ഓപ്പൺ എച്ച്വി1 പ്രോട്ടോൺ ചാനലിൻ്റെ ഇൻ്റർസബ്യൂണിറ്റ് ഇൻ്റർഫേസിൻ്റെ ചോദ്യം ചെയ്യൽ.

Nature.com സന്ദർശിച്ചതിന് നന്ദി.നിങ്ങൾ ഉപയോഗിക്കുന്ന ബ്രൗസർ പതിപ്പിന് CSS-ന് പരിമിതമായ പിന്തുണയേ ഉള്ളൂ.മികച്ച അനുഭവത്തിനായി, അപ്ഡേറ്റ് ചെയ്ത ബ്രൗസർ (അല്ലെങ്കിൽ Internet Explorer-ൽ അനുയോജ്യത മോഡ് ഓഫാക്കുക) ഉപയോഗിക്കാൻ ഞങ്ങൾ ശുപാർശ ചെയ്യുന്നു. തുടർച്ചയായ പിന്തുണ, ഞങ്ങൾ ശൈലികളും JavaScript ഇല്ലാതെ സൈറ്റ് പ്രദർശിപ്പിക്കും. Hv1 വോൾട്ടേജ്-ഗേറ്റഡ് പ്രോട്ടോൺ ചാനൽ രണ്ട് വോൾട്ടേജ് സെൻസിംഗ് ഡൊമെയ്‌നുകൾ (VSDs) അടങ്ങുന്ന ഒരു ഡൈമെറിക് കോംപ്ലക്‌സാണ്, അവയിൽ ഓരോന്നിനും ഗേറ്റഡ് പ്രോട്ടോൺ പെർമിയേഷൻ പാത്ത്‌വേ അടങ്ങിയിരിക്കുന്നു. ഡൈമറൈസേഷൻ നിയന്ത്രിക്കുന്നത് സൈറ്റോപ്ലാസ്മിക് കോയിൽഡ്-കോയിൽ ഡൊമെയ്‌നാണ്. അടച്ച അവസ്ഥയിൽ നിന്ന് പരിവർത്തനം. രണ്ട് വിഎസ്‌ഡികളിലെയും തുറന്ന അവസ്ഥ സഹകരണത്തോടെയാണ് സംഭവിക്കുന്നത്; എന്നിരുന്നാലും, അടിസ്ഥാന സംവിധാനങ്ങളെക്കുറിച്ച് വളരെക്കുറച്ചേ അറിയൂ. അലോസ്റ്റെറിക് പ്രക്രിയകളിൽ ഇൻ്റർസബ്യൂണിറ്റ് ഇൻ്റർഫേസുകൾ ഒരു പ്രധാന പങ്ക് വഹിക്കുന്നു; എന്നിരുന്നാലും, തുറന്ന Hv1 ചാനലുകളിൽ അത്തരം ഇൻ്റർഫേസുകൾ തിരിച്ചറിഞ്ഞിട്ടില്ല. 2-ഗ്വാനിഡിനോത്തിയാസോൾ ഡെറിവേറ്റീവുകൾ രണ്ട് Hv1 VSD-കളെ ഒരു സഹകരണ രീതിയിൽ തടയുന്നുവെന്നും തുറന്ന ഉപയൂണിറ്റുകൾക്കിടയിൽ അലോസ്റ്റെറിക് കപ്ലിംഗിനായി ഈ സംയുക്തങ്ങളിലൊന്ന് ഒരു അന്വേഷണമായി ഉപയോഗിക്കുമെന്നും ഇവിടെ ഞങ്ങൾ തെളിയിക്കുന്നു. എക്സ്ട്രാ സെല്ലുലാർ വിഎസ്‌ഡിയുടെ ആദ്യ ട്രാൻസ്‌മെംബ്രേൻ ശകലത്തിൻ്റെ അവസാനം, ബൈൻഡിംഗ് സൈറ്റുകൾക്കിടയിൽ ബന്ധിപ്പിക്കുന്ന ഒരു ഇൻ്റർസബ്യൂണിറ്റ് ഇൻ്റർഫേസ് ഉണ്ടാക്കുന്നു, അതേസമയം കോയിൽഡ്-കോയിൽ ഡൊമെയ്ൻ ഈ പ്രക്രിയയിൽ നേരിട്ട് ഉൾപ്പെട്ടിട്ടില്ല. ചാനലിൻ്റെ പ്രോട്ടോൺ-സെലക്ടീവ് ഫിൽട്ടർ ബ്ലോക്കർ-ബൈൻഡിംഗ് സഹകരണത്തെ നിയന്ത്രിക്കുന്നു എന്നതിൻ്റെ ശക്തമായ തെളിവുകളും ഞങ്ങൾ കണ്ടെത്തി. . വോൾട്ടേജ്-ഗേറ്റഡ് പ്രോട്ടോൺ ചാനലുകൾ ഫൈറ്റോപ്ലാങ്ക്ടൺ മുതൽ മനുഷ്യർ വരെയുള്ള വിവിധ ജീവജാലങ്ങളിൽ പ്രധാന പങ്ക് വഹിക്കുന്നു Hv1 ആണ്, ഇത് HVCN1 ജീൻ2,3.Hv1 (അതായത് VSOP) ൻ്റെ ഉൽപ്പന്നമാണ്. ബി സെൽ പ്രൊലിഫെറേഷൻ4, റിയാക്ടീവ് ഓക്സിജൻ സ്പീഷീസ് ഉൽപ്പാദനം എന്നിവയിൽ സഹജമായ രോഗപ്രതിരോധ സംവിധാനത്തിലൂടെ 5,6,7,8, ശുക്ലകോശം എന്നിവയിൽ ഒരു പങ്കുണ്ട്. ചലനാത്മകത9, എയർവേ ഉപരിതല ദ്രാവകത്തിൻ്റെ പിഎച്ച് നിയന്ത്രണം10. ബി-സെൽ മാലിഗ്നൻസി 4,11, സ്തന, വൻകുടൽ അർബുദങ്ങൾ 12,13 എന്നിങ്ങനെയുള്ള കാൻസർ തരങ്ങളിൽ അമിതമായി പ്രകടമാകുന്നതിൽ ഈ ചാനൽ ഉൾപ്പെടുന്നു. അമിതമായ എച്ച്വി1 പ്രവർത്തനം കാൻസർ കോശങ്ങളുടെ മെറ്റാസ്റ്റാറ്റിക് സാധ്യത വർദ്ധിപ്പിക്കുന്നതായി കണ്ടെത്തി 11, 12 .മസ്തിഷ്കത്തിൽ, Hv1 പ്രകടിപ്പിക്കുന്നു മൈക്രോഗ്ലിയ വഴി, അതിൻ്റെ പ്രവർത്തനം ഇസ്കെമിക് സ്ട്രോക്കിൻ്റെ മാതൃകകളിൽ മസ്തിഷ്ക ക്ഷതം വർദ്ധിപ്പിക്കുന്നതായി കാണിക്കുന്നു. Hv1 പ്രോട്ടീനിൽ വോൾട്ടേജ് സെൻസിംഗ് ഡൊമെയ്ൻ (VSD) അടങ്ങിയിരിക്കുന്നു, അതിൽ S1 മുതൽ S414 വരെ എന്ന് വിളിക്കപ്പെടുന്ന നാല് ട്രാൻസ്‌മെംബ്രെൻ സെഗ്‌മെൻ്റുകൾ അടങ്ങിയിരിക്കുന്നു. VSD വോൾട്ടേജ്-ഗേറ്റഡ് Na+, K+, Ca2+ ചാനലുകളുടെയും CiVSP-യിൽ നിന്നുള്ള വോൾട്ടേജ് സെൻസിറ്റീവ് ഫോസ്ഫേറ്റസുകളുടെയും അനുബന്ധ ഡൊമെയ്‌നുകളോട് സാമ്യമുള്ളതാണ്. Ciona gutis15. ഈ മറ്റ് പ്രോട്ടീനുകളിൽ, S4-ൻ്റെ C-ടെർമിനസ് ഒരു എഫക്റ്റർ ഘടകം, പോർ ഡൊമെയ്ൻ അല്ലെങ്കിൽ എൻസൈം എന്നിവയുമായി ഘടിപ്പിച്ചിരിക്കുന്നു. Hv1-ൽ, സ്തരത്തിൻ്റെ സൈറ്റോപ്ലാസ്മിക് വശത്ത് സ്ഥിതി ചെയ്യുന്ന കോയിൽഡ്-കോയിൽ ഡൊമെയ്‌നുമായി (CCD) S4 ബന്ധിപ്പിച്ചിരിക്കുന്നു. .ചാനൽ രണ്ട് വിഎസ്‌ഡികൾ അടങ്ങുന്ന ഒരു ഡൈമെറിക് കോംപ്ലക്‌സാണ്, ഓരോന്നിനും ഗേറ്റഡ് പ്രോട്ടോൺ പെർമിയേഷൻ പാത്ത്‌വേ16,17,18 അടങ്ങിയിരിക്കുന്നു. ഈ രണ്ട് എച്ച്‌വി1 സബ്‌യൂണിറ്റുകളും 19,20,21,22 സഹകരണത്തോടെ തുറക്കുന്നതായി കണ്ടെത്തി, ഇത് അലോസ്റ്റെറിക് കപ്ലിംഗും ഇൻ്റർ-സബ്യൂണിറ്റ് ഇൻ്ററാക്ഷനുകളും പ്ലേ ചെയ്യുന്നുവെന്ന് നിർദ്ദേശിക്കുന്നു. ഗേറ്റിംഗ് പ്രക്രിയയിൽ ഒരു പ്രധാന പങ്ക് വഹിക്കുന്നു. രണ്ട് ഒറ്റപ്പെട്ട ഡൊമെയ്‌നുകളുടെ ക്രിസ്റ്റൽ ഘടനകൾ ലഭ്യമായതിനാൽ കോയിൽഡ് കോയിൽ ഡൊമെയ്‌നിനുള്ളിലെ ഉപയൂണിറ്റുകൾ തമ്മിലുള്ള ഇൻ്റർഫേസ് നന്നായി നിർവചിക്കപ്പെട്ടിട്ടുണ്ട്. മറുവശത്ത്, മെംബ്രണിനുള്ളിലെ VSD-കൾ തമ്മിലുള്ള ഇൻ്റർഫേസ് അല്ല നന്നായി മനസ്സിലാക്കിയിട്ടുണ്ട്. Hv1-CiVSP ചിമെറിക് പ്രോട്ടീൻ്റെ ക്രിസ്റ്റൽ ഘടന ഈ ഇൻ്റർഫേസിനെക്കുറിച്ചുള്ള വിവരങ്ങൾ നൽകുന്നില്ല, കാരണം ക്രിസ്റ്റലൈസ്ഡ് ചാനൽ കോംപ്ലക്‌സിൻ്റെ ട്രൈമെറിക് ഓർഗനൈസേഷൻ നേറ്റീവ് Hv1 CCD-യെ യീസ്റ്റ് ല്യൂസിൻ സിപ്പർ GCN424 ഉപയോഗിച്ച് മാറ്റിസ്ഥാപിക്കുന്നതിലൂടെ ഉണ്ടാകാം. Hv1 ചാനലിൻ്റെ ഉപയൂണിറ്റ് ഓർഗനൈസേഷനെക്കുറിച്ചുള്ള ഒരു സമീപകാല പഠനം നിഗമനം ചെയ്തു, ദ്വിതീയ ഘടനയെ ഗുരുതരമായി തടസ്സപ്പെടുത്താതെ രണ്ട് S4 ഹെലിസുകൾ CCD-യിലേക്ക് പരിവർത്തനം ചെയ്യപ്പെടുന്നു, അതിൻ്റെ ഫലമായി മെംബ്രണിൽ നിന്ന് ആരംഭിച്ച് സൈറ്റോപ്ലാസ്മിലേക്ക് പ്രൊജക്റ്റ് ചെയ്യുന്ന നീണ്ട ഹെലിസുകൾ ഉണ്ടാകുന്നു. സിസ്റ്റൈൻ ക്രോസ്ലിങ്കിംഗ് വിശകലനത്തെ അടിസ്ഥാനമാക്കി, S4 സെഗ്‌മെൻ്റിൽ Hv1 VSD-കൾ പരസ്പരം ബന്ധപ്പെടണമെന്ന് ഈ പഠനം നിർദ്ദേശിക്കുന്നു. എന്നിരുന്നാലും, മറ്റ് പഠനങ്ങൾ VSD-കൾക്കിടയിൽ ഇതര ഇൻ്റർഫേസുകൾ നിർദ്ദേശിച്ചിട്ടുണ്ട്. ഈ ഇൻ്റർഫേസുകളിൽ S1 സെഗ്‌മെൻ്റുകൾ 17, 21, 26, S2 സെഗ്‌മെൻ്റിൻ്റെ പുറംഭാഗങ്ങൾ 21 എന്നിവ ഉൾപ്പെടുന്നു. ഈ പഠനങ്ങളുടെ ഫലങ്ങൾ, ഗേറ്റിംഗ് പ്രക്രിയയുമായി ബന്ധപ്പെട്ട് വിഎസ്ഡികൾ തമ്മിലുള്ള അലോസ്റ്റെറിക് കപ്ലിംഗ് പരിശോധിച്ചു, ഇത് അടച്ചതും തുറന്നതുമായ അവസ്ഥകളെ ആശ്രയിച്ചിരിക്കുന്നു, കൂടാതെ വിഎസ്ഡികൾ തമ്മിലുള്ള ഇൻ്റർഫേസ് അനുരൂപീകരണത്തിലെ വ്യത്യസ്ത സംസ്ഥാന മാറ്റങ്ങളിൽ വ്യത്യാസപ്പെടാം. ഇവിടെ, 2-ഗ്വാനിഡിനോത്തിയാസോൾ Hv1 ചാനലുകളെ രണ്ട് ഓപ്പൺ വിഎസ്‌ഡികളുമായി സംയോജിപ്പിച്ച് തടയുന്നതായി ഞങ്ങൾ കണ്ടെത്തി, കൂടാതെ ഓപ്പൺ സ്റ്റേറ്റിലെ ഉപയൂണിറ്റുകൾ തമ്മിലുള്ള പ്രതിപ്രവർത്തനം അന്വേഷിക്കാൻ സംയുക്തങ്ങളിലൊന്നായ 2-ഗുവാനിഡിനോബെൻസോത്തിയാസോൾ (ജിബിടിഎ) ഉപയോഗിച്ചു. ഇൻ്റർഫേസ്.ജിബിടിഎ ബൈൻഡിംഗ് കർവ് ഒരു ക്വാണ്ടിറ്റേറ്റീവ് മോഡൽ വഴി നന്നായി വിവരിക്കാൻ കഴിയുമെന്ന് ഞങ്ങൾ കണ്ടെത്തി, അതിൽ ഇൻഹിബിറ്ററിനെ ഒരു ഉപയൂണിറ്റിലേക്ക് ബന്ധിപ്പിക്കുന്നത് അടുത്തുള്ള ഉപയൂണിറ്റിൻ്റെ ബൈൻഡിംഗ് അഫിനിറ്റിയിൽ വർദ്ധനവിന് കാരണമാകുന്നു. ചാനൽ 27, 28 ഉം ഗ്വാനിഡിൻ ഡെറിവേറ്റീവ് ബൈൻഡിംഗ് സൈറ്റ് 29 ൻ്റെ ഭാഗവും GBTA ബൈൻഡിംഗ് സഹകരണത്തെ നിയന്ത്രിക്കുന്നു. CCD S4 വിഭാഗത്തിൽ നിന്ന് CCD വേർതിരിക്കുന്ന Hv1 ഡൈമറിൽ സഹകരണ ബൈൻഡിംഗ് നിലനിർത്തുന്നുവെന്ന് ഞങ്ങൾ കാണിക്കുന്നു, ഇത് CCD-യിലെ ഇൻ്റർസബ്യൂണിറ്റ് ഇൻ്റർഫേസ് നേരിട്ട് അല്ല എന്ന് നിർദ്ദേശിക്കുന്നു. GBTA-ബൈൻഡിംഗ് സൈറ്റുകൾക്കിടയിൽ അലോസ്റ്റെറിക് കപ്ലിംഗ് മധ്യസ്ഥമാക്കുക. വിപരീതമായി, S1 ശകലം ഉപയൂണിറ്റുകൾക്കിടയിലുള്ള ഇൻ്റർഫേസിൻ്റെ ഭാഗമാണെന്ന് ഞങ്ങൾ കണ്ടെത്തുകയും ഡൈമറിൻ്റെ മധ്യഭാഗത്ത് നിന്ന് അകലെ S4 ഹെലിക്‌സിൻ്റെ എക്‌സ്‌ട്രാ സെല്ലുലാർ അറ്റത്തോടുകൂടിയ അടുത്തുള്ള VSD-കളുടെ ക്രമീകരണം നിർദ്ദേശിക്കുകയും ചെയ്യുന്നു. S1 ശകലം തുറന്ന നിലയിലായിരിക്കണം. Hv1-ൻ്റെ ചെറിയ മോളിക്യൂൾ ഇൻഹിബിറ്ററുകൾ കാൻസർ വിരുദ്ധ മരുന്നുകളായും ന്യൂറോ പ്രൊട്ടക്റ്റീവ് ഏജൻ്റുകളായും ഉപയോഗപ്രദമാണ്. എന്നിരുന്നാലും, ഇന്നുവരെ, കുറച്ച് സംയുക്തങ്ങൾക്ക് ചാനലിനെ തടയാൻ കഴിഞ്ഞിട്ടുണ്ട്. അവയിൽ 2-ഗുവാനിഡിനോബെൻസിമിഡാസോൾ (2GBI, സംയുക്തം [1] ചിത്രത്തിൽ 1a) കൂടാതെ അതിൻ്റെ ഡെറിവേറ്റീവുകളും ചാനലിലൂടെയുള്ള പ്രോട്ടോണുകളുടെ VSD29,32 പെർമിഷൻ തടയുന്നതായി കണ്ടെത്തി. അത്തരം സംയുക്തങ്ങളുടെ ബൈൻഡിംഗ് രണ്ട് തുറന്ന ഉപയൂണിറ്റുകളിൽ സ്വതന്ത്രമായി സംഭവിക്കുന്നതായി കരുതപ്പെടുന്നു. 200 μM (ചിത്രം 1b) സാന്ദ്രതയിൽ പരീക്ഷിച്ചപ്പോൾ Hv1 2GBI പോലെ തന്നെ ഫലപ്രദമായി തടയുന്നതായി മുമ്പ് കാണിച്ചിരുന്നു (ചിത്രം 1b). ഞങ്ങൾ മറ്റ് തിയാസോൾ ഡെറിവേറ്റീവുകൾ പരിശോധിച്ചു, അവയിൽ ചിലത് GBTA-യെക്കാൾ സമാനമോ അല്ലെങ്കിൽ കൂടുതൽ ശക്തിയോ ഉള്ള ചാനലിനെ തടഞ്ഞതായി കണ്ടെത്തി (ചിത്രം 1, അനുബന്ധം ടെക്സ്റ്റ്).നാലു തയാസോൾ ഡെറിവേറ്റീവുകളുടെ (ജിബിടിഎയും സംയുക്തങ്ങളും [3], [6], [11], ചിത്രം 1 സി) കോൺസൺട്രേഷൻ റെസ്പോൺസ് കർവുകൾ ഞങ്ങൾ നിർണ്ണയിച്ചു, അവ 2ജിബിഐയേക്കാൾ കുത്തനെയുള്ളതാണെന്ന് കണ്ടെത്തി. ദി ഹിൽ കോഫിഫിഷ്യൻ്റ്സ് (എച്ച്) തിയാസോൾ ഡെറിവേറ്റീവുകളുടെ പരിധി 1.109 ± 0.040 മുതൽ 1.306 ± 0.033 വരെയാണ് (ചിത്രം. 1c, സപ്ലിമെൻ്ററി ചിത്രം. 1). വിപരീതമായി, 2GBI-യുടെ ഹിൽ കോഫിഫിഷ്യൻ്റ് 0.975 ± 0.024 29 ആയിരുന്നു, ചിത്രം 2a, അനുബന്ധ ചിത്രം 1). 1-ന് മുകളിലുള്ള ഒരു ഹിൽ കോഫിഫിഷ്യൻ്റ് ബൈൻഡിംഗ് സഹകരണത്തെ സൂചിപ്പിക്കുന്നു. കാരണം ഓരോ Hv1 ഉപയൂണിറ്റിയും ഉണ്ട്. ബൈൻഡിംഗ് സൈറ്റ്,29,32, ഒരു ഉപയൂണിറ്റുമായി ഒരു തയാസോൾ ഡെറിവേറ്റീവിനെ ബന്ധിപ്പിക്കുന്നത് രണ്ടാമത്തെ ഇൻഹിബിറ്റർ തന്മാത്രയെ അടുത്തുള്ള ഉപയൂണിറ്റുമായി ബന്ധിപ്പിക്കുന്നത് വർദ്ധിപ്പിക്കുമെന്ന് ഞങ്ങൾ ന്യായവാദം ചെയ്തു. ജിബിടിഎ ഏറ്റവും ഉയർന്ന ഹിൽ കോഫിഫിഷ്യൻ്റ് ഉള്ള ടെസ്റ്റ് സംയുക്തമായിരുന്നു. അതിനാൽ, ഞങ്ങൾ ഈ സംയുക്തം തിരഞ്ഞെടുത്തു. ബൈൻഡിംഗ് സിനർജിയുടെ മെക്കാനിസം കൂടുതൽ പഠിക്കുകയും റഫറൻസ് നെഗറ്റീവ് നിയന്ത്രണമായി 2GBI ഉപയോഗിക്കുകയും ചെയ്യുന്നു. (എ) ടെസ്റ്റ് സംയുക്തങ്ങൾ: [1] റഫറൻസ് Hv1 ഇൻഹിബിറ്റർ 2-ഗ്വാനിഡിനോ-ബെൻസിമിഡാസോൾ (2GBI).[2] 2-ഗ്വാനിഡിനോ-ബെൻസോത്തിയാസോൾ (GBTA), [3] (5-trifluoromethyl-1,3-benzothiazol-2-yl)guanidine, [4] naphtho[1,2-d][1, 3] Thiazol-2-yl -guanidine, [5](4-methyl-1,3-thiazol-2-yl)guanidine, [6](5-bromo-4-methyl-1,3-thiazol- 2-yl)guanidine, [7] ഫാമോടിഡിൻ, [8] 2-ഗ്വാനിഡിനോ-5-മീഥൈൽ-1,3-തിയാസോൾ-4-കാർബോക്‌സിലിക് ആസിഡ് എഥൈൽ ഈസ്റ്റർ, [9] 2-ഗ്വാനിഡിനോ-4-മീഥൈൽ എഥൈൽ-1,3-തിയാസോൾ-5-കാർബോക്‌സൈലേറ്റ്, [10 ](2-guanidino-4-methyl-1,3-thiazol-5-yl)ethyl acetate, [11]1-[4-(4 -Chlorophenyl)-1,3-thiazol-2-yl]guanidine, [ 12]1-[4-(3,4-dimethoxyphenyl)-1,3-thiazol-2-yl]guanidine .(b) സൂചിപ്പിച്ചിരിക്കുന്ന ഗ്വാനിഡിനോത്തിയാസോളുകളും റഫറൻസ് സംയുക്തമായ 2GBI (നീല-പച്ച ബാറുകൾ) മനുഷ്യ Hv1 പ്രവർത്തനത്തെ തടയുന്നു. .Hv1 പ്രോട്ടോൺ വൈദ്യുതധാരകൾ -80 mV മുതൽ +120 mV വരെയുള്ള ഡിപോളറൈസേഷനുള്ള പ്രതികരണമായി സെനോപസ് ഓസൈറ്റുകളുടെ ഇൻസൈഡ്-ഔട്ട് ഫലകങ്ങളിൽ അളന്നു. ഓരോ ഇൻഹിബിറ്ററും 200 μM സാന്ദ്രതയിൽ ബാത്ത് ചേർത്തു .ഡാറ്റ ശരാശരി ±SEM (n≥4) ആണ്.(c) സംയുക്തങ്ങൾ [2], [3], [6] കൂടാതെ [11] മനുഷ്യ Hv1 ൻ്റെ കോൺസൺട്രേഷൻ-ആശ്രിത ഇൻഹിബിഷൻ.ഓരോ പോയിൻ്റും 3 ൻ്റെ ശരാശരി ഇൻഹിബിഷൻ ± SD പ്രതിനിധീകരിക്കുന്നു. 15 അളവുകൾ വരെ. സപ്ലിമെൻ്ററി ടേബിൾ 1-ൽ റിപ്പോർട്ട് ചെയ്‌തിരിക്കുന്ന വ്യക്തമായ Kd മൂല്യങ്ങൾ ലഭിക്കാൻ ഉപയോഗിക്കുന്ന ഒരു ഹിൽ ഫിറ്റ് ആണ് ലൈൻ. സപ്ലിമെൻ്ററി ചിത്രം 1-ൽ റിപ്പോർട്ട് ചെയ്‌തിരിക്കുന്ന ഫിറ്റുകളിൽ നിന്നാണ് ഹിൽ ഗുണകങ്ങൾ നിർണ്ണയിക്കുന്നത്: h(1) = 0.975 ± 0.024 h(2) = 1.306 ± 0.033, h(3) = 1.25 ± 0.07, h (6) = 1.109 ± 0.040, h (11) = 1.179 ± 0.036 (രീതികൾ കാണുക). (a,b) സംയുക്തങ്ങൾ 2GBI, GBTA എന്നിവ ഏകാഗ്രത-ആശ്രിത രീതിയിൽ ഡൈമെറിക്, മോണോമെറിക് Hv1 എന്നിവയെ തടഞ്ഞു. ഓരോ പോയിൻ്റും 3 മുതൽ 8 വരെ അളവുകളുടെ ശരാശരി ഇൻഹിബിഷൻ ± SD യെ പ്രതിനിധീകരിക്കുന്നു, കർവ് ഒരു ഹിൽ ഫിറ്റാണ്. ഹിൽ കോഫിഫിഷ്യൻ്റ്സ് (h) കാണിക്കുന്നു ഇൻസെറ്റ് ഹിസ്റ്റോഗ്രാമുകൾ സപ്ലിമെൻ്ററി ഫിഗ്സ് 3-ലും 4-ലും റിപ്പോർട്ട് ചെയ്തിട്ടുള്ള ഫിറ്റ്സിൽ നിന്നാണ് നിർണ്ണയിച്ചിരിക്കുന്നത്. (എ)-ൽ കാണിച്ചിരിക്കുന്ന ജിബിടിഎയുടെ കോൺസൺട്രേഷൻ പ്രതികരണം ചിത്രം 1 സി-ൽ കാണിച്ചിരിക്കുന്നതിന് സമാനമാണ്. പ്രത്യക്ഷമായ കെഡി മൂല്യങ്ങൾക്കായി സപ്ലിമെൻ്ററി ടേബിൾ 1 കാണുക.(സി) മോഡലിംഗ് ജിബിടിഎയെ ഡൈമെറിക് എച്ച്വി1-ലേക്കുള്ള സഹകരണ ബൈൻഡിംഗ്. സോളിഡ് ബ്ലാക്ക് ലൈൻ സമവാക്യം (6) മുഖേനയുള്ള പരീക്ഷണാത്മക ഡാറ്റയെ പ്രതിനിധീകരിക്കുന്നു, ഇത് (ഡി) ൽ കാണിച്ചിരിക്കുന്ന ബൈൻഡിംഗ് മോഡലിനെ വിവരിക്കുന്നു. യഥാക്രമം ഒന്നും രണ്ടും ബൈൻഡിംഗ് ഇവൻ്റുകളുടെ ഡിസോസിയേഷൻ സന്തുലിത വക്രങ്ങൾ (ഉപ 1: OO + B ⇄ BO*, Kd1 = 290 ± 70 μM; ഉപ 2: BO* + B ⇄ B*O*, Kd2 = 29.3 ± 2.5 ).(d) Hv1 ബ്ലോക്കിൻ്റെ നിർദ്ദിഷ്ട മെക്കാനിസത്തിൻ്റെ സ്കീമാറ്റിക് ഡയഗ്രം. GBTA യുടെ കാര്യത്തിൽ, ഒരു തുറന്ന ഉപയൂണിറ്റുമായി ബന്ധിപ്പിക്കുന്നത് അടുത്തുള്ള ഓപ്പൺ സബ്യൂണിറ്റിൻ്റെ (Kd2 0.05) കുറവ് ഞങ്ങൾ കണ്ടെത്തി. രണ്ട് ഉപയൂണിറ്റുകൾ ഒരുമിച്ച് പ്രധാനമാണ്, എന്നാൽ ജിബിടിഎ ബൈൻഡിംഗ് സൈറ്റുകൾക്കിടയിൽ ഇൻ്റർസബ്യൂണിറ്റ് അലോസ്റ്റെറിക് കപ്ലിംഗിന് സിസിഡി നേരിട്ട് മധ്യസ്ഥത വഹിക്കുന്നില്ല. (എ) സൈറ്റോപ്ലാസ്മിക് കോയിൽഡ്-കോയിൽ ഡൊമെയ്ൻ (നീല അമ്പടയാളങ്ങൾ) മധ്യസ്ഥമാക്കിയ ഇൻ്റർസബ്യൂണിറ്റ് കപ്ലിംഗിനെ തടസ്സപ്പെടുത്താൻ രൂപകൽപ്പന ചെയ്‌തിരിക്കുന്ന S4-ൻ്റെ ആന്തരിക അറ്റത്ത് ട്രൈഗ്ലൈസിൻ മ്യൂട്ടേഷനുള്ള Hv1 ഡൈമറിൻ്റെ സ്‌കീമാറ്റിക് ഡയഗ്രം.(b) Hv1 ഡൈമറുകളുടെയും ലിഗേഷൻ ഡൈമറുകളുടെയും സ്‌കീമാറ്റിക് പ്രാതിനിധ്യം ഉപയൂണിറ്റുകൾ (നീല അമ്പടയാളങ്ങൾ) തമ്മിലുള്ള സംയോജനത്തിൽ ഉൾപ്പെട്ടിരിക്കുന്ന S1 ശകലങ്ങൾ പരിശോധിക്കുന്നതിനായി രൂപകൽപ്പന ചെയ്‌ത മ്യൂട്ടേഷനുകൾ.(c-h) 2GBI (സിയാൻ), GBTA (കടും ചുവപ്പ്) എന്നിവ ഒരു ഏകാഗ്രതയെ ആശ്രയിച്ചുള്ള നിർമ്മിതികളെ തടയുന്നു. ഓരോ പോയിൻ്റും ശരാശരി തടസ്സത്തെ പ്രതിനിധീകരിക്കുന്നു. 3 മുതൽ 10 വരെയുള്ള അളവുകളുടെ ± SD. വ്യക്തമായ Kd മൂല്യങ്ങൾ ലഭിക്കുന്നതിന് ഉപയോഗിക്കുന്ന ഒരു ഹിൽ ഫിറ്റ് ആയിരുന്നു കർവ് (സപ്ലിമെൻ്ററി ടേബിൾ 1 കാണുക). രീതികൾ വിഭാഗത്തിൽ വിവരിച്ചിരിക്കുന്നതുപോലെ ഇൻ്റർപോളേറ്റഡ് ഹിസ്റ്റോഗ്രാമുകളിലെ ഹിൽ കോഫിഫിഷ്യൻ്റുകൾ നിർണ്ണയിച്ചു (സപ്ലിമെൻ്ററി ഫിഗ്സ് 3 ഉം 4 ഉം കാണുക). റഫറൻസ് എച്ച് മൂല്യങ്ങൾ Hv1 WT എന്നത് ഡാഷ്ഡ് ലൈനുകളായി കാണിക്കുന്നു. മ്യൂട്ടൻ്റ്, ഡബ്ല്യുടി പാസേജുകൾ തമ്മിലുള്ള സ്ഥിതിവിവരക്കണക്ക് പ്രാധാന്യമുള്ള വ്യത്യാസങ്ങൾ നക്ഷത്രചിഹ്നങ്ങൾ സൂചിപ്പിക്കുന്നു (p 0.05, ചിത്രം. 5d, ). മറുവശത്ത്, മ്യൂട്ടേഷൻ D123A, GBTA യുടെ ഹിൽ കോഫിഫിഷ്യൻ്റ് (p 0.05/14). രണ്ട് ഉപയൂണിറ്റുകളിലും 123-ാം സ്ഥാനത്ത് ചാർജ് ന്യൂട്രലൈസ് ചെയ്യുന്നത് GBTA ബൈൻഡിംഗ് സഹകരണത്തിൽ ശക്തമായ മാറ്റത്തിന് കാരണമായതിനാൽ, രണ്ട് ഉപയൂണിറ്റുകളിലെയും ചാർജ് റിവേഴ്‌സ് ചെയ്യുന്നത് ഒരു ചെറിയ ഫലമേ ഉണ്ടായിരുന്നുള്ളൂ, ചാർജിൻ്റെ വിപരീത ചാനലിൽ ഒരു ഉപയൂണിറ്റ് മാത്രം ഉൾപ്പെടുത്തുന്നതിനായി ഞങ്ങൾ വിശകലനം വിപുലീകരിച്ചു. സി-ടെർമിനൽ സബ്‌യൂണിറ്റിൽ (ചിത്രം 5 ബി) D123R സബ്‌സ്റ്റിറ്റ്യൂഷനോടുകൂടിയ Hv1-ലിങ്ക്ഡ് ഡൈമറുകൾ സൃഷ്‌ടിക്കുകയും GBTA, 2GBI എന്നിവ ഉപയോഗിച്ച് കോൺസൺട്രേഷൻ-റെസ്‌പോൺസ് ഇൻഹിബിഷൻ അളക്കുകയും ചെയ്തു. വൈൽഡ്-ടൈപ്പ് Hv1 (p 0.05). βME യുടെ അഭാവത്തിൽ, D112E I127C Hv1 ഡൈമറിലേക്ക് GBTA ബൈൻഡിംഗ് ചെയ്യുന്ന ഹിൽ കോഫിഫിഷ്യൻ്റ്, കുറയ്ക്കുന്ന ഏജൻ്റുമാരുടെ സാന്നിധ്യത്തിൽ അളക്കുന്നതിനേക്കാൾ വളരെ ഉയർന്നതാണെന്ന് ഞങ്ങൾ കണ്ടെത്തി (ചിത്രം. 6e, സപ്ലിമെൻ്ററി ചിത്രം. 4), ഇത് D112E മ്യൂട്ടേഷൻ സൂചിപ്പിക്കുന്നു. സിസ്റ്റൈൻ 127-ൻ്റെ ക്രോസ്-ലിങ്കിംഗിൻ്റെ ഫലമായുണ്ടായ GBTA ബൈൻഡിംഗ് സഹകരണത്തിൻ്റെ വർദ്ധനവ് ഇല്ലാതാക്കിയില്ല. D112E, I127C Hv1 ഡൈമറുകളുമായി 2GBI ബൈൻഡിംഗിൻ്റെ ഹിൽ കോഫിഫിഷ്യൻ്റ് D112E മ്യൂട്ടേഷനും കാര്യമായി ബാധിച്ചിട്ടില്ല (ചിത്രം 1).6d, സപ്ലിമെൻ്ററി ചിത്രം 3). ഒരുമിച്ച് നോക്കിയാൽ, ഈ കണ്ടെത്തലുകൾ സൂചിപ്പിക്കുന്നത്, ആകർഷകമായ ഇലക്‌ട്രോസ്റ്റാറ്റിക് ഇടപെടലുകളിലൂടെയോ അല്ലെങ്കിൽ സൈറ്റുകൾക്കിടയിൽ അലോസ്റ്റെറിക് കപ്ലിംഗ് വർദ്ധിപ്പിക്കുകയും സഹവർത്തിത്വത്തിന് കാരണമാകുകയും ചെയ്യുന്നു. സഹകരണത്തിലെ ആകർഷകമായ ഇലക്ട്രോസ്റ്റാറ്റിക് ഇടപെടലുകളുടെ സ്വാധീനം D112E മ്യൂട്ടേഷൻ വഴി ഇല്ലാതാക്കാൻ കഴിയുമെങ്കിലും, കോവാലൻ്റ് ബോണ്ടുകളുടെ പ്രഭാവം സാധ്യമല്ല. ഗ്വാനിഡിൻ ഡെറിവേറ്റീവുകളെ എച്ച്വി1 ചാനലുകളുമായി ബന്ധിപ്പിക്കുന്നതിന് ലഭ്യമായ കെമിക്കൽ സ്പേസ് പര്യവേക്ഷണത്തിൽ, ജിബിടിഎ പോലുള്ള 2-ഗ്വാനിഡിനോത്തിയാസോളുകൾക്ക് 2-ഗ്വാനിഡിനോബെൻസിമിഡാസോളുകളേക്കാൾ കുത്തനെയുള്ള സാന്ദ്രത ആശ്രിതത്വം ഉണ്ടെന്ന് ഞങ്ങൾ കണ്ടെത്തി (ചിത്രം. 1 സി) കൂടാതെ മോണോമെറിക് ചാനലുകളും (ചിത്രം. 2a,b) ഒരു ഉപയൂണിറ്റ് ഇൻഹിബിറ്ററുമായി മുൻകൂട്ടി ബന്ധിപ്പിച്ചിരിക്കുന്ന ഡൈമെറിക് ചാനലിലേക്കും (ചിത്രം. 4) GBTA യുടെ Hv1-നെ തടസ്സപ്പെടുത്തുന്നത് ഒരു സമന്വയ പ്രക്രിയയാണ് എന്ന നിഗമനത്തിലേക്ക് ഞങ്ങളെ നയിച്ചു. രണ്ട് ഉപയൂണിറ്റുകളിലെ സംയുക്തങ്ങളുടെ ബൈൻഡിംഗ് സൈറ്റുകൾ അലോസ്റ്റെറിക്കലി കപ്പിൾഡ് ആണ്. GBTA ഓപ്പൺ ചാനലുമായി ബന്ധിപ്പിക്കുന്നു എന്ന കണ്ടെത്തൽ, അനുബന്ധ സംയുക്തം 2GBI32 ന് മുമ്പ് കാണിച്ചത് പോലെ, ഓപ്പൺ സ്റ്റേറ്റിൽ അലോസ്റ്റെറിക് കപ്ലിംഗ് പ്രത്യേകമായി വിലയിരുത്താൻ കഴിയുമെന്ന് സൂചിപ്പിക്കുന്നു. ഞങ്ങളുടെ സഹകരണ ബൈൻഡിംഗ് മോഡൽ എച്ച്വി 1 ന്റെ തടസ്സപ്പെടുത്തൽ (ചിത്രം 2 സി) തടയുന്നതിനെ കണക്കാക്കാനും 2 ജിബിഎ. 2 സി, ജിടിടിഎയുടെ വ്യത്യസ്ത ഇഫക്റ്റുകൾ, ഇത് ബൈൻഡിംഗ് പ്രക്രിയയുടെ വ്യാഖ്യാനത്തെ പിന്തുണയ്ക്കുന്നു. രണ്ട് ബൈൻഡിംഗ് പ്രോട്ടീനിൽ നേടാൻ കഴിയുന്ന പരമാവധി ഹിൽ കോഫിഫിഷ്യന്റ് 2.31 എന്ന 1.31-ലെ (എച്ച്വി 1 പോലുള്ള രണ്ട് സൈറ്റുകൾക്കും (എച്ച്വി 1 പോലുള്ളവ), ഇത് എച്ച്വി 1 വൈൽഡ്-ടൈപ്പ് ബൈന്റ് ചെയ്തു, ഇത് എച്ച്വി 1 I127c. ത്തിൽ 1.88 ആയി ഉയർന്നു സിനർജിസ്റ്റിക് സ്വതന്ത്ര energy ർജ്ജം, ഏറ്റവും താഴ്ന്നതും ഉയർന്നതുമായ അഫിനിറ്റി സൈറ്റുകളുടെ (STATESS) തമ്മിലുള്ള വ്യത്യാസം, എച്ച്വി 1 ഐ 127 സി. ബൈൻഡിംഗ് എന്ന സാഹചര്യത്തിൽ 2.3 കെസിഎൽ / മോഡൽ ഹീമോഗ്ലോബിന്റെ ഓക്സിജന്റെ സഹകരണ പ്രക്രിയയുടെ ഏറ്റവും പ്രസിദ്ധവും നന്നായി പഠിച്ചതുമായ ഉദാഹരണമാണ് (മനുഷ്യ സമർത്ഥമായ കെട്ടിച്ചമച്ച ബൈൻഡിംഗ് സൈറ്റുകൾക്കും (നാല് അലോസ്റ്റോറിക് കപ്പിൾഡ് ബൈൻഡിംഗ് സൈറ്റുകൾ), 45-3.0 ൽ നിന്ന്, വിലകൾ 1.26 മുതൽ 3.64 വരെ KCAL / MOL, പരീക്ഷണാത്മക അവസ്ഥകളെ ആശ്രയിച്ച് 38.THOS, ആഗോള get ർജ്ജസ്വലതകളുടെ കാര്യത്തിൽ, രണ്ട് സിസ്റ്റങ്ങളിലെ വിവിധ എണ്ണം പ്രോട്ടീൻ സുബ്യൂണിറ്റുകളെ പരിഗണിക്കുമ്പോൾ ജിടിഎ ബൈൻഡിയുടെ സഹകരണത്വം o2 ൽ നിന്ന് ഹീമോഗ്ലോബിനിലേക്ക് ബന്ധിപ്പിച്ചിട്ടില്ല. ഞങ്ങളുടെ സിനഞ്ചോപ്ലിമിൽ, ഒരു സുസൂചകരുടെ ഒരു സുസൂചകരുടെ ബൈൻഡിംഗ് എന്നത് അടുത്തുള്ള സുസൂറ്റിനെ ബന്ധിപ്പിക്കുന്ന തരത്തിലുള്ള ഫലമായി. ഈ മാറ്റങ്ങളോടുള്ള പ്രതികരണം, അടുത്തുള്ള സുനീറ്റുകൾ അവരുടെ ബൈൻഡിംഗ് സൈറ്റുകൾ മാറ്റുന്നു, അത് കടുത്ത ബൈൻഡൗണ്ടിംഗ്. മുമ്പ് എച്ച്വി 1 പ്രോട്ടോൺ പെർമിഷ്യൻ പാതയുടെ ഭാഗമാണെന്ന് കാണിക്കുകയും സെലക്ലിറ്റി 27,28 ആയി പ്രവർത്തിക്കുകയും ചെയ്തു. ഞങ്ങളുടെ ഫലങ്ങൾ രണ്ട് എച്ച്വി 1 സുഫുനിറ്റുകളിലെ സെലെയ്ക്കവൽ ഫിൽട്ടറുകൾ ഓപ്പൺ സ്റ്റസ്റ്ററിലായി കൂട്ടിച്ചേർക്കുന്നുവെന്ന് കാണിക്കുന്നു. എച്ച്വി 1 വിഎസ്ടി ആസ്ഥാനമായുള്ള ഒരു സ്കീമാറ്റിക് എച്ച്വി 1-സിവിഎസ്പി ചിമേരയുടെ ക്രിസ്റ്റൽ ഘടനയിൽ. എസ് 1 ന്റെ എക്സ്ട്യൂൾ അറ്റത്ത് ഉൾപ്പെടുന്ന ആലസ്ട്രിക് കപ്ലിംഗിനായി ഏറ്റവും നിർദ്ദേശങ്ങൾ കറുത്ത അമ്പുകൾ ഉപയോഗിച്ച് കാണിക്കുന്നു. . ബന്ധിത ജിബിടിഎയുടെ പ്രവചിച്ച ലൊക്കേഷനുകൾ ഗ്രേ അണ്ഡങ്ങൾ എന്ന് കാണിക്കുന്നു. മെംബ്രൺ പ്ലെയിനിന്റെ എക്സ്ട്രാസെലി ഭാഗത്ത് നിന്ന് കാണുന്ന രണ്ട് വ്യത്യസ്ത ഡിഎം കോൺഫിഗറേഷനുകളിൽ, മെംബ്രൺ വിമാനത്തിന് ലംബമായി ഒരു അക്ഷത്തിന് ചുറ്റും ഡിഎം ഇന്റർഫേസ് രൂപം കൊള്ളുന്നു. രണ്ട് വിഎസ്എസിന്റെ 20 ഡിഗ്രി ഘടികാരദിശയിൽ രണ്ട് എസ് 4 ഹെലൈസുകളുടെ (ഡാഷ് ചെയ്ത അമ്പടയാപങ്ങൾ) വേർതിരിക്കുന്നത് വലതുവശത്ത് കാണിച്ചിരിക്കുന്ന ക്രമീകരണം സൃഷ്ടിക്കുന്നു. ഈ കോൺഫിഗറേഷൻ, അക്കങ്ങൾ D123, i127 എന്നിവ ഒരുമിച്ച് അടുക്കാൻ അനുവാദമുണ്ട്. (സി) സിവാൾസിന്റെ സ്കീമാറ്റിക് പ്രാതിനിധ്യം വിഎസ്ഡി 4 ജി 21 ക്രിസ്റ്റൽ ഘടനയിൽ കണ്ടെത്തിയ ഡിഎം കോൺഫിഗറേഷനിൽ സിവിൽപിപിയിൽ P140 ൽ എച്ച്വി 1 ൽ സ്ഥാനം d123 ആണ്. അവശിഷ്ടങ്ങൾ 123 (123 ഡി / 123 ഡി അല്ലെങ്കിൽ 123r / 123R) തമ്മിലുള്ള വിരസത "എന്നത് തുറന്ന സംസ്ഥാനത്തെ ജിടിടി ബൈൻഡിംഗ് ലെവൽ എന്നതുമായി ബന്ധപ്പെട്ടിരിക്കുന്നു. , വർദ്ധിച്ച സഹകരണം (ചിത്രം 5 ജി) .അവർ, 123a / 123 എ ഡിമാറിന്റെ സഹകരണം വർദ്ധിപ്പിക്കുമെന്ന് പ്രതീക്ഷിക്കുന്നു (ചിത്രം 5E) .ഒരു സാധ്യമോ ഒരു ഹൈഡ്രോഫോബിക് അവശിഷ്ടങ്ങൾ ഒരു ഹൈഡ്രോഫോബിക് അവശിഷ്ടങ്ങൾ സ്ഥാപിക്കുന്നതിന്റെ അസ്ഥിരതയുടെ അസ്ഥിരതയെ തടസ്സപ്പെടുത്തുന്നത്, അതിന്റെ ഫലമായി COPERATIVATIVIVIVILIVE ൽ കുറയ്ക്കുന്നതിനാൽ സ്ഥിരത കുറയ്ക്കാം. സജീവമാക്കലുകളിൽ സ്ഥിതിചെയ്യുന്ന സിയോണ ഗുട്ടീസ് സി-എച്ച്വി 1 (മാനുഷിക എച്ച്വി 1 ൽ സ്ഥിതിചെയ്യുന്ന സിയോണ ഗുട്ടീസ് സി-എച്ച്വി 1) വർദ്ധിച്ചു, ഇത് ഓപ്പൺ സ്റ്റാൻഡിലെ ഒരു ഹൈഡ്രോഫിലിക് പരിതസ്ഥിതിയിലാണ് ഡി 123. എച്ച്വി 1 ചാനലുകളുടെ ഗേറ്റിംഗ് ഒന്നിലധികം പരിവർത്തനത്തിലൂടെ സംഭവിക്കുന്നു , അതിനുശേഷം രണ്ട് സുബൂണിറ്റ്സ് പാതയിലും തുറന്ന ചാലക്യത്തിന് കാരണമാകുന്ന ഒരു പ്രത്യേക പരിവർത്തനം വോൾട്ടേജ് ക്ലാമ്പിന്റെ ഫ്ലൂറസെൻസിലൂടെയാണ് നിരീക്ഷകൻ നിരീക്ഷിച്ചത്, രണ്ടാമത്തെ മാറ്റം D171 എന്ന നിലയിലുള്ള മ്യൂട്ടേഷൻ തിരഞ്ഞെടുക്കപ്പെട്ടുവെന്ന് കണ്ടെത്തി. ഫ്ലൂറസെന്റ് സിഗ്നലിന്റെ അസ്വസ്ഥത അനുരൂപമായ പ്രതികരണത്തിന്റെ പ്രതിപ്രവർത്തിക്കുന്ന ഏകോപിറ്റുകളിലെ ഡി 171 അവശിഷ്ടങ്ങൾ തമ്മിലുള്ള ഇലക്ട്രോസ്റ്റാറ്റിക് ഇടപെടലുകളുടെ സാന്നിധ്യമാണ്. ഈ വ്യാഖ്യാനം അനുരൂപമാണെന്ന് ഞങ്ങളുടെ കണ്ടെത്തൽ ഓപ്പൺ സ്റ്റേറ്റിൽ ഡി 123 നിലപാടിലാണ് സിബിടിഎ ബൈൻഡിംഗ് സൈറ്റുകൾക്കിടയിൽ അല്ലോസ്റ്റർറ്റിക് കപ്ലിംഗിനെ മധ്യസ്ഥമാക്കുന്നു. സൈറ്റോപ്ലാസ്മിക് കോയിഡ്-കോയിൻ ഡൊയ്നിന്റെ ഡിമാൻ ഇന്റർഫേസ് രണ്ട് എസ് 4 ഹെലൈസുകളുള്ള ഡിഎം ഇന്റർഫേസ് (ചിത്രം 7 ബി, ഇടത് പാനൽ) അടങ്ങിയിട്ടുണ്ടെന്ന് ഫ്യൂജിവാര മുതലായ ഇടപെടൽ എസ് 4 ഹെലിക്സിനെയും സിസിഡിഎയെയും ബന്ധിപ്പിക്കുന്ന പ്രദേശത്തെ മുഴുവൻ വി.എസ്ടിയും പ്രവർത്തന വിശകലനവും ഒരു ട്രാൻസ്മെൻബ്രെൻ പിഎച്ച് ഗ്രേഡിയറുടെ അഭാവം, എച്ച്വി 1 ചാനലുകൾക്ക് ഗണ്യമായ മെംബ്രൻ ഡിപോളറൈസേഷൻ ആവശ്യമാണ്, അവിടെ ചാനൽ പ്രധാനമായും അടച്ചിരിക്കും. അതിനാൽ, കണ്ടെത്തിയ എസ് 4-എസ് 4 ഇന്റർഫേസ് ഓഫ്-സ്റ്റേറ്റ് സുസൂനിറ്റ് കോൺഫിഗറേഷനെ പ്രതിഫലിപ്പിക്കുന്നു. അടച്ച സംസ്ഥാനങ്ങൾ, മോണി മറ്റുള്ളവരുടെ കണ്ടെത്തലുകളുമായി പൊരുത്തപ്പെടുന്ന ഒരു ആശയം. ഗേറ്റിംഗിനിടെ എസ് 1 39 നീങ്ങുന്നു. ഇവിടെ, ഓപ്പൺ അവസ്ഥയിൽ, എസ് 1 ഹെലിക്സിന്റെ എക്സ്ട്രാസ്റ്റേറ്റിക് ഇടപെടലുകളുടെ അട്യൂട്ടിറക്ട് അറ്റങ്ങൾ പ്രാഥമിക വൈദ്യുതധാരകങ്ങളെ പിന്തുണയ്ക്കുന്നുവെന്ന് ഞങ്ങൾ കാണിക്കുന്നു, വിപുലീകരിച്ച എസ് 4-എസ് 4 ഇടപെടലുകൾ പരസ്പരം ഇടപെട്ട് നേരിട്ട് ഇടപെടാൻ പരസ്പരം ഇടപഴകട്ടെ, മെംബ്രൻ തലം ലംബമായ ഒരു അക്ഷം, രണ്ട് എസ് 4 ഹെലൈസുകളുടെ പുറം അറ്റങ്ങൾ വേർതിരിച്ച്, ഒരു എസ് 1-എസ് 1 കോൺഫിഗറേഷൻ തീർന്നു ഞങ്ങളുടെ കണ്ടെത്തലുകൾ ഉപയോഗിച്ച് (ചിത്രം 7 ബി, വലത് പാനൽ) .ഓൺ സ്റ്റേറ്റിൽ ചാനലിനായി ഞങ്ങൾ ഈ കോൺഫിഗറേഷൻ ശുപാർശ ചെയ്യുന്നു. ഒരു മോണോമറിനെന്ന നിലയിൽ സിവിസ്റ്റൽ ഘടന ഒരു ഡിഎം സംസ്ഥാനത്ത് പിടിച്ചെടുക്കുമെന്ന് കരുതപ്പെടുന്നുണ്ടെങ്കിലും. ഈ ഡിമിംഗിലെ എസ് 1 ഹെലൈസുകളുടെ പുറം അറ്റങ്ങൾ ഒരുമിച്ച് ചേർന്ന് ഒത്തുചേരുന്നു, മൊത്തത്തിലുള്ള കോൺഫിഗറേഷൻ എച്ച്വി 1 (ചിത്രം 7 സി). സിവാർട്ട്സ് ഡിംസ് എസ് 1 സംവദിക്കുന്ന ഒരു ഇന്റർഫേസ് രൂപീകരിക്കുന്നതിന് ഈ പ്രോട്ടീനുകളുടെ വിഎസ്ഡികൾക്ക് അന്തർലീനമായ പ്രവണതയുണ്ട്. ശുക്ല കോശത്തിലെ എച്ച്വി 1 ന്റെ പ്രധാന പങ്ക് ഈ ചാനൽ ആൺഗ്ലിഡൈൻലിറ്റിയുടെ നിയന്ത്രണത്തിനായി ആകർഷകമായ ഒരു മയക്കുമരുന്ന് ലക്ഷ്യമാക്കി മാറ്റുന്നു. ബ്രെസ്റ്റ് 12 അല്ലെങ്കിൽ കോളക്ടർ കാൻസർ 13 ഉള്ള രോഗികളിൽ അതിജീവനം 11 ബി-സെൽ മയക്കുമരുന്ന് നിയമപരമായി ലക്ഷ്യമിടുന്നതായി കരുതപ്പെടുന്നു. എച്ച്വി 1 സുസൂനിറ്റ് തുറക്കുക, വർദ്ധിച്ചുവരുന്ന ബൈൻഡിംഗ് അടുപ്പം വർദ്ധിപ്പിക്കും, എച്ച്വി 1 ചാനലുകളെ ടാർഗെറ്റുചെയ്യാൻ കൂടുതൽ ശക്തമായ മരുന്നുകളുടെ വികാസത്തിലേക്ക് നയിച്ചേക്കാം. സ്റ്റാൻഡേർഡ് പിസിആർ ടെക്നിക്കുകൾ ഉപയോഗിച്ച് ഹ്യൂമൻ എച്ച്വി 1 ന്റെ സൈറ്റ് സംവിധാനം ചെയ്ത മ്യൂട്ടജെനിസ്. എച്ച്വി 196, 228-273, 228-273, 228-273 എന്നീ നിലകളിൽ 1-113, 240-576 സെഗ്മെൻപി18.ഇ, എച്ച്വി 1 ലിങ്കുചെയ്ത ഡിഎംപി 12.in മാറ്റിസ്ഥാപിച്ചു ഒരു സുഫുനിറ്റിന്റെ സി-ടെർമിനസ് ജിജിഎസ്ഇജിഗ്സ്ഗ്സ്ഗ് ലിങ്കർ വഴിയുള്ള രണ്ടാമത്തെ സുമിനസിന്റെ എൻ-ടെർമിനസിനെ GGSgggsggsgsggsgsgchery- ന്റെ n-ടെർമിനസിലേക്ക് ബന്ധിപ്പിച്ചിരിക്കുന്നു. വിവിധ നിർമാണമുള്ള പിജിഎംഎച്ച്ഇ പ്ലാസ്മിഡുകൾ (ന്യൂ ഇംഗ്ലണ്ട് ബയോലാബ്സ്), ആർഎൻഎ സിന്തസിസ് എന്നിവയിൽ രേഖപ്പെടുത്തി ടി 7 അമിത് എംഎംസെഡ് എംമാചേജ് എംമാചേജ് എംമാചേജ് എംഎംഎസ്) .1-3 ദിവസം മുമ്പ്, Xenopus ocytes- ലേക്ക് (സെല്ലിന് 50 എൻഎൽ, സെല്ലിന് 50 ാം തീയതി, സെല്ലിലേക്ക് 50, veenopus Levis (NACKOW) ലഭിച്ചു ഇക്കോസൈറ്റ് ബയോസ്സിയർസിൽ നിന്ന്. . 2-ഗുനിഡിയോ-ബെൻസിമിഡാസോൾ [1], 2-ഗുനിഡിയോ-ബെൻസോത്തിസോൾ [2], (4-മെത്തിലി-1,3-ത്യാസോൾ -2 yl) ഗ്വാനിഡിൻ [5], (5], (5], (5], (5], (5], (5]) -ഡിയസോൾ -2 yl) ഗ്വാണിഡിൻ) 5-കാർബോക്സിലേറ്റ് [9], (2-ഗുനിഡിയോനോ-4-മെത്തിൽ -5-കൾ) എഥൈൽ അസറ്റേറ്റ് [10] എഥൈൽ അസറ്റേറ്റ് [10] സിഗ്മ-അൽഡ്രിക്.ഫാമോതിഡിൻ [7] - (4-ക്ലോറോഫെനൈൽ) -1,3-thiazol-2-yl] ഗ്വാണിഡിൻ [11], 1- [4- (3,4-ഡൈമെത്തോക്സിഫെനൈൽ) -1,3- thiazol-2-Yl] ഗ്വാണിഡിൻ [12] മാട്രിക്സ് സയന്റിഫിക്. കുറഞ്ഞത് 99% പരിശുദ്ധി. 2-അമിനോ -4- (ട്രിഫ്ലൂറോമെത്തൈൽ ആസിഡിന്റെ (2.02 ഗ്രാം, 4.5 mml ഹൈഡ്രോക്ലോറൈഡ് (2.02 ഗ്രാം, 4.5 എംഎംഎൽ) സസ്പെൻഷനായി സോളി ഡൈസൈഡൈമൈഡ് (380 മില്ലിഗ്രാം, 4.5 mmol), തത്ഫലമായുണ്ടായ വൈവിധ്യമാർന്ന മിശ്രിതം 4 മണിക്കൂർ തീവ്രതയോടെ റിഫ്ലക്സ് ചെയ്യുക. 65 ° C) മണിക്കൂറുകളോളം, എന്നിട്ട് എഥൈൽ അസറ്റേറ്റ് / പെട്രോളിയം ഈഥറിൽ നിന്ന് ഒരു വെളുത്ത സോളിഡ് (500 മില്ലിഗ്രാം, 48%) നൽകാൻ പുന .സ്ഥാപിച്ചു; എംപി 221-222 ° C (വെളിച്ചം 225-226 ° C) 45; 1 എച്ച് എൻഎംആർ (500 മെഗാഹെർസ്, ഡിഎംഎസ്ഒ-ഡി 6): δ [പിപിഎം] = 7.25 (വളരെ ബ്രോഡ് എസ്, 4 എച്ച്), 7.40 (ഡി, 1 മണിക്കൂർ J = 8.1 എച്ച്ഇ), 7.73 (ഡി, 1 എച്ച്), 7.92 (ഡി , 1 എച്ച്, j = 8.1 HZ) .13 സി എൻഎംആർ (200 മെഗാഹെർത്ത് (D, J = 3.5 HZ), 117.5 (D, j = 3.5 HZ), 121.7, 124.6 (Q. = 272 HZ), 126.1 (Q, J = 272 HZ) = 31.6, 152.1, 158.4, 175.5.hrms (ഇഎസ്ഐ): എം / Z- Z കണക്കാക്കിയ മൂല്യം (m + h) +: 261.0416, കണ്ടെത്തി : 261.0419. നാഫ്തോ [1,2-ഡി] തിയാസോൾ -25-അമൈൻ (300 മില്ലിഗ്രാം, 1.5 എംഎംഇൻ), മുമ്പ് വിവരിച്ചതുപോലെ സമന്വയിപ്പിച്ചു, ഒരു ചെറിയ ടെസ്റ്റ് ട്യൂബ് 300 മില്ലിഗ്രാം (വലിയ അധിക അധിക) സയനമൈഡിലും 1.0 മില്ലി കോൺ കൺകിംഗ് ഹൈഡ്രോക്ലോറിക് ആസിഡ് വേഗത്തിൽ ചേർത്തു, മിശ്രിതം 2 മിനിറ്റ് ഓയിൽ കുളിയിൽ സൂക്ഷിച്ചു. ചെറിയ കഷണങ്ങളായി വിഭജിച്ച് ഇളം മഞ്ഞ മര്ഫോസസ് സോളിഡ് നൽകുന്നതിന് വെള്ളത്തിൽ കഴുകി. (38 മില്ലിഗ്രാം, 10%) എംപി 246-250 ° C; 1H എൻഎംആർ (500 മെഗാഹെർത്ത്): δ [പിപിഎം] = 7.59 (ടി, 1 മണിക്കൂർ, j = 8.2 മണിക്കൂർ), 7.66 (ടി, 1 മണിക്കൂർ J = 8.3 HZ), 7.77 (D, 1 മണിക്കൂർ , J = 8.6 HZ), 7.89 (D, 1 മണിക്കൂർ J = 8.6 HZ), 8.02 (D, 1 മണിക്കൂർ J = 8.2 HZ), 8.35 (D, 1 മണിക്കൂർ J = 8.3 HZ) .13 സി എൻഎംആർ (150 MHZ, DMSO-D6): δ = 119.9, 122.7, 123.4, 123.6, 126.7, 127.1, 128.7, 122.1, 140.7, 169.1.H.H.HRMS (E കൾ): M + Z കണക്കാക്കിയ മൂല്യം. C12H11nms (E + h) +: 243.0699 , കണ്ടെത്തി: 243.0704. PCLAMP10 സോഫ്റ്റ്വെയർ ഉപയോഗിച്ച് ഒരു ആക്സോപാച്ച്, എക്സ്ട്രാസെല്ലുലാർ സൊല്യൂഷനുകളുടെ ആക്സിറ്റിഫീറുകളുടെ ആന്തരികവും ബാഹ്യവുമായ പാച്ചുകളിൽ പ്രോട്ടോൺ പ്രവാഹങ്ങൾ അളന്നു. 100 മില്ലീമീറ്റർ 2- (എൻ-മോർഫോളിനോ ) എത്തനേസുൾഫോണിക് ആസിഡ് (മെസ്), 30 മില്ലീമീറ്റർ ടെറ്റ്രാഹൈലമോണിയം (ചായ) മെസിലേറ്റ്, 5 മില്ലീ ക്ലോറൈഡ്, 5 മില്ലീമീറ്റർ ടീ ക്ലോറൈഡ്, 5 മില്ലീമീറ്റർ ടീം ചായ ഹൈഡ്രോക്സൈഡ് ഉപയോഗിച്ച് പിഎച്ച് 6.0 ൽ 22 ± 2 ഡിഗ്രി സെസിൽ ഒരു ആക്സസ് റെസിസ്റ്റുകളുണ്ട്. ) ഉത്ഭവസ്ഥാനം 8.1 (ഒറിജിബ്). എച്ച്വി 1 ഇൻഹിബിറ്ററിന്റെ വിവിധ സാന്ദ്രത അടങ്ങിയിരിക്കുന്ന പരിഹാരങ്ങൾ ബാത്ത് വഴി ഒരു വിസി -6 പെർഫ്യൂഷൻ വാൽവ് സിസ്റ്റത്തിലേക്ക് കണക്റ്റുചെയ്തിരിക്കുന്ന ഒരു മാൻസ്റ്റുൾട്ട് (ട്രാൻസിസ്റ്റോർ- ട്രാൻസിസ്റ്റോർ ലോജിക്) സിഗ്നലുകൾ. ഒരു മൾട്ടി-ട്യൂബ് പെർസെറ്റ് (ഓട്ടോമേറ്റ് ഡെലിവറി ടിപ്പ്) ഉപയോഗിച്ച് ഒരു മൾട്ടി-ട്യൂബ് ഡെലിവറി ടിപ്പ് (ഓട്ടോമേറ്റ് സി.ഐ.വി.ഇ.എച്ച്. +120 എംവി ഡിപോളറൈസിംഗ് പൾസ്.ജിവി അളവുകൾ മുമ്പ് വിവരിച്ചതുപോലെയാണ് .18,20.0 എംവിയിൽ രേഖപ്പെടുത്തിയിട്ടുണ്ട്. നിലവിലെ ക്ഷയത്തിന്റെ 18-ാം നമ്പറിനായി ശരിയാക്കാൻ ഉപയോഗിക്കുന്നു. GV ഗ്രാഫ് ബോൾട്ട്സ്മാൻ സമവാക്യത്തിന് അനുയോജ്യമാണ്: ഗാനലുകളുടെയും ഇൻഹിബിറ്ററുകളുടെയും (സപ്ലിമെന്റ് ടേബിൾ 1) (കെഡി) കുന്നിൻ സമവാക്യത്തോടെ: ഇൻ ഇൻഹിബിറ്റർ ഐ, എച്ച്, എച്ച്, എച്ച്, എച്ച് എന്നിവയുടെ സാന്ദ്രതയാണ്. മലബന്ധം കണക്കാക്കുന്നത്, സമനില (2) എന്ന നിലയിൽ പുന ar ക്രമീകരിച്ചിരിക്കുന്നു: