝගය තෝරා ගත්තේ බන්ධන සහයෝගීතාවයේ යාන්ත්‍රණය තවදුරටත් අධ්‍යයනය කරන අතර සෘණ පාලනයක් ලෙස 2GBI භාවිතා කළේය. (a) පරීක්ෂණ සංයෝග: [1] යොමු Hv1 inhibitor 2-guanidino-benzimidazole (2GBI).[2] 2-guanidino-benzothiazole (GBTA), [3] (5-trifluoromethyl-1,3-benzothiazol-2-yl)guanidine, [4] naphtho[1,2-d][1, 3] Thiazol-2-yl -guanidine, [5](4-methyl-1,3-thiazol-2-yl)guanidine, [6](5-bromo-4-methyl-1,3-thiazol- 2-yl)guanidine, [7] famotidine, [8] 2-guanidino-5-methyl-1,3-thiazole-4-carboxylic acid ethyl ester, [9] 2-guanidino-4-methyl Ethyl-1,3-thiazole-5-carboxylate, [10 ](2-guanidino-4-methyl-1,3-thiazol-5-yl)එතිල් ඇසිටේට්, [11]1-[4-(4 -Chlorophenyl)-1,3-thiazol-2-yl]guanidine, [ 12]1-[4-(3,4-dimethoxyphenyl)-1,3-thiazol-2-yl]guanidine .(b) පෙන්වා දී ඇති guanidinothiazoles සහ සමුද්දේශ සංයෝගය 2GBI (නිල්-කොළ තීරු) මගින් මානව Hv1 ක්‍රියාකාරකම් නිෂේධනය කිරීම .Hv1 ප්‍රෝටෝන ධාරාවන් -80 mV සිට +120 mV දක්වා රැඳවුම් විභවයකින් විධ්‍රැවීකරණයට ප්‍රතිචාර වශයෙන් Xenopus oocytes හි ඇතුළත-පිටත ඵලකවල මනිනු ලැබේ.එක් එක් නිෂේධකය 200 μM සාන්ද්‍රණයකින් ස්නානයට එකතු කරන ලදී.pHi = pHo = 6.0. .දත්ත යනු මධ්‍යන්‍ය ±SEM (n≥4).(c) [2], [3], [6] සහ [11] සංයෝග මගින් මානව Hv1 හි සාන්ද්‍රණය මත යැපෙන නිෂේධනය. සෑම ලක්ෂ්‍යයක්ම 3 හි මධ්‍යන්‍ය නිෂේධනය ± SD නියෝජනය කරයි. මිනුම් 15 දක්වා. රේඛාව යනු පරිපූරක වගුව 1 හි වාර්තා කර ඇති දෘශ්‍ය Kd අගයන් ලබා ගැනීම සඳහා භාවිතා කරන හිල් ෆිට් එකකි. හිල් සංගුණක නිර්ණය කර ඇත්තේ පරිපූරක රූපය 1 හි වාර්තා කර ඇති ගැළපීම් වලින්: h(1) = 0.975 ± 0.024 h(2) = 1.306 ± 0.033, h (3) = 1.25 ± 0.07, h (6) = 1.109 ± 0.040, h (11) = 1.179 ± 0.036 (ක්‍රම බලන්න). (a,b) 2GBI සහ GBTA සංයෝග සාන්ද්‍රණය මත යැපෙන ආකාරයෙන් dimeric සහ monomeric Hv1 නිෂේධනය කරයි. සෑම ලක්ෂ්‍යයක්ම මිනුම් 3 සිට 8 දක්වා වූ මධ්‍යන්‍ය නිෂේධනය ± SD නියෝජනය කරන අතර වක්‍රය හිල් ෆිට් එකක් වේ. හිල් සංගුණක (h) පෙන්වා ඇත. පරිපූරක Figs 3 සහ 4 හි වාර්තා කර ඇති ගැලපීම් වලින් inset histograms තීරණය කරන ලදී. (a) හි පෙන්වා ඇති GBTA හි සාන්ද්‍රණ ප්‍රතිචාරය Fig. 1c හි ප්‍රතිචාරයට සමාන වේ. පෙනෙන Kd අගයන් සඳහා පරිපූරක වගුව 1 බලන්න.(c) ආකෘතිකරණය GBTA හි සමුපකාර බන්ධනය dimeric Hv1. ඝන කළු රේඛාව සමීකරණය (6) මගින් පර්යේෂණාත්මක දත්ත වලට ගැළපීම නියෝජනය කරයි, එය (d) හි පෙන්වා ඇති බන්ධන ආකෘතිය විස්තර කරයි. උප 1 සහ උප 2 ලෙස ලේබල් කර ඇති ඉරි සහිත රේඛා ද්වි අණුක සම්බන්ධය නියෝජනය කරයි. -පළමු හා දෙවන බන්ධන සිදුවීම්වල විඝටන සමතුලිතතා වක්‍ර, පිළිවෙලින් (උප 1: OO + B ⇄ BO*, Kd1 = 290 ± 70 μM; උප 2: BO* + B ⇄ B*O*, Kd2 = 29.3 ± 2.5 ).(d) Hv1 බ්ලොක්හි යෝජිත යාන්ත්‍රණයේ ක්‍රමානුරූප රූප සටහන. GBTA සම්බන්ධයෙන්, එක් විවෘත අනු ඒකකයකට බැඳීම යාබද විවෘත අනු ඒකකයේ (Kd2 0.05) අඩුවීමක් අපි සොයා ගත්තෙමු, වල් වර්ගය (පය. 5c) සමඟ සසඳන විට, එහි කාර්යභාරය නොතකා උප ඒකක දෙකක් එකට වැදගත් වේ, නමුත් CCD GBTA බන්ධන අඩවි අතර අන්තර් සබ්යුනිට් ඇලෝස්ටෙරික් සම්බන්ධ කිරීම සෘජුවම මැදිහත් නොවේ. (a) සයිටොප්ලාස්මික් දඟර-දඟර වසම (නිල් ඊතල) මගින් මැදිහත් වන අන්තර් අනුබද්ධ සම්බන්ධ කිරීම කඩාකප්පල් කිරීම සඳහා නිර්මාණය කර ඇති S4 හි අභ්‍යන්තර කෙළවරේ ට්‍රයිග්ලිසීන් විකෘතියක් සහිත Hv1 ඩයිමරයේ ක්‍රමානුකූල රූප සටහන. උප ඒකක (නිල් ඊතල) අතර සම්බන්ධ කිරීමට සම්බන්ධ S1 කොටස් පරීක්ෂා කිරීමට සැලසුම් කරන ලද විකෘති කිරීම්, (c-h) 2GBI (සයන්) සහ GBTA (තද රතු) සාන්ද්‍රණය මත යැපෙන ආකාරයෙන් ඇඟවුම් කරන ලද ඉදිකිරීම් වලක්වයි. සෑම ලක්ෂ්‍යයක්ම මධ්‍ය නිෂේධනය නියෝජනය කරයි මිනුම් 3 සිට 10 දක්වා ± SD. වක්‍රය පැහැදිලිව පෙනෙන Kd අගයන් ලබා ගැනීම සඳහා භාවිතා කරන කඳු ගැළපුමකි (පරිපූරක වගුව 1 බලන්න). ක්‍රම කොටසේ විස්තර කර ඇති පරිදි අන්තර් විස්ථාපන හිස්ටෝග්‍රෑම් වල කඳු සංගුණක තීරණය කරන ලදී (පරිපූරක රූප 3 සහ 4 බලන්න) සඳහා යොමු h අගයන් Hv1 WT ඉරි සහිත රේඛා ලෙස පෙන්වයි. තරු ලකුණු මගින් විකෘති සහ WT ඡේද අතර සංඛ්‍යානමය වශයෙන් සැලකිය යුතු වෙනස්කම් දක්වයි (p 0.05, Fig. 5d,i) ) අනෙක් අතට, විකෘති D123A GBTA හි හිල් සංගුණකය සැලකිය යුතු ලෙස අඩු කළේය (p 0.05/14). උප ඒකක දෙකෙහිම 123 ස්ථානයේ ආරෝපණ උදාසීන කිරීම GBTA බන්ධන සහයෝගීතාවයේ ප්‍රබල වෙනසක් ඇති කළ නිසා, උප ඒකක දෙකෙහිම ආරෝපණය සුළු බලපෑමක් පමණක් ඇති වූ අතර, අපි ආරෝපණ ප්‍රතිලෝම නාලිකාව සමඟ එක් උප ඒකකයක් පමණක් ඇතුළත් කිරීමට විශ්ලේෂණය දීර්ඝ කළෙමු. C-පර්යන්ත අනු ඒකකයේ D123R ආදේශනය සහිත Hv1-සම්බන්ධිත ඩයිමර් ජනනය කරන ලදී (රූපය 5b) සහ GBTA සහ 2GBI මගින් සාන්ද්‍රණ-ප්‍රතිචාර නිෂේධනය මැනිය. WT-D123R නාලිකාවලට GBTA බන්ධනයේ හිල් සංගුණකය ඊට වඩා සැලකිය යුතු ලෙස ඉහළ බව අපට පෙනී ගියේය. Wild-type Hv1 හි (p 0.05). βME නොමැති තතු තුල, D112E I127C Hv1 dimer වෙත බන්ධනය වන GBTA හි හිල් සංගුණකය අඩු කිරීමේ නියෝජිතයන් (පය. 6e සහ පරිපූරක Fig. 4) ඉදිරියේ මනිනු ලබන ප්‍රමාණයට වඩා සැලකිය යුතු ලෙස වැඩි බව අපට පෙනී ගියේය. cysteine ​​127 හි හරස් සම්බන්ධකයේ ප්‍රතිඵලයක් ලෙස GBTA බන්ධන සහයෝගීතාවයේ වැඩිවීම අහෝසි නොකළේය. D112E, I127C Hv1 dimers සමඟ බන්ධනය වන 2GBI හි හිල් සංගුණකය ද D112E විකෘතිය මගින් සැලකිය යුතු ලෙස බල නොපායි (රූපය 1).6d සහ අතිරේක රූපය 3). එකට ගත් විට, මෙම සොයාගැනීම්වලින් පෙනී යන්නේ, ආකර්ශනීය විද්‍යුත් ස්ථිතික අන්තර්ක්‍රියා හරහා යාබද Hv1 අනු ඒකකවල S1 කොටස්වල පිටත අන්ත අතර අන්තර්ක්‍රියා මගින් GBTA බන්ධනය වැඩි දියුණු වන බව හෝ ආදේශක cysteines අතර සහසංයුජ බන්ධන ගොඩනැගීම හරහා අඩවි අතර ඇලෝස්ටෙරික් සම්බන්ධ කිරීම වැඩි වන අතර සහයෝගීතාවයේ ප්‍රතිඵලය වැඩි වේ. සහයෝගිතාව මත ආකර්ශනීය විද්‍යුත් ස්ථිතික අන්තර්ක්‍රියා වල බලපෑම D112E විකෘතිය මගින් අහෝසි කළ හැකි අතර, සහසංයුජ බන්ධනවල බලපෑම කළ නොහැක. ගුවානයිඩින් ව්‍යුත්පන්නයන් Hv1 නාලිකාවලට බන්ධනය කිරීම සඳහා පවතින රසායනික අවකාශය පිළිබඳ අපගේ ගවේෂණයේ දී, GBTA වැනි 2-guanidinothiazoles 2-guanidinobenzimidazoles (රූපය 1c) ට වඩා දැඩි සාන්ද්‍රණයක් යැපීමක් ඇති බව අපට පෙනී ගියේය. සහ monomeric නාලිකා (Fig. 2a,b) සහ එක් උප ඒකකයක් නිෂේධකයට පූර්ව-බන්ධිත වූ dimeric නාලිකාවට (රූපය 4) GBTA මගින් Hv1 නිෂේධනය කිරීම ක්‍රියාව සහජීවන ක්‍රියාවලියක් බව නිගමනය කිරීමට අපට මඟ පෑදීය. උප ඒකක දෙකෙහි ඇති සංයෝගවල බන්ධන ස්ථාන විභේදනාත්මකව සම්බන්ධ වේ. GBTA විවෘත නාලිකාවට බන්ධනය වන බව සොයා ගැනීමෙන්, 2GBI32 ආශ්‍රිත සංයෝගය සඳහා කලින් පෙන්වා දී ඇති පරිදි, ඇලෝස්ටෙරික් සම්බන්ධ කිරීම විවෘත තත්වයේදී විශේෂයෙන් තක්සේරු කළ හැකි බව යෝජනා කරයි. අපගේ සමුපකාර බන්ධන ආකෘතිය එච්.වී.ඒ. ඇල්ලෝස්ටර් ප්රෝටීන දෙකක (HV1 වැනි) බන්ධන අඩවි දෙකකින් ලබා ගත හැකි උපරිම කඳුකර සංගුණකය 2.1 යනු GBTA මැන බැලූ අතර එය HV1 I127C හි 1.88 දක්වා ඉහළ ගොස් තිබේ සමමුහුර්ත නිදහස් ශක්තිය, අඩුම හා ඉහළම ආමාශක අඩවි වල බන්ධන රහිත ශක්තීන් (ක්රම බලන්න) අතර වෙනස, HV1 WILD-Typeed HV1 I127C. හීමුග්ලොබින්ට ඔක්සිජන් සහයෝගී ක්රියාවලිය පිළිබඳ වඩාත් ප්රසිද්ධ හා හොඳින් අධ්යයනය කරන ලද උදාහරණය 38. මානව හිමොග්ලොග්ලොබින් (ඇල්ලොගිස්සිස්ට්ව ඇල්ලෝස්ඩ් බැඳුම්කර අඩවි හතරක් සහිත, කඳුකර සංගුණකය 2.26 සිට 3.64 දක්වා සාරධර්ම සමඟ KCAL / MOL, පර්යේෂණාත්මක තත්වයන් අනුව 38.thus, එච්.වී. අපගේ සමමුංචි ආකෘතියෙන්, ජීබීටා අණු එක් අනු සුමුනිට් ප්රති results ලයකට බැඳීම යාබද සුනස්ට් අනුකම්පණයේ බන්ධන අනුකම්පණයේ වැඩි වේ. පළමු බන්ධන සිදුවීම (ප්රේරකමය) ඊට හේතු වේ. මෙම වෙනස්කම් අතර ඇති වූ අන්තර්ක්රියා වල වෙනස්කම්, යාබද සුනූනිට්ස් ඔවුන්ගේ බන්ධන අඩවි වලට වඩා දැඩි ලෙස වෙනස් කරයි. මෙම ක්රියාවලියට තදින් බැඳී ඇත මීට පෙර HV1 ප්රෝටෝන පාරගම්තාවයේ කොටසක් ලෙස පෙන්වන ලද අතර තෝරාගත් පෙරහන් 28,28 ලෙස ක්රියා කිරීමට පෙළඹුණි. අපගේ ප්රති results ල එච්වී 1 සඟර දෙකෙහි තෝරාගත්තා පෙරහන් ඇල්ලොස්ටික් යනුවෙන් ඇල්ලොස්ටික් ජාලයේ ඇති බව එච්.වී.ඒ. HV1-CEV1-CEPSIAL ව්යුහය මත S1 හි බාහිර සෛල කෙළවරේ S1 හි බාහිර සෛල කෙළවරේ කළු ඊතල සමඟ දැක්වේ. . GBTA හි පුරෝකථනය කරන ලද ස්ථාන ග්රේ ඩිම්බකෝෂ ලෙස පෙන්නුම් කෙරේ. බන්ධන එස් 1 අපද්රව්යවල බැඳුම්කර ක්ෂේත්රයන් අතර ඇති මාර්ගවල මාර්ගවල දැක්වේ. (ආ) හැන්දක් වම් පැනල් හි බාහිර පට්ටලයෙහි බාහිර පැත්තේ පැත්තකින් පෙනෙන පරිදි විවිධ ඩිමර් වින්යාසයන් දෙකකින්, ඩිමර් අතුරුමුහුණත එස් 4 හෙලික්ස් විසින් පිහිටුවනු ලැබේ. එදිරිව එදිව්ඩ්ස් දෙක එස් 4 හීලිස් දෙකෙහි පිටත කෙළවර වෙන් කිරීම (ඉරිතැලීම් ඊතල) විසින් පෙන්වනු ලැබේ. 4G80 ස් stal ටික ව්යුහය තුළ ඇති ඩිමර් වින්යාසය තුළ HV1 හි D12 හි D12 ස්ථානයට අනුරූප වේ. අපගේ ප්රති results ලවලින් පෙනී යන්නේ පදිංචිය 123 (123D / 123d හෝ 123r / 123r අතර පිළිකුල් සහගත විද්යුත් ස්ථිතික අන්තර්ක්රියා විවෘතව ඇති අතර එය විවෘත රාජ්යයේ GBTA බන්ධන සමුපකාරයක (123D / 123R) පිළිකුලෙන් මාරුවීම වෙනස් කරයි , සහයෝගීතාව වැඩි කිරීම (රූපය 5 ජී) .එය ඇලන්යින් ආදේශනය සමඟ පිළිකුල් සහගත අන්තර්ක්රියා ඉවත් කිරීම ද සමපාත වීමට හේතු වේ. පැහැදිලි කිරීම නම්, ජලභොෆිලික් පරිසරයක හයිඩ්රොෆොබික් අපද්රව්ය තැබීමේ අස්ථාවර බලපෑමේ බලපෑම නිසා, ඩී 123 DI123 අපද්රව්ය අතර බැඳුම්කරයේ සමස්ත අඩුවීම හේතුවයි. සීඑන්අනා ගුටිස් සීඅයි-එච්වී 1 හි D171 (මානව HV1 හි D123 ට අනුරූපව) සක්රිය කිරීමෙන් පසු, ඩී 123 ඩී 123 යනු විවෘත තත්වයේ හයිඩ්රොෆිලික් පරිසරයක පිහිටා ඇති බවට සක්රිය කිරීම මත වැඩි වේ. HV1 නාලිකා ගේෂණය බහු සංක්රාන්ති 1,26,44,40,44,40,49,40,440.qu26 මගින් සිදු වේ. , ප්රූනිට් මාර්ග දෙකෙහිම ප්රොටෝකෝණික මාවත දෙකෙහිම සංක්රමණය කිරීමට හේතු වන පැහැදිලි සංක්රාන්තියක් අනුගමනය කරන අතර, වෝල්ටීයතා සංවේදකය සංරක්ෂණය කිරීම වෝල්ටීයතා-කලම්ප ප්රතිදීප්ත, දෙවන සංක්රමණය විසින් D171 හි විකෘතියට තෝරා බේරා ඇති බව සොයා ගන්නා ලදී. ප්රතිසංස්කරණ වෙනසෙහි ප්රතික්රියා ඛණ්ඩාංකයන්ගේ ප්රතික්රියා ඛණ්ඩාංකයන්හි ප්රතික්රියා කිරීමේ ඛණ්ඩාංකයන්හි ක්රි.ව. GBTA බන්ධන අඩවි අතර ඇල්ලොගික් කප්ලිං මැදිහත් වේ. ෆුජිවරා සහ ඒඑල් 225 සයිටොප්ලාස්මික් හි ඩිමර් අතුරුමුහුණත S4 හෙලිසරියේ ඩිමර් අතුරුමුහුණත (රූපය 7 බී, වම් පැනලය) අඩංගු වේ. S4 හෙලික්ස් සහ සීසීඩී. එබැවින්, අනාවරණය වූ S4-S4 අතුරුමුහුණත. සංවෘත රාජ්යයන්, අවබෝධතා ගිවිසුම්වල සොයාගැනීම් වලට අනුකූල අදහසක්. ගේට්ටු අතරතුර S1 39 ක් ගමන් කරයි. මෙහිදී, විවෘත රාජ්යයේ, S1 H4-S4 අන්තර් ක්රියාකාරිත්වය සහිත ඩිමර් වින්යාසය වන S1 හෙලික්ස් හි අද්භූත අන්තර්ක්රියා වලට සහාය දැක්වීමට තරම් පොදු සෛලීය අන්තර්ක්රියා වලට සහාය වීමට තරම් පොදු ය එකිනෙකාට සෘජුවම මැදිහත් වීමට අමතරව, එනම් 20 °, එස් 4 හෙලිසීස් දෙකේ පිටත කෙළවරට සමානාත්මතාවයෙන් යුත් ඇක්සිස් අනුක්රමික භ්රමණය වන එදිරිව සුමූනිට් දෙකේ භ්රමණය වන අතර එය S1 HE HESTES හි පිටත කෙළවරට සමානය අපගේ සොයාගැනීම් සමඟ (රූපය 7 බී, දකුණු පැනලය) .අපි විවෘත රාජ්යයේ නාලිකාව සඳහා මෙම වින්යාසය නිර්දේශ කරමු. සන්ධි එන්සයිමය මොනෝමරයක් ලෙස ක්රියා කළත්, එහි හුදෙකලා වීඑස්ඩී හි ස් stal ටික ව්යුහය ඩිමර් රාජ්යයක අල්ලා ගනු ලැබේ. HV1 සඳහා (රූපය 7 සී) සහ සන්ධි ඩිමර්ස් යෝජනා කරන්නේ මෙම ප්රෝටීන වල VSDS S1 අන්තර්ක්රියාකාරී කෙළවරේ අන්තර් සෛලීය කෙළවරේ අතුරු මුහුණතක් ඇති කිරීමේ අතුරු මුහුණතක් ඇති කරන බවයි. ශුක්රාණු සෛල ක්රියාකාරිත්වයේ HV1 හි අත්යවශ්ය කාර්යභාරය මෙම නාලිකාව විසින් මෙම නාලිකාව පිරිමි සාරවත් බව පාලනය කිරීම සඳහා ආකර්ශනීය drug ෂධ ඉලක්කයක් බවට පත් කරයි. පියයුරු සහිත රෝගීන් 12 හෝ කොලරෙක්ටල් පිළිකා 13 වන අතර එය HV1 ඉලක්ක කර ගැනීම සඳහා හවුල් වූ drugs ෂධ සඳහා දායක වේ. බන්ධන බැඳීම වැඩි කිරීමට හේතු වන HV1 අනු-ඇන්ඩ් 1 සුනිට් විවෘත කිරීම, HV1 නාලිකා ඉලක්ක කර ගනිමින් වඩාත් ප්රබල drugs ෂධ සංවර්ධනය කිරීමට හේතු විය හැක. සම්මත PCR ශිල්පීන්ගේ වෙබ් අඩවියේ වෙබ් අඩවියට යොමු කරන ලද මුත්රාශමාව සිදු කරන ලදී. HV1NCAIVSENT HV1 හි 1-96 සහ 4-113 සහ 240-576 සිවිල් 411 සහ 240-576 septed dimer, the C-terminus of one subunit is linked to the N-terminus of the second subunit through the GGSGGSGGSGSGGSGG linker.The pGEMHE plasmids containing the various constructs were linearized with Nhe1 or Sph1 restriction enzymes (New England Biolabs) and RNA synthesis was performed with the ටී 7 එම්එම්සීගේ එම්එම්චයින් පිටපත් කිරීම. RNACTETE BUS . 2-ගුනිදෝ-බෙන්සිම්ඩිඩස්සෝල් [1], 2-ගුනිදෝ-බෙන්සොතියාසෝල් [2], (4-මෙතිල්-13-YIAZOL-2-YL) ගුනිකිඩින් [5], (5-බ්රෝමෝ -4 -100 -එචොසෝල් -2-වයි.එල්) [6], එතිනි 2-ගුනිදෝ -1-ත්රී සුදු -4-ටාසෝල් -4-ටියසෝල් -4-eriazole-4-thiazole-4-metzole-4-metzole-4- මෙතිල් -1- මෙතිල-1- මෙතිල-1- තියාසෝල්- 5-කාබොක්ලට් [9] සහ (2-ගුනිදෝ -4-මෙතිටිනල් -5-53-YIEET-53-YIAZOL - එතෙල් ඇසිටේට් [10] සිග්මා-ඇල්ඩ්රිච්.ෆමොටින්. [7] පාර්ලිමේන්තු මන්ත්රී ජෛව වෛද්යවරු - (4-ක්ලෝෆෝල්නි) -1,3-තියාසෝල් -2-Yl] ගුනිදින් [11] සහ 1- [3,4-dimetthoxhyyll) -1,3- thiazol-2-Yl] ගුනිකිනිය [12] මැට්රික්ස් විද්යාත්මකව. මීටර් සංයෝග වාණිජමය වශයෙන් ලබා ගත හැකි ඉහළම පාරිශුද්ධභාවය ඇත. අවම වශයෙන් 99% සංශුද්ධතාවය. ජලීය හයිඩ්රොක්ලෝරික් අම්ලයේ මිලි ලීටර් 2-4- (ට්රයිෆ්ලෝරෝමීටෙල් (ට්රයිෆ්ලෝරෝමීටෙල්) (2.5 n, mmol 4.5 mmol 4.5 mmol) (2.5 n) පැය 4 ක් තිස්සේ දැඩි කලවම්බදව සිටීම. 65 ° C) පැය කිහිපයක් සඳහා, පසුව එතිල් ඇසිටේට් / ඛනිජ තෙල් / ඛනිජ තෙල් සහිත ඛනිජ තෙල් සහිත ඊතර් සිට සුදු පැහැයක් ගනී (500 මිලිග්රෑම් 48%); MP 221-222 ° C (ආලෝකය 225-226 ° C) 45; 1H nmr (500 mhz, dmmso-d6): Δ [PPM] = 7.25 (ඉතා පුළුල් එස්, ජේ, ජේ, ජේ, ජේ, ජේ, ජේ, ජේ), 7.73 (ඩී , J = 8.1 hz) .13 සී එන්එම්ආර් (200 mhz, dmso-d6 (d, j = 3.5 hz), 121.7, 124.6 (Q, j = 272 hz), 126.1 (Q, j = 272 hz) = 31.6 hz), 134.6 hz), 134.8 HZ) : 261.0419. නැප්තෝ [1,2-ඩී] තියාසෝල් -2-අ, කේන්ද්රය (300 මිලිග්රෑම් 300, මිලිග්රෑම් 300, එම්.එම්.අයි. 1.0 ml rone.to වේගයෙන් හයිඩ්රොක්ලෝරික් අම්ලය එකතු කරන ලද අතර මිශ්රණය විනාඩි 2 ක් පමණ තෙල් ස්නානයෙහි තබා ඇත, පසුව බොහෝ ජල වාෂ්පීකරණය. කුඩා කැබලිවලට කැඩී සුදුමැලි කහ අශ්වාරෝහක solid න ද්රව්යයක් සැපයීම සඳහා ජලයෙන් සෝදා හරින්න. (38 mg, 10%) මන්ත්රී 246-250 ° C; 1H nmr (500 mhz, dmmso-d6, d2o): Δ [PPM] = 8.2 HZ), 7.66 (ටී, 1 එච් = 8.3 එච්එස්, 7.77 (ඩී, 1 එච් , ජේ = 8.6 එච්එස්), 7.89 (ඩී, 1 එච්, ජේ, ජේ, ජේ, ජේ, ජේ, ජේ, ජේ, ජේ, ජේ = 8.3 hz) .13 සී එන්එම්ආර් (150 MHz, dmmso-d6, 123.9, 123.5, 123.5, 123.5, 126.5, 126.5, 126.7, 146.7, 169.1, 149.1, 149.1, 169.1, 169.1, 169.1, 149.1, 169.1, 169.1, 169.1, 169.1, 169.1, 169.1, 169.1, 169.1, 169.1, 169.1, 169.1, 169.1, 169.1, 169.1, 169.1, 169.1, 169.1, 169.1, 149.1, 169.1, 149.1, 169.1, 169.1, 169.1, 169.1, 169.1, 149.1, 169.1, 149.1, 169.1, 169.1, 169.1, 169.1, esi) +: m + h1n4s (m + h) +: 243.0699 , හමු විය: 243.0704. PCLAPT 10 මෘදුකාංගයක් වන ඇක්සොප් 10 මෘදුකාංගය (අශෝභන උපාංග) මගින් විවිධ ඉදිකිරීම්වල අභ්යන්තර හා බාහිර පැල්ලම් වල ප්රෝටෝන ධාරා මනිනු ලැබුවේ, අක්ෂි ඩිෆිඩටා 14440A (100 මි.මී. 2- (N- මෝර්ෆොලිනෝ ) එතන්සල්ෆොනික් අම්ලය (MES), 30 මි.මී. PH 6.0 තේ හයිඩ්රොක්සයිඩ් සමඟ. ) සහ ආරම්භය 8.1 (ආරම්භක). HV1 නිෂේධනයේ විවිධ සාන්ද්රණයන් සහ සමහර අවස්ථාවල විවිධ සාන්ද්රණයන් සහ සමහර අවස්ථාවලදී 10 mm vme βe vmovity β. ට්රාන්සිස්ටර තර්කනය) සං als ා) සං als ා.rpid සුවඳ විලවුන්ඩ් පැච් පයිපෙට් පයිපෙටට් අම්පූර්වඩියක් ඉදිරිපිට 360 μm විචල්ය) +120 MV PALSE.GV විරකාන්තය විස්තාරණය කරන ලදී. වත්මන් පරිහානිය සඳහා නිවැරදි කිරීමට භාවිතා කරයි. GV ප්ර! කඳුකරයේ සමීකරණය සමඟ: [i] නිෂේධනය වන තැන සහ එච් හි හිල් සංගුණකය ගණනය කිරීමකි. කඳුකරයේ සංගුණකය ගණනය කිරීම, සමීකරණය (2) නැවත සකස් කිරීම: