ינטעראַגיישאַן פון די ינטערסובוניט צובינד פון די עפענען Hv1 פּראָטאָן קאַנאַל מיט אַ אַללאָסטעריקאַל זאָנד

דאנק איר פֿאַר באזוכן Nature.com.דער בלעטערער ווערסיע איר נוצן האט לימיטעד שטיצן פֿאַר CSS. פֿאַר דער בעסטער דערפאַרונג, מיר רעקאָמענדירן אַז איר נוצן אַ דערהייַנטיקט בלעטערער (אָדער קער אַוועק קאַמפּאַטאַבילאַטי מאָדע אין Internet Explorer). אין דער דערווייל, צו ענשור פארבליבן שטיצן, מיר וועלן אַרויסווייַזן די פּלאַץ אָן סטיילז און דזשאַוואַסקריפּט. די Hv1 וואָולטידזש-גייטיד פּראָטאָן קאַנאַל איז אַ דימעריק קאָמפּלעקס קאַנסיסטינג פון צוויי וואָולטידזש-סענסינג דאָומיינז (VSDs), יעדער פון וואָס כּולל אַ גייטיד פּראָטאָן פּערמעאַטיאָן פּאַטוויי. דימעריזאַטיאָן איז קאַנטראָולד דורך די סיטאָפּלאַסמיק קוילד-שפּול פעלד. די אָפֿן שטאַט אין ביידע וסדס איז באקאנט צו פאַלן קאָאָפּעראַטיוועלי; אָבער, קליין איז באקאנט וועגן די אַנדערלייינג מעקאַניזאַמז. ינטערסובוניט ינטערפייסיז שפּילן אַ שליסל ראָלע אין אַללאָסטעריק פּראַסעסאַז; אָבער, אַזאַ ינטערפייסיז האָבן ניט געווען יידענאַפייד אין עפענען Hv1 טשאַנאַלז. דאָ מיר באַווייַזן אַז 2-גואַנידינאָטהיאַזאָלע דעריוואַטיווז פאַרשפּאַרן צוויי Hv1 VSDs אין אַ קאָאָפּעראַטיווע שטייגער און נוצן איינער פון די קאַמפּאַונדז ווי אַ זאָנד פֿאַר אַללאָסטעריק קאַפּלינג צווישן עפענען סובוניץ.מיר געפונען אַז די עקסטראַסעללולאַר סוף פון דער ערשטער טראַנסמעמבראַנע פראַגמענט פון VSD פארמען אַן ינטערסובוניט צובינד אַז מידיייץ קאַפּלינג צווישן ביינדינג זייטלעך, כוועראַז די קוילד-שפּול פעלד איז נישט גלייַך ינוואַלווד אין דעם פּראָצעס. מיר אויך געפֿונען שטאַרק זאָגן אַז די קאַנאַל ס פּראָטאָן-סעלעקטיוו פילטער קאָנטראָלס בלאַקער-ביינדינג קאָאָפּעראַטיווע . וואָולטידזש-גייטיד פּראָטאָן טשאַנאַלז שפּילן וויכטיק ראָלעס אין אַ פאַרשיידנקייַט פון אָרגאַניזאַמז, פון פיטאָפּלאַנטטאָן צו יומאַנז איז Hv1, וואָס איז דער פּראָדוקט פון די HVCN1 גענע2,3.Hv1 (aka VSOP) איז געוויזן צו שפּילן אַ ראָלע אין ב צעל פּראָוליפעריישאַן4, פּראָדוקציע פון ​​ריאַקטיוו זויערשטאָף מינים דורך די ינייט ימיון סיסטעם5,6,7,8, זיירע צעל מאָוטיליטי9 און ף רעגולירן פון אַירווייַ ייבערפלאַך פליסיק10. דער קאַנאַל איז ינוואַלווד אין עטלעכע אָווערעקספּרעססעד אין ראַק טייפּס אַזאַ ווי ב-צעל מאַליגנאַנסיז 4,11 און ברוסט און קאָלאָרעקטאַל קאַנסערס 12,13. יבעריק Hv1 טעטיקייט איז געפֿונען צו פאַרגרעסערן די מעטאַסטאַטיק פּאָטענציעל פון ראַק סעלז 11, 12. אין דעם מאַרך, Hv1 איז אויסגעדריקט דורך מיקראָגליאַ, און זייַן טעטיקייט איז געוויזן צו פאַרשטאַרקן מאַרך שעדיקן אין מאָדעלס פון יסטשעמיק מאַך. די Hv1 פּראָטעין כּולל אַ וואָולטידזש-סענסינג פעלד (VSD), וואָס באשטייט פון פיר טראַנסמעמבראַנע סעגמאַנץ גערופן S1 צו S414. Ciona gutis15.אין די אנדערע פּראָטעינס, די C-טערמינוס פון S4 איז אַטאַטשט צו אַ ווירקונגאָר מאָדולע, די פּאָרע פעלד אָדער ענזיים.אין Hv1, S4 איז לינגקט צו די קוילד-שפּול פעלד (CCD) ליגן אויף די סיטאָפּלאַסמיק זייַט פון די מעמבראַנע דער קאַנאַל איז אַ דימעריק קאָמפּלעקס קאַנסיסטינג פון צוויי ווסדס, יעדער מיט אַ גייטיד פּראָטאָן דורכדרונג דרך 16, 17, 18. די צוויי Hv1 סאַבוניץ זענען געפונען צו עפענען קאָאָפּעראַטיוועלי 19, 20, 21, 22, סאַגדזשעסטינג אַז אַללאָסטעריק קאַפּלינג און ינטער-סובוניט ינטעראַקשאַנז שפּילן אַ וויכטיק ראָלע אין די גייטינג פּראָצעס. די צובינד צווישן די סובוניץ אין די קוילד שפּול פעלד איז געזונט-דיפיינד ווייַל די קריסטאַל סטראַקטשערז פון די צוויי אפגעזונדערט דאָומיינז זענען בנימצא22,23. אויף די אנדערע האַנט, די צובינד צווישן וסדס אין די מעמבראַנע איז נישט די קריסטאַל סטרוקטור פון די Hv1-CiVSP טשימעריק פּראָטעין גיט נישט אינפֿאָרמאַציע וועגן דעם צובינד, ווייַל די טרימעריק אָרגאַניזאַציע פון ​​די קריסטאַלייזד קאַנאַל קאָמפּלעקס קען רעזולטאַט פון די פאַרבייַט פון די געבוירן Hv1 CCD דורך די הייוון לעוסינע זיפּפּער GCN424. א פריש לערנען פון די סובוניט אָרגאַניזאַציע פון ​​די Hv1 קאַנאַל געפונען אַז צוויי S4 העליסעס יבערגאַנג אין די קקד אָן שטרענג דיסראַפּשאַן פון צווייטיק סטרוקטור, ריזאַלטינג אין לאַנג העליסעס וואָס אָנהייבן פֿון די מעמבראַנע און פּרויעקט אין די סיטאָפּלאַסם. דעם לערנען לייגט אַז Hv1 VSDs קאָנטאַקט יעדער אנדערע צוזאמען די S4 אָפּשניט. אָבער, אנדערע שטודיום האָבן פארגעלייגט אָלטערנאַטיוו ינטערפייסיז צווישן VSDs. די ינטערפייסיז אַרייַננעמען S1 סעגמאַנץ 17, 21, 26 און די ויסווייניקסט ענדס פון S2 אָפּשניט 21. א מעגלעך סיבה פֿאַר די קאַנפליקטינג רעזולטאַטן פון די שטודיום זענען אַז אַלאָסטעריק קאַפּלינג צווישן VSDs איז געווען יגזאַמאַנד אין באַציונג צו די גייטינג פּראָצעס, וואָס דעפּענדס אויף די פארמאכט און אָפֿן שטאַטן, און די צובינד צווישן VSDs קען בייַטן אין פאַרשידענע שטאַט ענדערונגען אין קאַנפאָרמיישאַן. דאָ, מיר געפֿונען אַז 2-גואַנידינאָטהיאַזאָלע ינכיבאַץ Hv1 טשאַנאַלז דורך סינערגיסטיקלי ביינדינג צו צוויי אָפֿן ווסדס, און געוויינט איינער פון די קאַמפּאַונדז, 2-גואַנידינאָבענזאָטהיאַזאָלע (גבטאַ), צו זאָנד די ינטעראַקשאַן צווישן סובוניץ אין די אָפֿן שטאַט. מיר געפונען אַז די GBTA ביינדינג ויסבייג קענען זיין געזונט דיסקרייבד דורך אַ קוואַנטיטאַטיווע מאָדעל אין וואָס ביינדינג פון אַ ינכיבאַטער צו איין סובוניט רעזולטאטן אין אַ פאַרגרעסערן אין די ביינדינג קירבות פון די שכייניש סובוניט. קאַנאַל 27, 28 און טייל פון די גואַנידינע דעריוואַט ביינדינג פּלאַץ 29 קאָנטראָלירן GBTA ביינדינג קאָאָפּעראַטיווע. אין קאַנטראַסט, מיר געפֿינען אַז די S1 פראַגמענט איז טייל פון די צובינד צווישן די סובוניץ און פאָרשלאָגן אַ אָרדענונג פון שכייניש VSDs מיט די עקסטראַסעללולאַר סוף פון די S4 כיליקס אַוועק פון די צענטער פון די דימער. די S1 פראַגמענט צו זיין אין די אָפֿן שטאַט. ינכיבאַטערז פון קליין מאַלאַקיולז פון Hv1 זענען נוציק ווי אַנטיקאַנסער דרוגס און נעוראָפּראָטעקטיוו אגענטן. אָבער, ביז אַהער, ווייניק קאַמפּאַונדז האָבן שוין ביכולת צו ינכיבאַט די קאַנאַל 30,31,32,33. 1 אַ) און זייַן דעריוואַטיווז זענען געפונען צו פאַרשפּאַרן VSD29,32 פּערמייישאַן פון פּראָטאָנס דורך די קאַנאַל. ביינדינג פון אַזאַ קאַמפּאַונדז איז געדאַנק צו פאַלן ינדיפּענדאַנטלי אין די צוויי עפענען סובוניץ. פריער געוויזן צו ינכיבאַט Hv1 כּמעט ווי יפעקטיוולי ווי 2GBI ווען טעסטעד אין אַ קאַנסאַנטריישאַן פון 200 μם (פיגורע 1 ב). טעקסט). מיר באשלאסן די קאַנסאַנטריישאַן ענטפער קורוועס פון פיר טהיאַזאָל דעריוואַטיווז (גבטאַ און קאַמפּאַונדז [3], [6] און [11], פיגור. 1 ק) און געפונען אַז זיי זענען סטיפּער ווי די פון 2GBI.די הילל קאָואַפישאַנץ (ה) פון טהיאַזאָל דעריוואַטיווז ריינדזשד פון 1.109 ± 0.040 צו 1.306 ± 0.033 (Fig. אין קאַנטראַסט, די הילל קאָואַפישאַנט פֿאַר 2GBI איז געווען 0.975 ± 0.024 29, פיגורע 2אַ און סאַפּלאַמענערי פייג. 1). א הילל קאָואַפישאַנט אויבן 1 ינדיקייץ ביינדינג קאָאָפּעראַטיווע. בינדינג פּלאַץ,29,32 מיר ריזאַנדיד אַז די ביינדינג פון אַ טהיאַזאָל דעריוואַט צו איין סובוניט קען פאַרבעסערן די ביינדינג פון אַ צווייט ינכיבאַטער מאַלאַקיול צו די שכייניש סובוניט.GBTA איז געווען די פּראָבע קאַמפּאַונד מיט די העכסטן הילל קאָואַפישאַנט.דעריבער, מיר אויסדערוויילט דעם קאַמפּאַונד צו ווייַטער לערנען די מעקאַניזאַם פון ביינדינג סינערדזשי און געוויינט 2GBI ווי אַ רעפֿערענץ נעגאַטיוו קאָנטראָל. (אַ) טעסט קאַמפּאַונדז: [1] רעפערענץ Hv1 ינכיבאַטער 2-גואַנידינאָ-בענזימידאַזאָל (2GBI).[2] 2-גואַנידינאָ-בענזאָטהיאַזאָל (גבטאַ), [3] (5-טריפלואָראָמעטהיל-1,3-בענזאָטהיאַזאָל-2-יל) גואַנידין, [4] נאַפטאָ[1,2-ד][1,3] טהיאַזאָל-2-יל -גואַנידינע, [5] (4-מעטהיל-1,3-טהיאַזאָל-2-יל) גואַנידינע, [6] (5-בראָמאָ-4-מעטהיל-1,3-טהיאַזאָל-2-יל) גואַנידין, [7] פאַמאָטידינע, [8] 2-גואַנידינאָ-5-מעטהיל-1,3-טהיאַזאָלע-4-קאַרבאָקסיליק זויער עטאַל עסטער, [9] 2-גואַנידינאָ-4-מעטהיל עטהיל-1,3-טהיאַזאָלע-5-קאַרבאָקסילאַטע, [10 ](2-גואַנידינאָ-4-מעטהיל-1,3-טהיאַזאָל-5-יל)עטהיל אַסאַטייט, [11]1-[4-(4-טשלאָראָפעניל)-1,3-טהיאַזאָל-2-יל]גואַנידינע, 12] 1-[4-(3,4-דימעטהאָקסיפעניל)-1,3-טהיאַזאָל-2-יל] גואַנידינע. .Hv1 פּראָטאָן קעראַנץ זענען געמאסטן אין ין-אויס פּלאַקס פון קסענאָפּוס אָאָסיטעס אין ענטפער צו דעפּאָלאַריזאַטיאָן פון אַ האלטן פּאָטענציעל פון -80 מוו צו + 120 מוו. .דאַטאַ זענען מיינען ± סעם (n≥ 4). (C) קאַנסאַנטריישאַן-אָפענגיק ינאַבישאַן פון מענטשלעך Hv1 דורך קאַמפּאַונדז [2], [3], [6] און [11]. יעדער פונט רעפּראַזענץ די דורכשניטלעך ינאַבישאַן ± סד פון 3 צו 15 מעזשערמאַנץ. די שורה איז אַ הילל פּאַסיק געניצט צו באַקומען די קלאָר קד וואַלועס רעפּאָרטעד אין סאַפּלאַמענטערי טאַבלע 1. הילל קאָואַפישאַנץ זענען באשלאסן פון די פיץ רעפּאָרטעד אין סאַפּלאַמענטערי פייג. 1: ה (1) = 0.975 ± 0.024 ה (2) = 1.306 ± 0.033, ה (3) = 1.25 ± 0.07, ה (6) = 1.109 ± 0.040, ה (11) = 1.179 ± 0.036 (זען מעטהאָדס). (אַ, ב) קאַמפּאַונדז 2GBI און GBTA ינכיבאַטיד דימעריק און מאָנאָמעריק הוו1 אין אַ קאַנסאַנטריישאַן-אָפענגיק שטייגער. יעדער פונט רעפּראַזענץ די דורכשניטלעך ינאַבישאַן ± סד פון 3-8 מעזשערמאַנץ און די ויסבייג איז אַ הילל פּאַסיק. די הילל קאָואַפישאַנץ (ה) געוויזן אין די ינסעט כיסטאַגראַמז זענען באשלאסן פון די פיץ רעפּאָרטעד אין סופּפּלעמענטאַרי פיגס 3 און 4. די קאַנסאַנטריישאַן ענטפער פון גבטאַ געוויזן אין (אַ) איז די זעלבע ווי אַז אין Fig. 1c.See Supplementary Table 1 פֿאַר קלאָר קד וואַלועס. די קאָאָפּעראַטיווע ביינדינג פון גבטאַ צו דימעריק הוו1. די האַרט שוואַרץ שורה רעפּראַזענץ די פּאַסיק צו די יקספּערמענאַל דאַטן דורך יקווייזשאַן (6), וואָס באשרייבט די ביינדינג מאָדעל געוויזן אין (ד). -דיססאָסיאַטיאָן יקוואַליבריאַם קורוועס פון דער ערשטער און רגע ביינדינג געשעענישן, ריספּעקטיוולי (סוב 1: OO + ב ⇄ באָ *, קד1 = 290 ± 70 μם; סוב 2: באָ * + ב ⇄ ב * אָ *, קד 2 = 29.3 ± 2.5 μם ).(ד) סכעמאַטיש דיאַגראַמע פון ​​די פארגעלייגט מעקאַניזאַם פון די Hv1 בלאָק.אין דעם פאַל פון GBTA, ביינדינג צו איין עפענען סובוניט ינקריסאַז די קירבות פון די שכייניש עפענען סובוניט (Kd2 Hv1 טשאַנאַלז קענען זיין מאַנאַמערייזד דורך ריפּלייסינג זייער N- און C-וואָקזאַל סיטאָפּלאַסמיק דאָומיינז מיט קאָראַספּאַנדינג פּאָרשאַנז פון די סיאָנאַ ינטעסטאַנאַליס וואָולטידזש-שפּירעוודיק פאָספאַטאַסע CiVSP (Hv1NCCiVSP) 18,34. קאַמפּערד זיי צו אַז פון דימעריק קאַנאַל (ווילד-טיפּ) ינאַבישאַן (Fig. 2a,b). מיר געפונען אַז די חילוק אין ביינדינג קאָאָפּעראַטיווע צווישן די צוויי קאַמפּאַונדז איז ילימאַנייטאַד אין מאָנאָמעריק הוו1, סופּפּאָרטינג די דערקלערונג אַז GBTA ביינדינג צו איין סובוניט ינקריסיז די די קירבות פון די אנדערע סאַבוניט פֿאַר די ינכיבאַטער. מיר ריזאַנדיד אַז GBTA ביינדינג צו איין Hv1 סובוניט קען פירן צו ריעריינדזשמאַנט פון די ביינדינג פּלאַץ (ינדוסינג פיט35), וואָס וואָלט צינגל די ריעריינדזשמאַנט פון די ליידיק ביינדינג פּלאַץ פון די שכייניש סאַבוניט, וואָס וועט פירן צו אַ געוואקסן ביינדינג קירבות. צו קוואַנטיטאַטיוועלי באַשרייַבן די קאָאָפּעראַטיווע ביינדינג פון GBTA צו דעם קאַנאַל, מיר געוויינט אַ מאָדעל אין וואָס יעדער סובוניט קענען בינדן די ערשטער ינכיבאַטער מאַלאַקיול נאָך אַ ביימאָלעקולאַר אָפּרוף מיט אַ דיססאָסיאַטיאָן קעסיידערדיק Kd1 (Fig. 2c, Sub 1, OO+ B ⇆ BO * ). בינדינג ז דער קאַנאַל צו אַדאַפּט אַ שטאַט אין וואָס די רוען ליידיק סאַבוניץ בינדן צו די ינכיבאַטער נאָך אַ יינציק ביימאָלעקולאַר אָפּרוף מיט אַ דיססאָסיאַטיאָן קעסיידערדיק Kd2, ווו Kd2 אַמאָל די רגע ינכיבאַטער מאַלאַקיול איז געבונדן, ביידע סובוניץ האָבן אַ דיססאָסיאַטיאָן קעסיידערדיק קד 2 (פיגורע 2 ד). קאַנאַל ינאַבישאַן איז געמאסטן אונטער דעפּאָלאַריזינג טנאָים (+ 120 מוו). OO אין Fig. 2d) זענען פריער געפונען צו ביישטייערן נעגלאַדזשאַבלי צו די Hv1 קראַנט אונטער די באדינגונגען19,20 און אַזוי זיי זענען נישט אַרייַנגערעכנט אין די ביינדינג מאָדעל. די האַרט שוואַרץ שורה אין פיגורע 2ק איז די פּאַסיק פון די מאָדעל יקווייזשאַן צו די יקספּערמענאַל קאַנסאַנטריישאַן-ענטפער ויסבייג, וואָס גיט אַ Kd1 פון ~ 290 μM און אַ Kd2 פון ~ 29 μM (מעטאָדן אָפּטיילונג, יקווייזשאַן (6)). דער מאָדעל אויך באשרייבט די בינדינג פון 2GBI, ווו Kd2 ≈ Kd1 = Kd (Fig. 2d). אין מאָנאָמעריק Hv1, עס איז בלויז איין ביינדינג פּלאַץ און איין Kdm (O° + B ⇆ B °). אין דעם פאַל פון GBTA, Kdm איז אַרום 54 μM, וואָס איז מער ענלעך צו Kd1 ווי Kd2 (Fig. 2d). אין אנדערע ווערטער, די ביינדינג פּלאַץ פון די מאָנאָמער איז אין אַ קאַנפיגיעריישאַן (O°) מער ענלעך צו די הויך קירבות שטאַט (BO*) ווי די נידעריק-קענטעניש. קירבות שטאַט (OO) פון די דימער, רובֿ מסתּמא רעכט צו דער ילימאַניישאַן פון די צובינד צווישן סובוניץ. ווי פריער געוויזן פֿאַר 2GBI32, מיר געפֿונען אַז GBTA סאַפּרעסט Hv1 קעראַנץ דורך בלאַקינג די קאַנאַל ווען עס איז געווען אָפֿן אלא ווי צו מאַכן עס האַרדער צו עפֿענען (סופּפּלעמענטאַרי פייג. 2a,b,d). אין ענטפער צו מעמבראַנע רעפּאָלאַריזאַטיאָן, אָבער דעם דערשיינונג איז נישט באמערקט אין GBTA (סופּפּלעמענטאַרי פייג. 2c). אין דעם בייַזייַן פון Hv1 ינאַקטיוויישאַן אין דעם בייַזייַן פון 2GBI, די טויערן אין יעדער סובוניט קענען נישט פאַרמאַכן ביז די בלאַקער בלעטער די ביינדינג פּלאַץ (די " פוס טויער" מעקאַניזאַם), און 2GBI אַנבינד סלאָוער ווי די טויערן נאָענט. בלויז איין אפגעשטעלט סובוניט פירן פּראָטאָנס טראַנזישאַנטלי איידער קלאָוזינג און מאַכן אַ באַטייטיק צושטייַער צו די סלאָולי דיקייינג עק קראַנט. דער דערגייונג אַז די פאַרפוילן פון Hv1 עק קעראַנץ איז נישט באטייטיק סלאָוד אין דעם בייַזייַן פון גבטאַ (סופּפּלעמענטאַרי פייג. 2 ק) איז קאָנסיסטענט מיט אַ סינערדזשיסטיק ביינדינג מעקאַניזאַם פֿאַר דעם בלאַקער (Fig. 2 ד). , די קירבות פון די בלאַקער צו די שכייניש סובוניט טראפנס וועגן 10-פאַרלייגן, פאַוואָרינג די אַנביינדינג פּראָצעס.דאס מיטל אַז די רגע מאַלאַקיול פון גבטאַ האט אַ פיל העכער געלעגנהייַט פון אַנראַוואַלינג איידער עס געץ טראַפּט אין די קאַנאַל. לאַנג-געלעבט קאַנאַל מינים וואָס בלויז איין בלאַקינג סובוניט איז געריכט צו זיין פיל מער שעפעדיק אין דעם בייַזייַן פון GBTA ווי אין דעם בייַזייַן פון 2GBI, ריזאַלטינג אין פאַסטער עק קראַנט פאַרפוילן. כּדי GBTA קאָאָפּעראַטיוועלי בינדן מיט ביידע Hv1 סאַבוניץ, די ביינדינג זייטלעך מוזן זיין אַלאָסטעריקאַללי קאַפּאַלד. מיר ריזאַנדיד אַז אויב ספּעציפיש רעזאַדוז אין די ביינדינג פּלאַץ קאַנטריביוטיד צו די קאָאָפּעראַטיווע פּראָצעס, זייער מיוטיישאַן זאָל טוישן די הילל קאָואַפישאַנט פון די קאַנסאַנטריישאַן-ענטפער ויסבייג פון GBTA ינאַבישאַן פון Hv1. Residues D112, F150 , S181 און R211 זענען פריער געוויזן צו זיין טייל פון די 2GBI29 ביינדינג סוויווע און מיר כייפּאַטאַסייזד אַז זיי וואָלט סימאַלערלי זיין ינוואַלווד אין גבטאַ ביינדינג (פיגורע 3 אַ). , און R211S (פיגורע 3) און קאַמפּערד זייער הילל קאָואַפישאַנץ צו די פון Hv1 ווילד-טיפּ, ניצן 2GBI ווי אַ רעפֿערענץ. רעשט וו109 איז אויף די זעלבע פּנים פון די S1 אָפּשניט ווי D112 און האט איין עקסטרע כעליקאַל קער ין דער צעל. V109 איז נישט ינוואַלווד אין די ביינדינג פון 2GBI29, מיר געוויינט די V109A מוטאַנט ווי אַ קאָנטראָל (Fig. 3ב). (אַ) סאַגדזשעסטיד הוו1 רעזאַדוז ינוואַלווד אין גואַנידינע דעריוואַט ביינדינג. דאַשט בלוי קורוועס אַרומרינגלען פריער פארגעלייגט זייַט קייטן וואָס ינטעראַקט מיט פאַרשידענע פּאַרץ פון קאַמפּאַונד 2גבי29. טונקל רויט). יעדער פונט רעפּראַזענץ די דורכשניטלעך ינאַבישאַן פון 3 צו 12 מעזשערמאַנץ ± SD V109 ווי אַ נעגאַטיוו קאָנטראָל. די ינסעט כיסטאַגראַמז זענען באשלאסן פון די פיץ רעפּאָרטעד אין סופּפּלעמענטאַרי פיגס 3 און 4. רעפערענץ ה וואַלועס פֿאַר Hv1 WT זענען געוויזן ווי דאַשט שורות. אַסטעריסקס אָנווייַזן סטאַטיסטיש באַטייַטיק דיפעראַנסיז צווישן מוטאַנט און ווט פּאַסידזשיז (פּ 0.05, Fig. 5d,i) ). אויף די אנדערע האַנט, מיוטיישאַן ד123אַ באטייטיק רידוסט די הילל קאָואַפישאַנט פון גבטאַ (פּ 0.05/14). זינט נוטראַלייזינג די אָפּצאָל אין שטעלע 123 אויף ביידע סובוניץ ריזאַלטיד אין אַ שטאַרק ענדערונג אין GBTA ביינדינג קאָאָפּעראַטיווע, בשעת ריווערסינג די אָפּצאָל אויף ביידע סובוניץ האט בלויז אַ קליין ווירקונג, מיר עקסטענדעד די אַנאַליסיס צו אַרייַננעמען בלויז איין סובוניט מיט די ינווערזשאַן קאַנאַל פון אָפּצאָל. דזשענערייטאַד Hv1-לינגקט דימערז מיט D123R סאַבסטיטושאַן אין די C-וואָקזאַל סובוניט (Fig. 5b) און געמאסטן די קאַנסאַנטריישאַן-ענטפער ינאַבישאַן דורך GBTA און 2GBI. פון ווילד-טיפּ Hv1 (פּ 0.05). מיר אויך געפונען אַז אין דער אַוועק פון βME, די הילל קאָואַפישאַנט פון גבטאַ ביינדינג צו די D112E I127C Hv1 דימער איז געווען באטייטיק העכער ווי אַז געמאסטן אין דעם בייַזייַן פון רידוסינג אגענטן (Fig. 6e און Supplementary Fig. 4), ימפּלייינג אַז די D112E מיוטיישאַן. האט נישט אָפּשאַפן די פאַרגרעסערן אין גבטאַ ביינדינג קאָאָפּעראַטיוויטי ריזאַלטינג פון די קרייַז-לינקינג פון סיסטינע 127. די הילל קאָואַפישאַנט פון 2GBI ביינדינג צו D112E, I127C Hv1 דימערס איז אויך נישט באטייטיק אַפעקטאַד דורך די D112E מיוטיישאַן (פיגורע 1).6ד און סאַפּלאַמענטערי פיג. 3). צוזאַמען, די פיינדינגז פֿאָרשלאָגן אַז GBTA ביינדינג איז ענכאַנסט דורך די ינטעראַקשאַן צווישן די ויסווייניקסט ענדס פון S1 פראַגמאַנץ אין שכייניש Hv1 סובוניץ דורך אַטראַקטיוו ילעקטראָוסטאַטיק ינטעראַקשאַנז אָדער דורך די פאָרמירונג פון קאָוואַלענט קייטן צווישן סאַבסטאַטוטאַד סיסטעינז אַללאָסטעריק קאַפּלינג צווישן זייטלעך ינקריסאַז און רעזולטאַטן אין ביינדינג קאָאָפּעראַטיווע. כאָטש די ווירקונג פון אַטראַקטיוו ילעקטראָוסטאַטיק ינטעראַקשאַנז אויף קאָאָפּעראַטיוויטי קענען זיין אַבאַלישט דורך מיוטיישאַן D112E, די ווירקונג פון קאָוואַלענט קייטן קען נישט. אין אונדזער ויספאָרשונג פון די כעמישער פּלאַץ בנימצא פֿאַר ביינדינג גואַנידינע דעריוואַטיווז צו הוו1 טשאַנאַלז, מיר געפֿונען אַז 2-גואַנידינאָטהיאַזאָלעס ווי גבטאַ האָבן אַ סטיפּער קאַנסאַנטריישאַן אָפענגיקייַט ווי 2-גואַנידינאָבענזימידאַזאָלעס (פיגורע 1ק). און מאָנאָמעריק טשאַנאַלז (Fig. 2a,b) און צו די דימעריק קאַנאַל אין וואָס איין סובוניט איז געווען פאַר-געבונדן צו די ינכיבאַטער (Fig. 4) געפירט אונדז צו פאַרענדיקן אַז די ינאַבישאַן פון Hv1 דורך GBTA די קאַמף איז אַ סינערגיסטיק פּראָצעס, און די ביינדינג זייטלעך פון די קאַמפּאַונדז אין די צוויי סאַבוניץ זענען אַלאָסטעריקאַללי קאַפּאַלד. די ופדעקונג אַז GBTA ביינדז צו די אָפֿן קאַנאַל, ווי פריער געוויזן פֿאַר די פֿאַרבונדענע קאַמפּאַונד 2GBI32, סאַגדזשעסץ אַז אַלאָסטעריק קאַפּלינג קענען זיין ספּאַסיפיקלי אַססעססעד אין די עפענען שטאַט. אונדזער קאָאָפּעראַטיווע ביינדינג מאָדעל איז ביכולת צו קוואַנטאַטייטיוולי דיסקרייבז די ינאַבישאַן פון HV1 פון GBTA (Fig. 2C) און דערקלערן די פאַרשידענע יפעקס פון 2GA און GBTA אויף די פאַרפוילן פון די ריפּלייסט פּראָצעס, וואָס שטיצט אונדזער ינטערפּריטיישאַן פון די ביינדינג פּראָצעס. די מאַקסימום בערגל קאָואַפישאַנט אַז קענען זיין אַטשיווד אין אַ אַללאָסטעריק פּראָטעין מיט צוויי ביינדינג זייטלעך (אַזאַ ווי HV1) איז 2.we געמאסטן GBTA צו ביטאַ צו ביטאַ ווילד-טיפּ מיט אַ קאָואַפישאַנט פון 1.31, וואָס געוואקסן צו 1.31, וואָס געוואקסן צו 1.31, וואָס געוואקסן צו 1.31, וואָס געוואקסן צו 1.31, וואָס געוואקסן צו 1.31, וואָס געוואקסן צו 1.31, וואָס געוואקסן צו 1.31, וואָס געוואקסן צו 1.31, וואָס געוואקסן צו 1.31 סינערגיסטיק פריי ענערגיע, די חילוק צווישן די ביינדינג פריי ענערגיעס פון די לאָואַסט און העכסטן אַפפיטי זייטלעך (זען מעטהאָדס), איז 1.3 קייקאַל / בראָדעווקע אין דעם פאַל פון הוו 1 ווילד-טיפּ און 2.7 קקאַל / בראָדעווקע אין דעם פאַל זויערשטאָף צו העמאָגלאָבין איז די מערסט באַרימט און געזונט-געלערנט בייַשפּיל פון די קאַלאַבערייטיוו פּראַסעסאַז 38.פֿאַר מענטשלעך העמאָגלאָבין (אַ טעטרוממער מיט פיר אַלאַסטעריקלי קאַפּאַלד ביינדינג זייטלעך), די בערגל קאָואַפישאַנט ריינדזשיז פון 2.5-3.0, מיט וואַלועס ריינדזשינג פון 1.26 קייקאַל / מאָל, דיפּענדינג אויף יקספּערמענאַל באדינגונגען 38.thus פון גלאבאלע ענערגעטיק פון GBTA ביינדינג צו הוו 1 איז נישט באטייטיק אַנדערש ווי ער איז געווען באטראכט. אין אונדזער סינערדזשי מאָדעל, די ביינדינג פון גבטאַ מאַלאַקיולז צו איין סובוניט רעזולטאַטן אין אַ פאַרגרעסערן אין די ביינדינג קירבות פון די שכייניש סובוניט. מיר גענייגט צו ענדערונגען אין די ינטעראַקשאַנז צווישן Subunits.in צו די ענדערונגען, שכייניש סובוניץ טוישן זייער ביינדינג זייטלעך, ריזאַלטינג אין טייטער GENDING AFFININE.D112 איז געווען פריער געוויזן צו זיין טייל פון די הוו 1 פּרטאָן פּערצענט פּאַטוויי און צו האַנדלען ווי קאָנטרעמאַטיוויט פילטי 27,28. אונדזער רעזולטאַטן ווייַזן אַז סעלעקטיוו פילטערס אין די צוויי הוו 1 סובוניצאַץ זענען אַלאָספּאָריקלי קאַפּאַלד אין די עפֿן שטאַט. פייגער די אַפּפּראָקסימאַטע אָרט פון די GBTA ביינדינג פּלאַץ און די אָרט פון רעזאַדוז ד 123, ד 123, k125 און i127 אויף אַ סכעמאַטיש פון די הוו 1 אויף אַ סכעמאַטיש פון די הוו 1 אויף אַ סכעמאַטיש אויף די קריסטאַל סטרוקטור פון די הוו 1-סיווינס (אַ) סכעמאַטיש פון די הוו 1 ווסד.באַסעד אויף די קריסטאַל סטרוקטור פון די הוו 1 -וויץ טשימעראַ, די כעליקאַל סעגימישע איז געוויזן, די ינפיגיקאַטיאָן, די ינער אָפּשניט מעריז מיט די ס.ג.ם. די פּרעדיקטעד לאָוקיישאַנז פון געבונדן גבטאַ זענען געוויזן ווי גרוי אָוואַלאַק. בלאַקק אַראָוז אָנווייַזן פּאַטווייז ינוואַלווד אין אַללאָסיטאָר קאַפּלינג צווישן ביינדינג זייטלעך צווישן ביינדינג זייטלעך. (ב) סכעמע ספערד אין צוויי פאַרשידענע דימער קאַנפיגיעריישאַנז ווי געזען פון די עקסטראַקטאַלער זייַט פון די מעמבראַנע פלאַך .on די לינקס טאַפליע, די דימער צובינד איז געגרינדעט דורך די S4 העליקס.ראָטאַטיאָן פון די צוויי ווסס. די סעפּאַראַטיאָן פון די ויסווייניקסט ענדס פון די צוויי ס 4 העליסיעד אַראָוז), טראגט די אָרדענונג געוויזן אויף די רעכט. אין דעם רעכט. אין דעם קאַנפיגיעריישאַן, רעזאַדוז דריסטינגז זענען ערלויבט צו קומען נאָענט צוזאַמען. (C) סכעמאַטיש רעפּריזענשאַן פון די סיוויק ווסד אין די דימער קאַנפיגיעריישאַן געפֿונען אין די 4 ג 80 קריסטאַל סטרוקטור. אונדזער רעזולטאַטן ווייַזן אַז די ריפּאַלסיוו ילעקטראָוסטאַטיק ינטעראַקשאַן צווישן רעזאַדו 123 (123 ד / 123 ד / 123 ד אָדער 123 ר / 123 ר) איז פארבונדן מיט אַ "נאָרמאַל" הייך פון גשט שטאַט און שיפץ די ינטעראַקשאַן פון ריפּאַלשאַן צו געצויגן (123 ד / 123 ר) , געוואקסן קוואַפּעריישאַן (Fig. 5G). עס איז געריכט אַז באַזייַטיקונג פון די ריפּאַלסיוו ינטעראַקשאַן מיט אַלאַנינע סאַבסטיטושאַן וואָלט אויך פירן צו געוואקסן קאָאָפּעראַטיטי. דערקלערונג איז אַז די דיסטאַביליזינג ווירקונג פון פּלייסינג הידראָפאָביק רעזאַדוז אין אַ כיידראָפיליק סוויווע קען יקסידז אין די ילימאַניישאַן פון ריפּאַדוז אין די קוילעלדיק רעדוקיביטיוויטי. וואָס איז לעצטנס געמאלדן אַז סאַלוואַנט אַקסעס שטעלע D171 פון Ciona gutis Ci-hv1 (קאָראַספּאַנדינג צו ד 123 אין מענטשלעך הוו 1) איז געוואקסן אויף אַקטאַפיליק סוויווע אין די עפענען שטאַט. טויער פון HV1 טשאַנאַלז איז באַוווסט דורך קייפל טראַנזישאַנז 19,20,26,39,40,41.QUIU ET AL26 געפונען אַז אויף מעמבראַנע דעפּאָוד , נאכגעגאנגען דורך אַ בוילעט יבערגאַנג וואָס ז פּראָטאָנס צו עפענען קאַנדאַקשאַן אין ביידע סובונס פּאַט. די גרויסע ינטעראַקץ פון פלורעסאַנט סיגנאַל איז קאָנסיסטענט מיט דעם בייַזייַן פון ילעקטראָוסטאַטיק ינטעראַקשאַנז צווישן די ד 151 רעזאַדוז פון שכייניש סובוניץ אין די עפֿן פון די קאַנפאָראַליישאַן פון די קאַנפאָראַליישאַן און מעדיאַטעס אָוצעטער קאַפּלינג צווישן GBTA ביינדינג זייטלעך. פודזשיוואַראַ עט על 25 פארגעלייגט אַז די דימער צובינד פון די סיטאָפּלאַסמיק קוילד-שפּול דאָמאַין יקסטענדז אין די מעמבראַנע צו אַנטהאַלטן צוויי S4 העליסעס (Fig. 7 ב די ינטערינע קרייז-פֿאַרבינדונג אַנאַליסיס קאַווערינג די גאנצע ווסד און פאַנגקשאַנאַל אַנאַליסיס פון די געגנט קאַנעקטינג די S4 העליקס און די CCD.in דער אַוועק פון אַ טראַטימראַנע צוואַנטערז AS Grounnect, HV1 טשאַנאַלז, און די קאַנאַל איז מערסטנס פֿאַרמאַכט. דעריבער, דער דיטעקטאַד S4-S4-S4-S4 צובינד קען מסתּמא ריפלעקס די אַוועק-שטאַט סובוניט קאַנפיגיעריישאַן. טערסובוטיווע ינוועלץ פֿאַר די ינוואַלוומאַנט פון S1 און S2 אין די ינאַלוומאַנט פון S1 און S2 אין די טשאַנאַלז אין די עפענען און פארמאכט שטאַטן, אַ געדאַנק קאָנסיסטענט מיט די פיינדינגז פון מאָני עט על. S1 מאָוועס 39 בעשאַס גאַטינג. דאָ, מיר ווייַזן אַז אין די עפענען שטאַט, די עקסטראַסעללאַבולאַר ענדס פון די S1 העלליקס זענען נאָענט גענוג צו שטיצן דירעקט ילאַקטראָוסטאַטיק ינטעראַקשאַנז אַז מעדיאַטע אַלאַספּיקיישאַן מיט עקסטענדעד ס 4 ינטעראַקשאַנז, די S1 כאַבאַץ זענען אויך ווייַט באַזונדער פון יעדער אנדערער צו ינטעראַקט גלייַך. מיט אונדזער פיינדינגז (פיג. 7 ב, רעכט טאַפליע). מיר רעקאָמענדירן דעם קאַנפיגיעריישאַן פֿאַר די קאַנאַל אין די עפענען שטאַט. כאָטש די סיוופּ ענזיים איז געדאַנק צו פונקציאָנירן ווי אַ מאַנאַמער, די קריסטאַל סטרוקטור פון זיין אפגעזונדערט אָדער קאַפּטשערד וסד. די ויסווייניקסט ענדס פון די S1. פֿאַר הוו 1 (פיג. 7c) און סיוויס דימערס סאַגדזשעסץ אַז די ווסדס פון די פּראָטעינס האָבן אַ ינטרינסיק טענדענץ צו פאָרעם אַ צובינד ווו די עקסטראַקטאַלער ענדס פון S1 Interact. די יקערדיק ראָלע פון ​​HV1 אין מרעם צעל אַקטיוואַטיאָן מאכט דעם קאַנאַל אַ אַטראַקטיוו מעדיצין ציל פֿאַר די קאָנטראָל פון זכר גיביקייַט, אַקטאַוויישאַן פון הוו 1 איז געוויזן צו ווערבאַנסט הוו 1 טעטיקייט איז געפֿונען צו זיין פֿאַרבונדן מיט נידעריקער ניצל אין פּאַטיענץ מיט ברוסט 12 אָדער קאָלאָרעקטאַל ראַק 13 און איז געדאַנק צו ביישטייערן צו ב-צעל מאַליגאַנסיעס 11. ברידאַנסער טהעראַפּיוטיקס. די ופדעקן אַז גואַניטוטיאָנסאָלע דעריוואַטיווז קענען פאַרשאַפן קאַנפיואַטיווז קענען פאַרשאַפן קאַנפיואַטיווז קענען פאַרשאַפן קאַנפיניווער עפֿן הוו 1 סובוניט, לידינג צו בינדן ביינדינג קירבות, קען פירן צו דער אַנטוויקלונג פון מער שטאַרק דרוגס טאַרגאַטינג הוו 1 טשאַנאַלז. מאַפּע-דירעקטעד מוטאַגעניססיאָניעסיס פון מענטשלעך HV1 איז געווען פּערפאָרמד מיט נאָרמאַל פּקר טעטשמיסוועס. אין די הוו 1 און 228-273 פון הוו 1 איז געווען ריפּלייסט 1-113 און 240-576. די C- טערמינוס פון איין סאַבוניט איז לינגקט צו די N- טערמינוס פון די רגע סובוניט דורך די GGSGGSGSGSGSGSGSGSGSGSGSGSGSGSGSGSGSGSGSGSGSGSGSGSGSGSGSGSGSGSLEX LINGER.TREMS (Newent Biolabs) און RNA סיוואַלאַבס) און RNA סיוואַלאַבס) און RNA סיוואַלאַבז) און RNA סיוואַלאַבז) און די סינטאַס פון איין סובוניסט איז לינגקט צו די N- טערמינוס פון די 6 ט 7 MMessage Mmachine Moncrite קיט (אַמביאָן) .1-3 טעג איידער עלעקטראָפיסיאָלאָגיאַלאַדזשיקאַל מעזשערמאַנץ, קרנאַ איז ינדזשעקטיד אין קסענאָפּוס אָאָסיטעס (μ ג / אָאָסיטעס פון קסענאָפּוס לאַעוויס (נאַסקאָ) .16 μ ג) .סטאַגע פֿון Eccocyte Bioscience.plowing Rna ינדזשעקשאַן, סעלז זענען מיינטיינד אין די ND96 מיטל מיט 96 מם NACL, 2 מם קקל, 1 מם סוגס, 1 מם פּירוואַט, 100 מם פּירוואַט, 100 מם פּירוואַט, 100 מם פּעאַפּאַמיסין, ph 7.2 18 ° C . 2-גואַנעידינאָ-בענזימידאַזאָלע [1], 2-גואַנעאָדינאָ-בענואַרטינאָ-בענוזשייַזאָלע [2], (4-מעטהיל -1,3-טהיאַזאָל -2-י.ל) גואַנידנע [5], (5-בראָמאָ -4 -מעטההיל -1,3 -טהיאַאַזאָל-2-יל) גואַניאַדינע) [6], עטהיל 2-גואַנידינאָ -5-מעטהיל -1,3 טולבאָקסילאַטע [8], עטהיל 2-גואַנידינאָ -4- מעטאַל-1,3-טהיל -1,3-טהיל -1,3-טהיל -1,3- 5-קאַרבאָקסילאַטע [9] און (2-גואַנידינאָ-4-מעטהיל -1,3-טהיאַזאָל -5-יל) עטאַל אַסאַטייט [7] איז געווען פון מפּ ביאָמעדזשיקאַלס. [4 - (4-טשלאָראָפעניל) -1,3-טהיאַזאָל -2-יל] גואַנידינע [11] און 1- [4-6-דימעטהאָקסיפעניל) -1,3- טהיאַזאָל-2-יל, גואַנידינע [12] איז געווען פֿון מאַטריץ סייאַנטיפיק. טהעסע קאַמפּאַונדז זענען פון די העכסטן ריינקייַט קאמערעללי בנימצא. זיי זענען צעלאָזן אַ 100 מם סטאַקערז 3 און 4 איז סינטאַסייזד אונטן אין מינדסטער 99% ריינקייַט. צו אַ סאַספּענשאַן פון 2-אַמינאָ -4- (טריפלואָראָמעטהיל) איז געווען געפילטערט מיט קראַפטיק סטערינג פֿאַר 4 שעה. דער אָפּרוף געמיש איז קולד צו צימער טעמפּעראַטור און נוטראַלייזד דורך גראַדזשואַל אַדישנאַל (3 × 50 מל), דאַר אין אַ ויוון ( 65 ° C) פֿאַר עטלעכע שעה, און דעמאָלט רעקריסטאַלייזד פון עטאַל אַסאַטייט / נאַפט יטער צו געבן אַ ווייַס האַרט (500 מג, 48%); מפּ 221-222 ° C (ליכט 225-226 ° C) 45; 1h נמר (500 מהז, דמסאָ-ד 6): δ [ppm] = 7.25 (זייער ברייט ס, 4 ה), 7.40 (ד, ע = 8,73 (s, 1 h), 7.92 (ד), 7.92 (ד), 7.92 (ד), 7.92 (ד , 1 ה, דזש = 8.1 הז) .13c נמר (200 מהז, דמסאָ-ד 6): δ = 117.5 (ד, דזש = 3.5 הז), 121.7, 124.6 (j = 124.6 (j = 121.7, 124.6 (j = 272 הז), 126.1 (ק, דזש = 272 הז) = 372 הז), 134.8, 158.4, 175.4, 175.5, 175.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.hrms (Es / Z קאַלקיאַלייטיד Vali1s (M + H) +: 261.0416 : 261.0419. נאַפטהאָ [1,2-ד] Thiazol-2-Amine (300 מג, 1.5 מג, 1.5 ממאָל), סינטאַסייזד ווי פריער דיסקרייבד, איז געווען העאַטעד צו 200 ° C אין אַ בוימל וואַנע אין אַ בוימל וואַנע און 1.0 מל קענען די הייס קאַמפּאַונד איז געווען מוסיף הידראָטשלאָריק זויער געשווינד און דער געמיש איז געווען בעכעסקעם אין די בוימל וואַנע פֿאַר וועגן 2 מינוט, בעשאַס וואָס מאָל רובֿ פון די וואַסער יוואַפּערייטיד. די אָפּרוף געמיש איז געווען קולד צו צימער טעמפּעראַטור און די ריזאַלטיד צימער טעמפּעראַטור און די ריזאַלטיד צימער טעמפּעראַטור און די ריזאַלטיד צימער טעמפּעראַטור און די ריזאַלטיד צימער טעמפּעראַטור און די ריזאַלטיד צימער טעמפּעראַטור און די ריזאַלטיד צימער טעמפּעראַטור און די ריזאַלטיד צימער טעמפּעראַטור און די ריזאַלטיד צימער טעמפּעראַטור און די ריזאַלטיד צימער טעמפּעראַטור און די ריזאַלטיד צימער טעמפּעראַטור און די ריזאַלטיד צימער טעמפּעראַטור און די ריזאַלטיד צימער טעמפּעראַטור און די ריזאַלטיד צימער טעמפּעראַטור און די ריזאַלטיד צימער טעמפּעראַטור און די ריזאַלטיד צימער טעמפּעראַטור און די ריזאַלטינג סאַלידאַפייד מאַטעריאַלס איז געווען צעבראכן אין קליין ברעקלעך און געוואשן מיט וואַסער צו צושטעלן אַ בלאַס געל אַמאָרפאַס האַרט. (38 מג, 10%) מפּ 246-250 ° C; 1h נמר (500 מהז, דמסאָ-ד 6, ד 2 o): δ [ppm] = 7.59 (t, j = 8,66 (7.66 הז), 7.66 הז), 7,500 הס), 7.77 (ד, 7.3 הז), 7.77 , דזש = 8.6 הז), 7.89 (ד, 1 ה, דזש = 8.6 הז), 8.6 הז), 8,6 הז), 8,6 הז), 8,6 הז), 8,02 (D, j = 8.35 (d, j = j = 8.3 הז) .13 CMR (150 מהז, דמסאָ-ד 6): δ = 119.9, 122.7, 123.4, 123.5, 126.5, 128,7, 160,7, 169,1, 169,1, 169,1, 169,1: עם , געפֿונען: 243.0704. פּראָטאָן קעראַנץ זענען געמאסטן אין ינערלעך און פונדרויסנדיק פּאַטשאַז פון אָאָסיטעס יקספּרעסינג פאַרשידענע קאַנסטראַקץ ניצן אַן אַקסאַפּאַטש 200 ב (מאָלעקולאַר דעוויסעס) מיט Pllampelloc etta) PH 6.0 מיט טיי הידראָקסידע .אַלל. אפגעזאגט פון 22 ± 2 ° סי. ) און ערידזשאַנאַלאַב) און ערידזשאַנעל). סאַלושאַנז מיט פאַרשידן קאַנסאַנטריישאַנז פון הוו 1 ינכיבאַטער און אין עטלעכע קאַסעס 10 מם β מער זענען ינטראָודוסט אין די וואַנע דורך ערלעכקייט דורך ערלעכקייט דורך ערלעכקייט דורך ערלעכקייט דורך ערלעכקייט דורך ערלעכקייט דורך ערלעכקייט דורך ערלעכקייט דורך ערלעכקייט דורך ערלעכקייט דורך ערלעכקייט דורך ערלעכקייט דורך ערלעכקייט דורך ערלעכקייט דורך ערלעכקייט דורך ערלעכקייט דורך ערלעכקייט דורך ערלעכקייט דורך ערלעכקייט דורך ערלעכקייט דורך ערלעכקייט דורך ערלעכקייט דורך ערלעכקייט דורך ערלעכקייט דורך ערלעכקייט דורך ערלעכקייט דורך ערלעכקייט דורך ערלעכקייט דורך ערלעכקייט דורך ערלעכקייט דורך ערלעכקייט דורך ערלעכקייט דורך ערלעכקייט דורך ערלעכקייט דורך ערלעכקייט דורך ערלעכקייט דורך ערלעכקייט דורך ערלעכקייט דורך ערלעכקייט דורך ערלעכקייט דורך ערלעכקייט דורך ערלעכקייט דורך ערלעכקייט דורך ערלעכקייט דורך ערלעכקייט דורך ערלעכקייט דורך ערלעכקייט דורך ערלעכקייט דורך ערלעכקייט דורך ערלעכקייט דורך ערלעכקייט דורך ערלעכקייט דורך ערלעכקייט דורך ערלעכקייט דורך ערלעכקייט דורך ערלעכקייט דורך ערלעכקייט דורך ערלעכקייט דורך ערלעכקייט דורך ערלעכקייט דורך ערלעכקייט דורך אַ VC-6 פּערפיוזשאַן וואַלוו סיסטעם (וואַרנער ינסטרוקטיאָנס מיט פאַרשידן קאַנסאַנטריישאַנז פון הוו 1 און אין עטלעכע קאַסעס 10 מם און טראַנזיסטאָר- טראַנזיסטאָר לאָגיק) סיגנאַלז. אַדרעסדיק פּערפוסיאָן יקספּעראַמאַנץ זענען דורכגעקאָכט מיט אַ מאַלטי-טוב פּאַרטיאָן בלייַער (אָטאַמייט דיאַמעטער עקספּרעס.) מיט אַ לאַטע פּייפּט אין פראָנט פון אַ לאַטע פּייפּוינטמאַנט. +120 MV דעפּאָאָלאַריזינג דויפעק. געץ מעזשערמאַנץ זענען דורכגעקאָכט ווי ביז אַהער דיסקרייבד 18,20.3..20. די קאַנסאַנטריישאַן פון די גוואָונישאַן פון די GV מיט דעם בערגל יקווייזשאַן: ווו [i] איז די קאַנסאַנטריישאַן פון ינכיבאַטער איך און ה איז דער בערגל קאָואַפישאַנט. צו רעכענען די בערגל קאָואַפישאַנט, יקווייזשאַן (2) איז ריעריינדזשד ווי: