Аллостерик кушылган зонд белән ачык Hv1 протон каналының интерсубунит интерфейсын сорау.

Nature.com сайтына кергәнегез өчен рәхмәт. Сез кулланган браузер версиясе CSS өчен чикләнгән ярдәмгә ия. Иң яхшы тәҗрибә өчен без яңартылган браузерны кулланырга киңәш итәбез (яки Internet Explorer'та яраклашу режимын сүндерегез). Шул арада тәэмин итү өчен дәвамлы ярдәм, без сайтны стильләр һәм JavaScriptсыз күрсәтәчәкбез. Hv1 көчәнеш белән капланган протон каналы - ике көчәнеш сизүче доменнан торган димерик комплекс, аларның һәрберсендә капкалы протон үткәрү юлы бар. Димеризация цитоплазмик күләгәле домен белән идарә ителә. Ябык дәүләттән күчү. ике ВСДда да ачык хәл кооператив рәвештә барлыкка килә; ләкин, төп механизмнар турында аз билгеле. Интерсубунит интерфейслары аллостерик процессларда төп роль уйныйлар; шулай да, мондый интерфейслар ачык Hv1 каналларында ачыкланмаган. Монда без 2-гуанидинотиазол туемнары кооператив рәвештә ике Hv1 VSD-ны блоклыйбыз һәм бу кушылмаларның берсен ачык субунитлар арасында аллостерик кушылу өчен кулланабыз. Без тыштан тыш күзәнәк таптык. VSD-ның беренче трансмембрана фрагменты ахыры интерсубунит интерфейсын формалаштыра, бу бәйләнешле сайтлар арасындагы бәйләнешне арадаш итә, шул ук вакытта күмелгән кәтүк домены бу процесста турыдан-туры катнашмый. Без шулай ук ​​каналның протон-сайлап фильтры блокер-бәйләүче кооперативны контрольдә тотуына көчле дәлилләр таптык. . Фитопланктоннан алып кешеләргә кадәр көчәнешле протон каналлары төрле организмнарда мөһим роль уйныйлар. Күпчелек күзәнәкләрдә бу каналлар протон мембранасыннан протон эффектын арадаш итәләр һәм NADPH оксидасы эшчәнлеген көйлиләр. Hv1, HVCN1 ген продукты2,3.Hv1 (VSOP ака) B күзәнәкләренең таралуында, тумыштан килгән иммун системасы реактив кислород төрләрен җитештерүдә 5,6,7,8, сперма күзәнәгендә роль уйнаганы күрсәтелде. хәрәкәтчәнлек9 һәм һава юлының сыеклыгын pH көйләү10. Бу канал рак төрләрендә берничә чиктән тыш кысыла, мәсәлән, В-күзәнәк яман шешләре 4,11 һәм күкрәк һәм колоректаль яман шеш авырулары12,13. микроглия белән, һәм аның активлыгы ишемик инсульт модельләрендә баш мие зарарлыгын көчәйтү өчен күрсәтелде. Hv1 протеинында көчәнеш сизү домены (VSD) бар, ул S1 - S414 дип аталган дүрт трансмембрана сегменттан тора. VSD көчәнешле Na +, K + һәм Ca2 + каналларының тиешле доменнарына һәм CiVSP кебек көчәнешкә сизгер фосфатазларга охшаган. Ciona gutis15. Бу бүтән протеиннарда, S4 C-терминусы эффектор модулына, күзәнәк доменына яки ферментка бәйләнгән. Hv1, S4 мембрананың цитоплазмик ягында урнашкан күмелгән кәтүк домены (CCD) белән бәйләнгән. .Канал - ике VSDдан торган димерик комплекс, аларның һәрберсендә капкалы протон үткәрү юлы булган 16,17,18. Бу ике Hv1 субунитасы бергәләп ачылу өчен табылды19,20,21,22, бу аллостерик кушылу һәм субунитара үзара бәйләнешне уйный. капка процессында мөһим роль. Көйләнгән кәтүк доменындагы субунитлар арасындагы интерфейс яхшы билгеләнгән, чөнки ике изоляцияләнгән доменның кристалл структуралары бар 22,23. Икенче яктан, мембрана эчендә VSDлар интерфейсы юк. яхшы аңлашылган. Hv1-CiVSP химерик протеинның кристалл структурасы бу интерфейс турында мәгълүмат бирми, чөнки кристаллланган канал комплексының тримерик оешмасы туган Hv1 CCD чүпрә лейцин фермеры GCN424 белән алышыну нәтиҗәсендә булырга мөмкин. Күптән түгел Hv1 каналының субунит оешмасын тикшерү нәтиҗәсендә нәтиҗә ясалды: ике S4 шакмаклары икенчел структураны каты бозмыйча, КДСка күчә, нәтиҗәдә мембранадан һәм цитоплазмага проектланган озын шакмаклар барлыкка килә. Бу тикшеренү Hv1 VSDларның S4 сегменты буенча бер-берсе белән элемтәгә керергә тәкъдим итә. Шулай да, башка тикшеренүләр VSDлар арасында альтернатив интерфейслар тәкъдим иттеләр. Бу интерфейсларга S1 сегментлары 17, 21, 26 һәм S2 сегментының тышкы очлары керә. Бу тикшеренүләр нәтиҗәләре шунда: VSDлар арасындагы аллостерик кушылу ябык һәм ачык хәлләргә бәйле булган капка процессына карата тикшерелде, һәм VSDлар арасындагы интерфейс конформациянең төрле дәүләт үзгәрешләрендә төрле булырга мөмкин. Монда без 2-гуанидинотиазолның Hv1 каналларын синергистик рәвештә ике ачык VSD белән бәйләп тоткарлавын ачыкладык, һәм ачык дәүләттә субунитлар арасындагы үзара бәйләнешне тикшерү өчен кушылмаларның берсен, 2-гуанидинобензотиазол (GBTA) кулландык. Интерфейс. Без таптык, GBTA бәйләү сызыгы санлы модель белән яхшы сурәтләнә ала, анда ингибиторны бер субунитка бәйләү күрше субунитның бәйләнеш якынлыгын арттыруга китерә. Без шулай ук ​​D112 калдыкларын, сайлап алу фильтрларын таптык. 27, 28 канал һәм гуанидин тудыру бәйләнешенең 29 өлеше GBTA бәйләүче кооперативлыкны контрольдә тота. Без күрсәтәбез, кооператив бәйләнеш Hv1 димерында саклана, монда КДС S4 сегментыннан аерыла, бу КДС интерсубунит интерфейсының турыдан-туры булмавын күрсәтә. GBTA-бәйләүче сайтлар арасында арадаш аллостерик кушылу. Киресенчә, без S1 фрагментының субунитлар арасындагы интерфейсның бер өлеше булуын һәм S4 геликсының читтән тыш очлары белән күрше VSD аранжировкасын тәкъдим итәбез, димер үзәгеннән ерак. S1 фрагменты ачык хәлдә булырга тиеш. Hv1ның кечкенә молекула ингибиторлары антикаторга каршы препаратлар һәм нейропротектив агентлар буларак файдалы. Шулай да, бүгенге көнгә кадәр бик аз кушылмалар каналны тыя алалар30,31,32,33. Алар арасында, 2-гуанидинобензимидазол (2GBI, кушылма [1]). . элегрәк 200 μM концентрациясендә сынаганда Hv1-ны 2GBI кебек эффектив итеп күрсәтү өчен күрсәтелгән. текст) .Без дүрт тиазол туемының концентрация җавап сызыкларын билгеләдек (ГБТА һәм кушылмалар [3], [6] һәм [11], рәсем 1с) һәм аларның 2GBIныкына караганда катырак булуын ачыкладык. Тау коэффициентлары (h) тиазол туемнары 1,109 ± 0.040 - 1,306 ± 0.033 арасында (рәсем. 1с һәм өстәмә рәсем 1). Киресенчә, 2GBI өчен калкулык коэффициенты 0,975 ± 0.024 29, рәсем 2а һәм өстәмә рәсем 1). 1 дән югары тау коэффициенты бәйләнешле хезмәттәшлекне күрсәтә. Чөнки һәр Hv1 субунитының үз ингибиторы бар. бәйләүче сайт, 29,32 без тиазол туемының бер субунитка бәйләнеше икенче ингибитор молекуласының күрше субунитка бәйләнешен көчәйтә ала дип уйладык. ГБТА иң югары Hill коэффициенты белән сынау кушылмасы иде. Шуңа күрә без бу кушылманы сайладык алга таба синергия бәйләү механизмын өйрәнегез һәм 2GBI тискәре контроль буларак кулланды. а) Тест кушылмалары: [1] Hv1 ингибиторы 2-гуанидино-бензимидазол (2GBI). [2] 2-гуанидино-бензотиазол (ГБТА), [3] (5-трифлорометил-1,3-бензотиазол-2 ел) гуанидин, [4] нафто [1,2-д] -гуанидин, [5] (4-метил-1,3-тиазол-2 ел) гуанидин, [6] (5-бромо-4-метил-1,3-тиазол-2 ел) гуанидин, [7] фамотидин, [8] 2-гуанидино-5-метил-1,3-тиазол-4-карбоксил кислотасы этил эфиры, [9] 2-гуанидино-4-метил Этил-1,3-тиазол-5-карбоксилат, [10 ] (2-гуанидино-4-метил-1,3-тиазол-5 ел) этилсетат, [11] 1- [4- 12] 1- [4- (3,4-диметоксифенил) -1,3-тиазол-2 ел] гуанидин. .Hv1 протон агымнары Ксенопус ооцитларының эчке такталарында үлчәнде, -80 мВ потенциалыннан +120 мВга кадәр булган деполаризациягә җавап итеп. 200 μM.pHi = pHo = 6.0 концентрациясендә ваннага һәр ингибитор кушылды. .Дата уртача ± SEM (n≥4). 15 үлчәү. Сызык - өстәмә таблицада күрсәтелгән күренгән Kd кыйммәтләрен алу өчен кулланыла торган калкулык, 1-нче рәсемдә күрсәтелгән фитлардан коэффициентлар билгеләнде: h (1) = 0.975 ± 0.024 h (2) = 1.306 ± 0.033, h (3) = 1,25 ± 0.07, h (6) = 1,109 ± 0.040, h (11) = 1.179 ± 0.036 (Методларны карагыз). а) өстәмә гистограммалар 3 һәм 4 нче өстәмә рәсемнәрдә күрсәтелгән фитналардан билгеләнде. (A) күрсәтелгән ГБТА концентрация реакциясе 1 нче рәсемдәге кебек. Кд кыйммәтләре өчен өстәмә таблицаны карагыз. (в) Модельләштерү GBTA-ның димерик Hv1 белән кооператив бәйләнеше. Каты кара сызык (6) тигезләмәсе буенча эксперименталь мәгълүматларга туры килүен күрсәтә, ул (d) күрсәтелгән бәйләү моделен тасвирлый .Суб 1 һәм Суб 2 дип аталган сызыклар ике яклы ассоциацияне күрсәтә - беренче һәм икенче бәйләүче вакыйгаларның тигезләнү кәкреләре (Суб 1: OO + B ⇄ BO *, Kd1 = 290 ± 70 μM; 2 нче бүлек: BO * + B ⇄ B * O *, Kd2 = 29.3 ± 2,5 μM (d) Hv1 блогының тәкъдим ителгән механизмының схематик схемасы. ГБТА очракта, бер ачык субунитка бәйләнү, күрше ачык субунитның якынлыгын арттыра (Kd2 Hv1 каналлары мономеризацияләнергә мөмкин, аларның N- һәм C-терминалы цитоплазмик доменнарын Ciona Intestinalis көчәнешенә сизгер фосфатаз CiVSP (Hv1NCCiVSP) 18,34. аларны димерик канал (кыргый типтагы) тыю белән чагыштырды (2а рәсем, б) .Без ике кушылма арасындагы бәйләнешнең аермасы Hv1 мономерикасында юкка чыкканын ачыкладык, GBTAның бер субунитка бәйләнеше артуын аңлатуны хуплыйбыз. ингибитор өчен бүтән субунитның якынлыгы. Без уйладык, бер Hv1 субунитына бәйләүче GBTA бәйләү мәйданын тәртипкә китерергә мөмкин (fit35 индуктивлыгы), бу күрше субунитның буш бәйләү урынын тәртипкә китерергә этәрә, бәйләнешнең артуына китерәчәк. якынлык. ГБТАның каналга кооператив бәйләнешен санлы итеп сурәтләү өчен, без модель кулландык, анда субунит беренче ингибитор молекуласын бимолекуляр реакциядән соң Kd1 аерылуы белән бәйли ала (2-нче рәсем, Суб 1, OO + B ⇆ BO *). Бәйләү каналның калган буш субунитлары ингибитор белән бәйләнгән халәтне кабул итә, аергыч даими Kd2 белән уникаль бимолекуляр реакциядән соң, монда Kd2 Икенче ингибитор молекуласы бәйләнгәннән соң, ике субунитның да аерылу даими Kd2 бар (2-нче рәсем) .Канель ингибиясе деполаризация шартларында үлчәнде (+120 мВ) .Канель төрләре бер ачык һәм ябык субунит белән (CC ⇄ OC transition кара. ОО 2-нче рәсемдә) Hv1 токына бу шартларда бик аз өлеш кертүләре табылды19,20 һәм шулай итеп алар бәйләү моделенә кертелмәгән. 2c рәсемдәге каты кара сызык - модель тигезләмәсенең эксперименталь концентрация-җавап сызыгына туры килүе, Kd1 ~ 290 μM һәм Kd2 ~ 29 μM (Методлар бүлеге, тигезләмә (6)). 2GBI бәйләү, монда Kd2 ≈ Kd1 = Kd (рәсем 2d). Hv1 мономерикасында бер бәйләүче сайт һәм бер Kdm (O ° + B ⇆ B °) бар .ГБТА очракта Kdm якынча 54 тирәсе. μM, Kd1 белән Kd2 белән охшаган (2d рәсем). Башкача әйткәндә, мономерның бәйләү мәйданы конфигурациядә (O °) түбәнгә караганда югары афинитик хәлгә охшаган (BO *). димерның якынлык торышы (ОО), мөгаен, субунитлар арасындагы интерфейсны бетерү аркасында. Элегерәк 2GBI32 өчен күрсәтелгәнчә, без ачыкладык, GBTA Hv1 агымнарын каналны ачуны кыенрак түгел, ә блоклау белән бастырды (өстәмә рәсем 2а, б, г) .2GBI шулай ук ​​әкренләп бозылган койрык агымнарын китерә. мембраналар реполяризациясенә җавап итеп, ләкин бу күренеш GBTAда күзәтелмәде (өстәмә рәсем. 2c). 2GBI булганда Hv1 инактивлашмаган очракта, блокер бәйләүче урыннан чыкканчы ябыла алмый. аяк капкасы "механизм", һәм 2GBI капкаларга караганда әкренрәк бәйләнә. Әгәр бер Hv1 субуниты блокланган һәм ябык булса, күрше субунит блокланган булса, калган 2GBI молекулаларын бәйләү әкренрәк бара (блокер тоту). Озын гомерле канал төрләре белән. ябылганчы бер генә блокланган субунит үткәрү протоннары һәм әкренләп череп торган койрык токына зур өлеш кертә. Hv1 койрык агымнарының бозылуы GBTA (өстәмә рәсем 2c) булганда сизелерлек акрынланмаган, бу блокер өчен синергистик бәйләү механизмына туры килә (2d рәсем) .Бер тапкыр GBTA молекуласы Hv1 субунитыннан чикләнмәгән. , блокерның күрше субунитка якынлыгы 10 тапкырга төшә, бәйләү процессына өстенлек бирә. Димәк, ГБТАның икенче молекуласы каналга эләккәнче ачылу мөмкинлеге зуррак. Озын гомерле канал төрләре бер блокированный субунит җитештерегез, GBTA булганда 2GBI булганга караганда күпкә күбрәк булыр дип көтелә, нәтиҗәдә койрык токының тизрәк бозылуы. GBTA Hv1 субунитлары белән дә хезмәттәшлек итсен өчен, бәйләүче сайтлар аллостерик рәвештә кушылырга тиеш. Eachәрбер бәйләүче сайт булырга тиеш: 1) ингибитор белән бәйләнгән күрше субуниталар белән аралаша торган вакыйгалар чылбырын этәрү, 2) арадашлык. түбән якынлыктан югары бәйләнешкә күчү. Без уйладык, әгәр бәйләү урыны эчендәге калдыклар кооператив процесска ярдәм итсә, аларның мутациясе Hv1 тыюлыгы GBTA ингибиясенең Хилл коэффициентын үзгәртергә тиеш. D112, F150 , S181 һәм R211 моңа кадәр 2GBI29 бәйләү мохитенең бер өлеше булып күрсәтелде һәм без алар шулай ук ​​GBTA бәйләүдә катнашырлар дип фаразладык. , һәм R211S (3 нче рәсем) һәм аларның Hill коэффициентларын Hv1 кыргый тибындагы чагыштырулар белән чагыштырдылар, белешмә буларак 2GBI кулланып. V109 калдык S1 сегментының D112 белән бер йөзендә һәм күзәнәк эчендә бер өстәмә борылыш бар. V109 2GBI29 бәйләүдә катнашмады, без V109A мутантын контроль буларак кулландык (Рәсем. 3б). а) Гуанидин туемы бәйләүдә катнашкан Hv1 калдыклары. 2GBI29 кушылмасының төрле өлешләре белән үзара бәйләнештә булган зәңгәр чылбырлар алдан тәкъдим ителгән ян чылбырларын әйләндереп алалар. куе кызыл) .Бер нокта 3 - 12 үлчәмнең уртача тыюлыгын күрсәтә ± SD V109 тискәре контроль. Курвалар - күренгән Kd кыйммәтләрен алу өчен кулланылган калкулыклар (өстәмә таблицаны карагыз) .Тау коэффициентлары (h) күрсәтелгән өстәмә гистограммалар 3 һәм 4 нче өстәмә рәсемнәрдә күрсәтелгән фитналардан билгеләнде, Hv1 WT өчен h кыйммәтләре сызылган сызыклар рәвешендә күрсәтелә. . Без таптык, D112E мутациясе Хилл коэффициентын сизелерлек киметте (p 0.05) GGG каналлары белән бәйләүче тау коэффициентының кыргый тип белән чагыштырганда (5с рәсем) кимүен таптык. ике субунит бергә мөһим, ләкин КДБ турыдан-туры GBTA бәйләүче сайтлар арасындагы интерсубунит аллостерик кушылуны арадаш итми. а) H4 димерының схематик схемасы, S4 эчке очында триглицин мутациясе белән, цитоплазмик күмелгән кәтүк домены (зәңгәр уклар) арадашлашкан интерсубунит кушылуны бозу өчен эшләнгән. б) Hv1 үлчәмнәренең схематик чагылышы һәм лигация үлчәмнәре күрсәтелгән мутацияләр, субунитлар (зәңгәр уклар) кушылуында катнашкан S1 фрагментларын сынау өчен эшләнгән. (c - h) 2GBI (циан) һәм GBTA (куе кызыл) күрсәтелгән конструкцияләрне концентрациягә бәйле рәвештә тыялар. 3 3-10 үлчәү SD. Кәкре күренеп торган Kd кыйммәтләрен алу өчен кулланылган Хилл яраклары иде (өстәмә таблицаны карагыз). Интерполяцияләнгән гистограммалардагы коэффициентлар Методлар бүлегендә күрсәтелгәнчә билгеләнде (өстәмә рәсемнәр 3 һәм 4 карагыз). Hv1 WT сызылган сызыклар рәвешендә күрсәтелә. Без GBD кооператив бәйләнешенең туры арадашчысы буларак КДСны кире кагабыз, шуңа күрә без VSDлар арасындагы үзара бәйләнешләр бәйләүче сайтлар арасындагы аллостерик кушылуда катнашамы-юкмы дип сорадык. S1 трансмембрана сегментында. S1 тагын ике тискәре корылган калдыкны үз эченә ала, E119 һәм D123, геликсның бер ягында D112 белән урнашкан, ләкин фрагментның тышкы читенә якынрак. Молекуляр динамика симуляцияләре бу калдыкларның бәйләнгәнлеген күрсәттеләр. D112 суүткәргечләр аша 36,37. Шуңа күрә, без E119 һәм D123 GBTA бәйләүче мәйданнар арасында аллостерик кушылуда катнашкан-булмавын сынадык (5б рәсем). Тискәре контроль буларак, без D123 янында урнашкан уңай корылган K125 позициясен сынадык. ләкин S1 геликсының икенче ягында (5б рәсем). Без E119A, D123A һәм K125A каналларының концентрациягә бәйле ингибиясен 2GBI һәм GBTA белән үлчәп, E119A һәм K125A мутацияләренең кыргый тип белән чагыштырганда ингибиторның Hill коэффициентын сизелерлек үзгәртмәвен ачыкладык (p> 0.05, рәсем 5d, i) ). Икенче яктан, D123A мутациясе GBTA тау коэффициентын сизелерлек киметте (p 0.05/14). Ике субунитта да 123-нче позициядә зарядны нейтральләштерү ГБТА кооперативының көчле үзгәрүенә китерде, шул ук вакытта ике субунитта да зарядны кире кайтару кечкенә генә эффект күрсәтте, без анализны киңәйттек, инверсия каналы белән бер субунитны кертү өчен. C-терминал субунитасында D123R алыштыру белән Hv1 бәйләнгән үлчәмнәр барлыкка китерде (5б рәсем) һәм GBTA һәм 2GBI тарафыннан концентрация-җавап ингибиясен үлчәдек. кыргый Hv1 (p 0.05). Без шулай ук ​​таптык, βME булмаганда, D112E I127C Hv1 димеры белән бәйләүче GBTA тау коэффициенты, киметүче агентлар булганда үлчәнгәнгә караганда күпкә югарырак булган (6-нчы рәсем һәм өстәмә рәсем 4), бу D112E мутациясен күрсәтә. 127 цистинның үзара бәйләнеше нәтиҗәсендә GBTA бәйләүче кооперативның үсешен бетермәде. D112E, I127C Hv1 үлчәмнәре белән бәйләнгән 2GBI тау коэффициенты D112E мутациясенә дә зур тәэсир итмәде (1 нче рәсем) .6d һәм өстәмә. 3 нче рәсем). Бергә туплангач, бу табышмаклар GBTA бәйләнешенең H1 субуниталарындагы S1 фрагментларының тышкы очлары арасындагы үзара тәэсир итү аркасында, электростатик үзара бәйләнешләр аша яки алмаштырылган цистиннар арасында ковалент бәйләнешләр формалашуы аркасында, Аллостерик кушылу арту һәм бәйләнешнең бәйләнешенә китерә. Электростатик үзара бәйләнешнең кооперативка тәэсире D112E мутациясе белән юкка чыгарылса да, ковалент элементларның эффекты була алмый. Гванидин туемнарын Hv1 каналларына бәйләү өчен булган химик киңлекне барлауда, без 2-гуанидинобензимидазолга караганда 2-гуанидинотиазолның концентрация бәйләнешенә ия булуын ачыкладык. һәм мономерик каналлар (2а рәсем, б) һәм бер субунит ингибитор белән алдан бәйләнгән димерик каналга (4 нче рәсем) безне Hv1 GBTA тарафыннан тыю дигән нәтиҗә ясарга этәрде Акция синергистик процесс, һәм Ике субуниттагы кушылмаларның бәйләүче урыннары аллостерик рәвештә кушылган. GBTA ачык каналга бәйләнгән ачыш, моңа кадәр 2GBI32 кушылмасы өчен күрсәтелгәнчә, аллостерик кушылуны ачык дәүләттә бәяләргә мөмкинлеген күрсәтә. Безнең кооператив бәйләү моделе ГБТА (2-нче рәсем) һәм мембран реколикалаштырудан соң, 2GBI һәм GBTA-ны бозылганнан соң, HV1 тыелганын санап чыкты. Максималь калкулык коэффициентына аллостерант протестта (HV1 кебек) ирекле булган ике мәҗбүри протестта ирешеп була. Синергистик ирекле энергия, иң түбән һәм иң югары якынлык сайтларының иң яхшы көчләре белән аерма (карагыз), hv1 кыргый типтагы һәм 2,7 ккал / молек, HV1 on127C. белән бәйләүдә 1,3 ккал / мең иде. мәҗбүри Гемоглингка кислород38. Билгеле булган. ККАЛ / МОС, эксперименталь шартларга карап, Глобатика энергетоциясе ягыннан, ГБТА БРИНГЫНДА ГЕМА БИНГИНГЫНДА Гемоглобинга, ике системада төрле саннар карала. Безнең Синергия моделендә бер субунитның бер субунитка бәйләүдә бер субунит. Субунциаллар арасындагы үзара бәйләнештә үзгәрешләр, күрше субнитлар бәйләү урыннарын үзгәртә, нәтиҗәдә асты досминг белән бәйле, мәҗбүри гыйбарә белән бәйле бәйләү урынын тәртипкә китерү өчен җаваплы .d112 белән бәйле бәйләү урынын тәртипкә китерү өчен җаваплы. Элегерәк HV1 протонның пермены яки сайлап алу фильтры итеп күрсәтелә. Безнең нәтиҗәләр күрсәтү күрсәтелә Ике HV1 субунит фильтрлары Ачык дәүләттә алдагы дәүләттә аллостерик рәвештә gv1 vsd нигезендәге схемаларда HV1-enighsp Chimera кристалл структурасында. а) HV1 vsd схемасы. GBTA фаразланган фаразланган урыннары Соры Овалс.Блаклы уклар итеп күрсәтелә. Ике төрле дерфер конфигурацияләрдә мембрана яссылыгы. Ике S4 Helice-ның тышкы очларын аеру уңда күрсәтелгән аранжировка чыгара. 4G80 кристалл структурасында табылган димфер конфигурациясендә. P140-ның P140-ның HV1 позициясенә туры килә. Безнең нәтиҗәләр күрсәтү шуны күрсәтә 123 (123d / 1233% яки 123R / 1237) "Гадәттәге" GBTA белән бәйләнешнең "гадәти" дәрәҗәсе белән бәйле һәм үзара бәйләнешне җәлеп итеп (123d / 123R) , хезмәттәшлекне арттырыгыз (5г. ". Аңлатма - гидрофлык калдыкларында гидрофобик калдык урнаштыруның тотрыклы эффекты, нәтиҗәдә бәйләнеш кооперативы. D171 CI-HV1 позициясе (кеше hv1'та D123 язмасы) активлаштыруда, D123 ачык дәүләттә гидрофилик мохиттә урнашкан төшенчәненә ярдәм итә. HV1 каналларын капитацияләү табышлы дип тапкан, CI-HV1 булган көчәнеш каналны активлаштырган, ләкин әле дә ябылган . Футорорит үзгәрешләренең D171 яше белән бер ноктада электростатик суырлык белән туры килергә омтыла. Бу аңлатма без ачык дәүләттә D123 калдык электростатик яктан үзара бәйләнештә тору белән туры килә. GBTA мәҗбүри сайтлары арасында Аллостерик купулыклар бар. Fujiwhara et al25 Cytoplake Coile-Coile домены мембрана интерфейсында ике S4 интерфейсында сузылырга тәкъдим итте. S4 HELIX PR градиентын тоташтыручы төбәктә тулысынча һәм функциональ анализлау, HV1 каналлары ачу өчен шактый мембранизация таләп итә, һәм цивитир креслинкасы каналның күбесенчә ябылган шартларда була. Шуңа күрә ачыкланган S4-S4 интерфейсы, мөгаен, дәүләт субуцит конфигурациясен чагылдыра. Өйрәнү буенча S1 ​​һәм S2 катнашуы вакытында S1 һәм S2 катнашуы өчен үзара бәйләнеш тапканнары өчен төрле субуит конфигурациясен кабул итү өчен дәлилләр табылган. Ябык штатлар, Идея Мони һ.б. S1 матчы вакытында 39 хәрәкәт итә. Монда без, ачык дәүләттә, Субунциал арасындагы чит ил өстәмәсе белән шөгыльләнүче турыдан-туры электростаның читләшү максатларын тәэмин итәр өчен, без күрсәтәбез, су субунций. Бер-берсеннән аерылып торган, ике S4 HILECERY AXIS-ның перпендикуляр әйләнеше тирәсендә, тышкы очлары белән берләштерелгән, S1-S1 конфигурациясе эзлеклесе бирелде Безнең табышларыбыз белән (7б, уң панель) .Бе ачык дәүләттә бу конфигурацияне тәкъдим итегез. Гражданлык фермеры мономер булып эшләсә дә, аның изоляцияләнгән кристалл структурасында эшләсә дә, аның изоляцияләнгән кристалл структурасы. HV1 өчен (7 нче рәсем). Crivesp durters тәкъдим итә, бу протеиннарның VSDларның шәхси омтылышы, анда S1 интерактив беткән интерфейс формалаштырырга. Сперма күзәнәк активлаштыруында HV1 төп роле IV1 сәнгать интрукциясен контрольдә тоту өчен күрсәтелде. Күкрәктә пациентларда исән калу 13 һәм В-күзәнәкнең ямьсез агентларына өлеш кертү, димәк, кечкенә молектив терапевтлар. Бетинг белән танышу белән шөгыльләнүче HV1 субунитын ачыгыз, HV1 каналларына юнәлтелгән тагын да көчле друглар үсешенә китерергә мөмкин. Кеше hv1 сайтка юнәлтелгән Сайт юнәлешендәге Мутетенез PCRISP төзелгән, 1-96 һәм 220-5-5-5-5-5-5-5-5-5-5-5-5-576. Бер субунитның C терминиясе GGSGSGGSGGSGGG Linker. T7 MMESSAGE MMACHINE транскрипциясе комплекты (Ablion) .1-3 Көн Кенопуска 0,3-1,5 μG / Vi OociThe .Сенопус Лаевис (Наско) алынды. Экокит бәйрәменнән. . 2-Гуанидино-Бензимидазоле [1], 2 Гуанидино-бензотзоле [2], (4-MetLYL-1-Тиазол-2-тизол-2-тизол-2-тизол-2-тизол-2-тизол-2-ти-4-мететл-13 -әзал-2-yl) GuanIdine 2-Guanidin-5-Thiazole-48-Thizole-48-Thizole-48-Tikyl-4-Thiazylate Grea 2-Guanidina-4- GuanIL-13-тизол- 5-карбоксилат [9] һәм (2-Гуанидино-4-Тиазол-5-Тиазол-5-тизол-5-тизол-5-тизол-5-тизол-5-тизол-5-тизол-5-тизол-5-тизол-5-тизол-5-тизол-5-тизол-5-тизол-5-тизол-5-йлрих.фалотидиннан иде .- [4 - (4 -чехопен) -1,3-Тиазол-2 Йл] Гуанидин [11] (3,4-Dimethoxyirkenl) -1,3- Тиазол-2 Йл] Гуанидин [12] иде Матрицтердан фәнни-тан иң чисталыгыннан иң зур чисталык булган. ким дигәндә 99% саф. 2-амино-4- (Trifluoromethil) Бензинетиол Гидрохлорид (2.0 М., 45 Ммол) кушылды (2,50 Мг, 4,5 ММОЛ), һәм килеп чыккан гетероген катнашмасы 4 сәгать дәвамында көчле дулкынлану белән башланган. Акыллы катнашма 10н калайгиум. 65 ° C) берничә сәгать дәвамында, аннары Ак каты бирү өчен Этил ярыннан / нефть Эстреум эфирыннан торгызыла (58 мг 48%); MP 221-222 ° C (Якты 225-226 ° C) 45; 1h nmr (5нче М.Ж. , 1 Х, J = 8.1 HZ) .13c nmr (200 М.Хц = 272 HZ), 126.1 (С, J = 272 HZ) = 31.6 HZ), 134,4.4.5. : 261.0419. Нафто [1,2-D] Тиазол-2-амин (300 ММ 1,0 мл редакцияләнгән гидрохлор кислотасы тиз арада 2 минут чамасы. кечкенә кисәкләргә ватылды һәм алсу сары аморф тәэмин итү өчен су белән юылды. (38 мг, 10%) депутат 246-250 ° C; 1h nmr (55 М.Г. , J = 8.6 HZ), 7.89 (D, 1 H, J = 8.02 (D, 1 H, J = 8.3 h, j = 8.3c) .13c nmr (150) MHZ, DMSO-D6): δ = 119.7, 123.4, 126.5.1. - дип табылды: 243.0704. Протон агымнары Axlamp10 программа белән идарә итүче эчке һәм тышкы көчәйтү белән үлчәнде. ) Etanesulfonic кислотасы, 30 мм Тетретилламон (чәй чәй хлориды, 5 мм чәй хлориды, 5 мм чәй хлориды PH 6.0 Чәй гидроксид белән 5 ° 2 ° C. ) һәм килеп чыгышы 8.1 (Оригилә). HV1 ингентиторлары булган чишелешләр В. Транзистор Логика) Сигналлар +120 MV Deopolingsing Pulcase.gv үлчәү үлчәүләре элек -0 МВттан +120 MV-ның 200120 MV-ның 200120 MV-ларында булганнан соң ясалды. Сынау импульс алдыннан белешмә импульс Агымдагы черү өчен дөреслек өчен кулланылган. GV график болтман тигезләмәсенә туры килә: концентрацияләү концентрациясе (1 нче өстәмә таблицага туры килер (% инфиб кыйммәтләре уртача) Тау тигезләмәсе белән: Кайда [i] - ингибитор концентрациясе - тау коэменты. Таш коэффисениесе, тигезләмә (2) тәртипкә китерелгән: